甲胎蛋白异质体测定在原发性肝癌和良性肝病鉴别诊断中的应用

西安市阎良铁路医院（阎良710089） 王 昀 王炳芳 何敖林 姚永良

原发性肝癌（PHC）的实验室诊断指标以AFP的特异性和敏感性最高，通常认为AFP高于400ng/ml可以诊断为PHC，但阳性率约为70%，而且部分肝炎、肝硬化、孕妇、胃癌、转移性肝癌等也可测出小量AFP表达，有 AFP表达少数甚至高于400ng/ml。AFP异质体或称AFP亚型，是由于AFP来源不同，其分子在糖链结构的亚结构上表现不同，AFP的糖链结构能与多种凝集素相作用，与不同凝集素结合的AFP分子结构蛋白基本相同，但糖链部分有所差异，这种分子结构上的差异可通过植物凝集素与其不同的亲和力将其检出［1］。通常所指的AFP异质体是指AFP－LCA，即扁豆凝集素亲和型，与LCA结合的基础是AFP糖链岩藻糖糖基化，而肝癌细胞内发生某种作用于糖链连接或降解的代谢障碍时，则可能导致AFP岩藻糖基化增高，即AFP异质体增高［2］。本研究联合AFP及其AFP异质体（AFP－L3）检测，以探讨其在PHC与良性慢性肝病鉴别诊断上的意义。

对象与方法

1 研究对象 原发性肝癌组患者（PHC组）46例，男32例，女14例，年龄41～68岁；慢性肝病组患者35例（其中肝硬化15例，病毒性肝炎20例），男17例，女18例，年龄21～62岁。均系两院2010年2～12月的住院病人。血清AFP含量在100～12100ng/ml之间。以上患者均空腹采集静脉血4ml，分离血清，－200C低温冰箱保存备用。

2 方 法 ①AFP定量：采用化学发光免疫分析法，瑞士罗氏公司生产的ROCHEELECSYS.2010全自动电化学发光免疫分析仪。采用瑞士罗氏公司提供的ELECSYS2010配套的AFP定量检测试剂盒。由本院检验中心帮助测定。②AFP异质体（AFP－L3）检测：采用HOT－gene公司生产地甲胎蛋白异质体测定试剂盒。甲胎蛋白异质体（AFP－L3）亲和吸附离心管中预装有亲和介质，该亲和介质能特异性结合甲胎蛋白异质体（AFP－L3）。当血清样本流过离心管，样本中的甲胎蛋白异质体（AFP－L3）与离心管内的亲和介质相结合，甲胎蛋白异质体（AFP－L3）会留在离心管内，经过清洗和离心洗脱过程，获得处理后样本，处理后样本中含甲胎蛋白异质体（AFP－L3）。甲胎蛋白（AFP）定量检测试剂盒检测处理前样本和处理后样本，通过统计学分析，可以获知检测样本中甲胎蛋白异质体（AFP－L3）占总甲胎蛋白（AFP）的比率。

3 统计学处理 采用spss11统计软件包分析，组间均值的比较用t检验，组间率的比较用卡方检验。

结 果

1 PHC组及慢性肝病组AFP的测定结果 见表1。在46例PHC患者中，AFP的水平波动在102.3～1210之间，其中 AFP－L3的阳性率为82.6%（38/46），而在慢性肝病组中，AFP的水平波动在62.24～659.4之间，而 AFP－L3的阳性率为42.8%（15/35）。

表1 PHC组及慢性肝病组AFP的测定结果

2 PHC组患者AFP异质体与血清AFP水平的关系 见表2。在46例PHC患者中，AFP为低浓度组的例数仅有14例，而AFP－L3的阳性率为71%；而在病毒性肝炎组中，AFP低浓度组的例数为29例，AFP－L3的阳性率为37.9%。PHC组AFP异质体的阳性率与良性肝病组有显著差异（P＜0.01）。

表2 PHC组患者AFP异质体与血清AFP水平的关系

讨 论

目前原发性肝癌诊断的血清标志物仍首推AFP，然而约有35%～40%原发性肝癌患者血清AFP呈低浓度升高，且小肝癌通常AFP较低，甚至正常。因此AFP持续低浓度阳性对早期肝癌患者的及时诊断尤为重要［3］。AFP是一种癌胚糖蛋白，AFP糖链因来源不同而各异，表现出异质性。原发性肝癌特异性AFP糖链在核心N－乙酰葡萄糖胺上连有岩藻糖，可与小扁豆凝集素结合。在LCA亲和电泳中表现为强亲和性的 AFP－L3［4］。

临床上采用 AFP＞400ng/ml，持续8周作为PHC诊断的标准，至于AFP低浓度持续阳性患者需经过动态观察AFP的变化。但这种长期随访的方法往往延误诊断的时机而造成失去及时治疗的良机，因此，有些学者认为传统AFP诊断标准对PHC诊断价值不大［5］。本文应用扁豆凝集素亲和电泳印迹法检测46例原发性肝癌，35例慢性肝病的血清AFP－L3，并同时常规测定各标本的AFP含量。结果PHC组AFP异质体的阳性率与良性肝病组有显著差异（P＜0.01）。尤其是在AFP浓度较低时，PHC组AFP－L3的阳性率明显高于慢性肝病组，而在AFP高浓度时，PHC组的AFP－L3阳性率也明显高于慢性肝病组。这说明，AFP－L3对PHC有更高的敏感性。AFP异质体的检测有助于良恶性肝病的鉴别诊断。

有研究表明AFP低浓度组（20＜AFP＜400）与AFP强阳性组（AFP＞400），AFP－L3的阳性检出率无显著性差异，这表明AFP浓度的高低与异质体之间无相关性［6］。这也与本实验的结果相符合，在本实验PHC组的高浓度组和低浓度组AFP－L3的阳性率分别为87.5%与71%，差异无显著统计学意义。但是PHC的低浓度组与病毒性肝炎的低浓度组AFP－L3阳性检出率分别为71%与37.9%，这两者之间差异有显著性。因此AFP－L3的检测，特别是对于AFP低浓度阳性的病例显得尤其重要。这说明了异质体是恶性生物学的良好指标。Oka等［7］也报道AFP异质体与肝癌恶性特征有关，特别是与门脉侵犯和肿瘤分化程度有关，而AFP浓度与肿瘤恶性特征则无关。

［1］ 张柏和，吴孟超，张晓华，等.AFP异质体肽链和寡糖成分差异与肝癌诊断的关系［J］.第二军医大学学报，1991，12（4）：341－345.

［2］ 聂署萍，陆学东.甲胎蛋白异质体的检测方法及其临床意义［J］.国际临床检验学杂志，2009，30（5）：477－479.

［3］ Shimizu K，Katoh H，Yamashita F，et al.Comparison of carbohydrate structure of serumα－fetoprotein by sequential glycosidase［J］.Clin Chin Acta，1996，254：23－40.

［4］ Taketa K.Oncofetal alteration of AFP sugar chains［J］.Jpn J Electroph，1995，39：133－136.

［5］ 蔡志昌，沈 霞.AFP异质体在肝癌诊断中的应用［J］.中国实验诊断学，2005，5（4）：189－191.

［6］Sato Y，Nakata K，Kato Y，et al.Early recognition of hepatocelluar carcinoma based on altered profiles of alpha－fetoprotein［J］.N Engl J Med，1993，328（25）：1802－1806.

［7］Oka H，Satio A，Ito K，et al.Multicenter prospective analysis of newly diagnosed hepatocellular carcinoma with respect to the percentage of lens of culinaris agglutinin－reactive alpha－fetoprotein ［J］.J Gastroenterology Hepatol，2001，16（12）：1378－1383.