禽流感灭活疫苗免疫鹌鹑效力试验

杨峻　王红琳等

摘要：禽流感灭活疫苗对鹌鹑首次免疫试验结果表明，２０日龄、２８日龄和３５日龄的鹌鹑首次免疫禽流感疫苗２周后，部分鹌鹑能测定到ＡＩ－ＨＩ抗体，３周时抗体水平达到高峰，ＡＩ－ＨＩ抗体为５ｌｏｇ２以上，但维持时间很短，４周时开始下降，５周时降至３ｌｏｇ２以下；二次免疫２周后抗体达到７．６ｌｏｇ２，3周时抗体开始下降，６周时降至３ｌｏｇ２以下；不同免疫途径免疫效果比较，皮下注射抗体水平明显高于肌肉注射抗体水平；试验同时设鸡免疫试验为对照，相同剂量二次免疫后鸡的抗体水平明显高于鹌鹑，且维持时间可达６周以上；疫苗的安全性试验表明，免疫鹌鹑未见任何不良临床反应，精神、食欲和体重均正常。

关键词：禽流感；灭活疫苗；免疫；鹌鹑；效果评价

中图分类号：Ｓ８３９；Ｓ８５５．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）24－5734-02

高致病性禽流感对鹌鹑产业发展威胁很大［１，２］，目前商品化的禽流感疫苗效力检验是以鸡作为试验动物［３］，国内外有关疫苗对鹌鹑的免疫效果评价试验报告较少。通过对不同日龄鹌鹑不同免疫次数的免疫试验，评价禽流感疫苗对鹌鹑的免疫效果。

１ 材料与方法

１．１ 试验材料

鹌鹑由湖北神丹健康食品有限公司提供的２００只２０日龄的非免疫鹌鹑，分为３个不同日龄免疫组和非免疫对照组，每组5０只。自然条件下笼养。试验用鸡为１８日龄海兰褐非免疫雏鸡５０只，本实验室孵化，自然条件下笼养。禽流感灭活疫苗：重组禽流感病毒Ｈ５亚型二价灭活疫苗（青岛易邦生物工程有限公司生产，生产批号：２０１１１４２）。

１．２ 试验方法

１．２．１ 不同日龄首次免疫 分别在鹌鹑２０日龄、２８日龄和３５日龄时颈背皮下注射０．２ｍＬ，免疫后２、３、４、５周随机取样，免疫组和对照组各５只鹌鹑采血，分离血清，检测ＡＩ－ＨＩ抗体。同时设１８日龄雏鸡免疫组和非免疫组，观察疫苗免疫效果。

１．２．２ 二次免疫试验 ２０日龄鹌鹑在第一次免疫后３周（４１日龄，产蛋前）进行二次免疫（０．３ｍＬ）。二次免疫后每周随机取样，免疫组和对照组各５只鹌鹑采血，分离血清，检测ＡＩ－ＨＩ抗体。同时设雏鸡二次免疫组，观察疫苗免疫效果。

１．２．３ 不同免疫途径的免疫试验 将首次免疫试验（ＡＩ－ＨＩ抗体下降为０）的６０只鹌鹑（７０日龄）分为３组，皮下注射和胸肌注射免疫组各２０只，另２０只为对照组。免疫后每周采血，检测ＡＩ－ＨＩ抗体。

１．２．４ 疫苗对鹌鹑的安全性试验 每周测定免疫组和对照组鹌鹑的体重，观察精神状态，解剖免疫局部组织的病变，评价疫苗的安全性。

１．２．５ 抗体检测 参照文献［２］中常规的血凝抑制试验（ＨＩ）检测，ＡＩ－ＨＩ抗原购于哈尔滨兽医研究所；１％鸡和鹌鹑红细胞为本实验室制备。为了解两种红细胞在作ＡＩ－ＨＩ检测时是否存在差异，本试验进行鸡和鹌鹑红细胞检测抗原和抗体效果比较。

２ 结果与分析

２．１ 不同日龄首次免疫效果

由表１可知，２０、２８、３５日龄的鹌鹑首次免疫禽流感疫苗２周后，部分鹌鹑能测到ＡＩ－ＨＩ抗体，３周抗体水平达到高峰，ＡＩ－ＨＩ抗体为５log２以上，但维持时间很短，４周后开始下降，５周降至３log２以下。鸡疫苗免疫组抗体能维持到５周以上。

２．２ 二次免疫试验效果

由表２可知，２０日龄鹌鹑在第一次免疫后３周进行二次免疫，免疫量０．３ｍＬ／只，免疫后２周抗体达到７．６log２，3周后抗体下降，６周降至３log２以下。二次免疫雏鸡组抗体水平能持续到６周以上。

２．３ 不同途径免疫试验效果

由表３可知，７０日龄的成年鹌鹑分别经颈背皮下和肌肉注射进行二次免疫，结果为皮下免疫组１周抗体明显上升，２周达到高峰，抗体为８．２ｌｏｇ２，４周后开始下降；肌肉注射组２周才测定到抗体，３周抗体达高峰，且抗体水平明显低于皮下免疫组。

２．４ 疫苗对鹌鹑安全性试验

试验结果表明，禽流感油乳剂灭活疫苗免疫鹌鹑后未见不良临床反应，精神、食欲和体重正常；每周抽检１～２只鹌鹑进行局部注射观察，２周时可见少量的未吸收的疫苗黄色颗粒，３周时疫苗完全吸收。

２．５ １％鸡和鹌鹑红细胞检测抗原和抗体效果比较

通过对同批次抗体和血清样品的检测比较，两种禽类红细胞检测结果无明显差异，证明用１％鸡红细胞作ＡＩ－ＨＩ检测是完全可行的。

３ 小结与讨论

１）通过对不同日龄鹌鹑不同免疫次数的免疫试验结果表明，商品化灭活疫苗免疫鹌鹑的ＡＩ－ＨＩ抗体水平与鸭、鹅相比存在较大的差异［３-5］，主要表现在抗体水平低，持续时间短，不论是首次还是二次免疫，持续时间均不超过６周，而成年产蛋鹌鹑的淘汰周期为８～１２个月，这与生产需要相差较大。

２）为了评价疫苗的免疫效果，本研究设有同批疫苗免疫鸡对照组和鹌鹑红细胞对照组，结果表明二次免疫鸡的ＡＩ－ＨＩ抗体能持续６周以上，证明疫苗是有效的。为了验证不同禽类的红细胞检测鹌鹑抗体的敏感性，还作了１％鸡和鹌鹑红细胞检测抗原和抗体效果比较试验，通过对同批次抗原和血清样品的检测比较，２种禽类红细胞检测结果完全一致，证明用鸡的红细胞作ＡＩ－ＨＩ检测是完全可行的。

３）本次试验的疫苗安全性试验表明，免疫鹌鹑未见不良临床反应，精神、食欲和体重正常。疫苗免疫效果表明，不同日龄首次免疫后２周可检测到抗体，３周抗体水平达到高峰，为５log２以上，但维持时间很短，４周后开始下降，５周降至３log２以下；二次免疫后２周抗体达到７．６log２，3周后抗体开始下降，６周降至３log２以下；不同免疫途径免疫效果比较，颈背皮下注射抗体水平明显高于肌肉注射抗体水平。至于抗体维持时间短的问题，可能与鹌鹑免疫系统有关。

参考文献：

［１］ＳＡＩＦＹＭ．禽病学［Ｍ］．第十一版．苏敬良，高 福，索 勋，译．北京：中国农业出版社，２００５．１４７－１６６．

［２］白文彬，于康震．动物传染病诊断学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００２．

［３］中华人民共和国农业部．兽用生物制品质量标准汇编［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２０１０．

［４］陈永忠，李启红，李俊平，等．鸭免疫重组禽流感病毒Ｈ５亚型二价灭活疫苗（Ｈ５Ｎ１，Ｒｅ－５＋Ｒｅ－４）后抗体消长规律的研究［Ｊ］．养禽与禽病防治，２０１０（３）：８－９．

［５］杨 峻，邵华斌，艾地云，等．鹅禽流感免疫程序研究［Ｊ］．湖北农业科学，２００８，４７（４）：４４９－４５１．