注射用转化糖中细菌内毒素的检测

王宗春 姜俊勇 宋金春

注射用转化糖为复方制剂。临床用于需要非口服途径补充能量的患者，尤其是烧创伤、术后、感染等胰岛素抵抗(糖尿病状态)患者及药物和酒精中毒患者的能量补充。中国药典2010年版第2部关于注射剂热原检查方法有家兔法和细菌内毒素检查法2种，其中细菌内毒素检查法具有灵敏度高、重现性好、简便易行等优点，目前尚未有该制剂细菌内毒素检查的报道。笔者参照中国药典2010年版2部［1］，应用鲎试剂法对注射用转化糖进行研究，为该品种细菌内毒素检测方法的建立提供依据。

1 实验材料

1.1 仪器 恒温水浴箱(江苏南通嘉程仪器有限公司);微量取液器(50～250 μl)(上海金林生化试剂仪器厂);SW-80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);细菌内毒素检查用具(厦门鲎试剂实验厂)。

1.2 药品与试剂 注射用转化糖(规格:每瓶果糖12.5g和葡萄糖12.5g，海南灵康制药有限公司，批号:090701，091123，091227);细菌内毒素检查用水(BET水，规格:10ml，厦门鲎试剂实验厂，批号:091201);细菌内毒素工作标准品(规格:10 EU/支，中国生物制品检定所，批号:2009-7);鲎试剂(规格:0.1ml，标示灵敏度:0.5 EU/ml，厦门鲎试剂实验厂，批号:091149);鲎试剂(规格:0.1ml，标示灵敏度:0.5 EU/ml，湛江安度斯生物有限公司，批号:090325)。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核 按照《中国药典》2010年版2部附录XI E细菌内毒素检查法［1］进行操作，结果见表1。结果表明所用2批鲎试剂灵敏度测定值 λc均在0.5λ～2.0λ(λ为灵敏度标示值)，符合规定，可用于实验。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果

2.2 细菌内毒素限值(L)的确定 细菌内毒素限值L=K/M［1］，式中K为人每千克体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，注射剂为5 Eu·kg－1·h－1;M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，按照注射用转化糖说明书用法用量，M为500mg·kg－1·h－1(以果糖计)，因此本品的细菌内毒素限值L=K/M=0.01 EU/mg。

2.3 样品最小有效稀释浓度(C)的确定 样品有效稀释浓度C=λ/L，其中λ为鲎试剂常用灵敏度，L为细菌内毒素限值，即0.01 EU/mg，目前市售的鲎试剂 λ 常为 0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 EU/ml，对应的样品最小有效稀释浓度为50.0、25.0、12.5、6.0、3.0mg/ml(以果糖计)。

2.4 干扰预试验［2，3］用BET水将注射用转化糖配制成果糖浓度分别为 50.0、25.0、12.5、6.0、3.0mg/ml的系列溶液，作为供试品阴性对照(NPC)系列。另制备同样浓度的供试品系列溶液，使每一浓度的供试品溶液中都含有2 λ细菌内毒素，作为供试品阳性对照(PPC)系列。每一供试品浓度重复两管，按常规设立阳性对照(PC)管和阴性对照(NC)管。用λ为0.5 EU/ml的鲎试剂与上述系列溶液进行反应，依文献［1］操作，结果见表2。初步判断当果糖浓度在50.0mg/ml下时，供试品对细菌内毒素检查无干扰现象。

表2 干扰预试验结果

2.5 干扰确证试验 根据干扰预试验结果，用果糖浓度为50.0mg/ml的供试品溶液及BET水分别稀释细菌内毒素工作标准品，配成细菌内毒素最终浓度分别为 1.0、0.5、0.25、0.125 EU/ml的系列溶液，分别取0.1ml加入到已复溶的2个不同厂家生产的鲎试剂(λ为0.5 EU/ml)管内，每个浓度平行做4管，另取供试品溶液做2支阴性对照管，依文献［1］进行干扰试验，结果见表3，Et/Es在0.5～2(Es为用BET水制成的细菌内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值，Et为用供试品溶液制成的内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值)，说明果糖浓度为50mg/ml的供试品溶液对鲎试剂与细菌内毒素之间的凝集反应既无抑制作用，也无增强现象。见表3。

表3 干扰试验结果

2.6 样品的细菌内毒素检查 取3批注射用转化糖，稀释成果糖浓度为50mg/ml，使用两个厂家生产的鲎试剂(灵敏度λ均为0.5 EU/ml)，按中国药典2010年版2部附录细菌内毒素检查法检查，结果全部呈阴性。

3 讨论

不同厂商生产的鲎试剂在生产工艺、配方、质量参数等各方面都有一定的差异，有时会影响到鲎试剂的抗干扰能力［4］。故本文采用厦门鲎试剂实验厂和湛江安度斯生物有限公司2个厂家的鲎试剂对3个批号的样品进行干扰试验，结果显示3批样品稀释成果糖浓度在50mg/ml下时，分别使用2个厂家的鲎试剂，样品不干扰细菌内毒素与鲎试剂的凝集反应，因此使用鲎试剂方法检查注射用转化糖中细菌内毒素是可行的。

1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).第2010版.北京:中国医药科技出版社，2010.附录99-102.

2 马建丽，陈新文，王明媚，等.细菌内毒素检测法用于蔗糖铁注射液检测的可行性研究.中国药物应用与监测，2009，6:147-149.

3 王晓蕾，白林，陆路，等.注射用炎琥宁细菌内毒素检查法.中国药物应用与监测，2007，4:41-43.

4 高玉清，纪敬娟，冀增.美洛昔康注射液细菌内毒素检查法的研究.河北医药，2009，31:1661-1662.