5种乳腺癌相关指标血清检测的临床价值分析

董学君 金龙金 吕建新

乳腺癌发病率占妇科肿瘤的31%，病死率在肿瘤中居第2位;近年来乳腺癌发病率有升高趋势。乳腺癌早期诊断和早期治疗，是降低病死率的有效方法，但至今为止仍缺乏有效的早期实验室诊断指标。CA15-3是目前应用最多的乳腺癌指标，但只有不足10%的早期乳腺癌和30%～75%的晚期乳腺癌患者出现阳性结果［2，3］。在乳腺癌血清学指标的研究中，除CA153外，还涉及hMAM、NF-κB、OPN和MMP-13等，但这些指标对乳腺癌诊断的临床价值尚无明确的结论，本文就这些指标在乳腺癌诊断中的价值做进一步验证和比较。

材料与方法

1.临床资料:乳腺癌女性患者血清标本共59例，患者平均年龄43.6(31～58)岁，均取自浙江省绍兴市人民医院就诊患者;同时取正常对照的健康女性外周血标本35例，对照者平均年龄40(18～50)岁。各取每例外周血5ml，3000g/min离心5min，上层血清转移至EP管中，-80℃超低温冰箱保存备用。59例乳腺癌患者均经病理确诊，分期为:Ⅰ期15例、Ⅱ期19例、Ⅲ期19例和Ⅳ期6例。

2.主要试剂:hMAM、NF-κB、OPN 和 MMP-13采用ELISA法检测，试剂产于美国RD公司;CA153采用全自动化学发光仪检测，试剂产于美国雅培公司。

3.主要设备:MK-3酶标仪(国鼎环科技术有限公司)，i2000免疫化学分析仪(美国雅培公司)，超低温冰箱(SANYO公司)。

4.检测方法:hMAM、NF-κB、OPN 和 MMP-13的 ELISA检测方法，均参照说明书，以空白为对照，450nm波长测量OD值，标准品定标制作标准曲线，换算出血清中各指标的浓度。血清CA15-3浓度采用美国雅培i2000免疫化学分析仪进行检测，按说明书操作进行。

5.统计学方法:运用SPSS 16.0统计学软件进行分析，计量资料应用均数±标准差(±s)来描述，阳性率的比较采用卡方检验;ROC曲线评价各指标的诊断价值，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.乳腺癌患者血清5种指标检测结果:乳腺癌和正常对照组5项指标阳性率的比较，差异具有统计学意义的有 hMAM、NF-κB、CA153和 OPN(表1)。

表1 5项指标在乳腺癌和正常对照组的阳性率［n(%)］

2.5 种指标诊断乳腺癌的临床价值:5项指标经ROC曲线分析(图1)，获得诊断的cut-off值及诊断敏感性和特异性(表2)。根据诊断效能排列，诊断价值从高到低的顺序为:hMAM、NF-κB、CA153、OPN和MMP-13。

3.5种指标与乳腺癌不同分期的关系:不同病理分期各指标诊断效能的统计分析，CA153和OPN最好，用于与其他期的区分具有统计学意义(表3)。

图1 5项指标ROC曲线分析

表2 5项指标cut-off值及敏感性和特异性

讨 论

本组结果显示，诊断乳腺癌的综合效能hMAM和NF-κB的效果更佳，其次是CA153、OPN和MMP-13。

hMAM基因的cDNA序列长503bp，其中开放阅读框279bp，共编码93个氨基酸，相对分子质量10.5kDa。原发性乳腺癌hMAM表达约有81%阳性，有23%hMAM过度高表达，有的高出正常乳腺组织10倍;hMAM表达与肿瘤分级、分期、组织学分类和激素受体状况无明显相关性［4］。但也有不同的结果，原发和继发性乳腺癌活检组织中有70%～80%为hMAM表达阳性;原发性乳腺癌细胞hMAM表达高达97%，hMAM与亲脂素B的表达在雌激素受体(ER)阳性癌中更多见［5］。免疫组化技术和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测hMAM均有报道，不同方法学的hMAM表达阳性率有一定差异，但非乳腺癌组织中均未见hMAM表达。本文作者曾建立并报道了定量RT-PCR检测外周血中hMAM表达的方法，其灵敏度达到每104～105个血细胞中1个乳腺癌细胞的水平［6，7］;观察到乳腺癌不同细胞株hMAM表达程度存在较大的差异。本研究是应用ELISA方法检测hMAM的表达，方法学更简便易行，但结果仍提示对乳腺癌有较好的诊断价值。NF-κB是具有多种生物学活性的转录因子，正常细胞中NF-κB主要存在于胞质中，与IκB结合形成无活性的三聚体。当细胞受刺激时，NF-κB主要通过p65亚基在细胞核中调控多种基因的表达，在肿瘤形成和转移过程中发挥重要作用［8］。目前国内外多数研究表明，乳腺癌组织 NF-κB表达与乳腺癌的转移及HER2高表达相关;本组结果中，乳腺癌患者NF-κB高表达，可能也是相同的原因。OPN是细胞外基质中一种分泌性磷酸化糖蛋白，最初分离于骨基质和牙齿中［9］。近年来越来越多的研究发现OPN与全身多种肿瘤的发生、发展、转移和预后相关，是一种恶性肿瘤生长的血清学指标［10］;本组结果显示，OPN与CA153在不同病理分期(Ⅰ～Ⅳ期)间的差异具有统计学意义，并为晚期升高更明显，说明这2个指标在乳腺癌早期表达阳性率低，提示当前应用最多的CA153用于早期诊断的价值有限。对乳腺癌诊断应用中，MMP-13的价值相对较差。

表3 5项指标在不同病理分期的阳性率［n(%)］

目前，早期乳腺癌诊断仍无理想的实验室指标，本组各指标对Ⅰ～Ⅳ期乳腺癌的区分效果分析显示，CA153和OPN指标的价值较大，但如何提高诊断的灵敏度，做到更早期诊断，还需进一步研究。

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