注射用尿多酸肽的细菌内毒素检查方法

2012-06-27刘丽梅武玉虹姚红谊

中国药业 2012年16期

刘丽梅，武玉虹，姚红谊

注射用尿多酸肽是采用现代生物技术从健康人的尿液中提取纯化制得的，含多种有机酸和相对分子质量小于6 000的多肽等组成的活性物质，加适量赋形剂经冷冻、干燥制成的冻干粉针剂。为控制热原，参考2010年版《中国药典(二部)》[1]，用不同厂家的鲎试剂对3批样品的细菌内毒素检查方法进行了研究，现报道如下。

1 药品与试剂

细菌内毒素工作标准品(WSE):批号为1005210，规格为10 EU/支，湛江安度斯生物有限公司。鲎试剂(TAL):批号为1106202、灵敏度为 0.5EU/mL、规格为0.1mL/支，批号为 1106271 和1108222，灵敏度为0.25EU/mL、规格为0.1mL/支，湛江安度斯生物有限公司;批号为 1101200，灵敏度为 0.25EU/mL，规格为 0.1mL/支，湛江博康海洋生物有限公司。细菌内毒素检查用水(BET用水):批号为1104130，内毒素含量小于 0.015 EU/mL，规格为 2 mL/支，湛江安度斯生物有限公司。注射用尿多酸肽:规格为1 g(以多肽含量计，下同)，批号为 S110601，S110602，S110603，自制。

2 方法与结果

2.1 TAL灵敏度复核

根据 TAL 灵敏度标示值(λ =0.5 EU/mL，λ =0.25 EU/mL)，将WSE用BET用水溶解，置旋涡混合器上混合15 min，制成质量浓度为 1.0，0.5，0.25，0.125，0.0625 EU/mL 的 WSE 标准溶液。按2010年版《中国药典(二部)》细菌内毒素检查法规定，复核4批TAL的灵敏度。结果灵敏度实测值(λC)在0.5λ～2.0λ之间，4批TAL灵敏度均符合规定，可用于试验。结果见表1。

表1 TAL灵敏度复核结果

2.2 细菌内毒素限值(L)计算

计算公式为 L=K/M，式中 K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂 K=5 EU/(kg·h);M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，参考尿多酸肽注射液用法用量，注射用尿多酸肽成人每小时最高剂量为2 g[2－3]，成人体重按60 kg 计，则 M=2 000/60=33.33 mg/(kg·h)。代入公式，L=5/33.33=0.15 EU/mg。

2.3 供试品有效测试浓度(C)计算[1]

根据最大有效稀释倍数(MVD)=CL/λ，取 MVD=1，则 C=λ/L。目前市售的鲎试剂 λ在0.03～1.0 EU/mL，以TAL灵敏度0.03 EU/mL为基准，供试品相应的有效测试质量浓度 C=0.03/0.15=0.20 g/L;以 TAL 灵敏度 1.0 EU/mL 为基准，供试品相应的有效测试质量浓度 C=1.0/0.15=6.67 g/L;因此，供试品的有效测试质量浓度范围为0.20～6.67 g/L。

2.4 干扰试验预试验[1]

取供试品1批，先用BET用水10 mL溶解，再稀释10倍后作为原液(10 g/L)，然后按 3，6，12.5，25 倍的梯度稀释，得 3.33，1.67，0.80，0.40 g/L 4 种质量浓度的稀释溶液(NPC)，接着以供试品各稀释溶液将WSE稀释成含细菌内毒素2λ的系列内毒素溶液(PPC)，对1批λ为0.5 EU/mL的TAL作干扰试验，并同时作阳性和阴性对照。结果表明，供试品溶液在质量浓度不超过1.67 g/L时不干扰试验，见表2。

表2 细菌内毒素干扰试验预试验结果

2.5 干扰试验[1]

分别以BET用水和3批以BET用水稀释为1.67 g/L的供试品溶液，将 WSE 稀释成含细菌内毒素 2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25 λ共4种浓度的系列内毒素溶液，对3批λ为0.25 EU/mL的TAL作干扰试验，同时作阴性对照。结果 ES均在0.5λ～2.0λ范围内，且 Et均在 0.5 ES～2.0 ES范围内，见表 3。表明 3 批供试品溶液在该质量浓度下均不干扰两个厂家生产的鲎试剂内毒素检查，确认供试品对鲎试剂检查无干扰。