应用EZ-tape胶带分离提取混合斑精细胞

王玉健，王 斌，马 妍，杨志勇

（天津市公安局物证鉴定中心，天津 300384）

应用EZ-tape胶带分离提取混合斑精细胞

王玉健，王 斌，马 妍，杨志勇

（天津市公安局物证鉴定中心，天津 300384）

法医遗传学；精细胞；混合斑；EZ-tape胶带

在强奸案件中的DNA检验往往需要将混合斑中男性精子与女性阴道上皮细胞彻底分离。常规方法是剪取载体及其上面附着的混合斑迹一起进行差异裂解分离出精子细胞与女性阴道上皮细胞。在实践中，由于载体的介入可能会带来不利因素，加大了混合斑分离的难度，往往得不到男性精斑的DNA分型或者得到的是混合DNA分型。本研究根据混合斑的形成特点，利用EZ-tape胶带既不破坏载体又可多次粘取载体表面混合斑迹的特性，巧妙地克服了载体带来的诸多不利因素，提高了男性精子的检出率。

1 材料与方法

1.1 材料

10份混合斑检材均来自于日常案件，检材包括内裤、护垫、卫生纸、床单等。

1.2 仪器与试剂

EZ-tape胶带（公安部物证鉴定中心研制），Freedom EVO 100-4型自动化提取工作站（瑞士TECAN公司），EQ1000法医DNA提取试剂盒（北京东胜创新生物科技有限公司），9700型PCR扩增仪、3130XL型遗传分析仪、SinofilerTM试剂盒（美国AB公司）。

1.3 方法

用EZ-tape胶带多次粘取载体表面的可疑斑迹部位，用干净的镊子揭下基座上的胶带，剪碎放入1.5mL离心管中，按照文献[1]中的步骤加300μL TNE缓冲液于37℃浸泡30min，然后加入30μL 10%的SDS，加蛋白酶K至终质量浓度为40 μg/mL（如果女性细胞较多，蛋白酶K终质量浓度可增至100 μg/mL）。于56℃保温过夜消化女性上皮细胞后直接挑出胶带，然后以离心半径5cm，14000r/min，离心5min，取得富含女性DNA的上清液保存备用，男性精细胞沉淀用TNE缓冲液洗涤两次备用。按照文献[2]的方法，在Freedom EVO 100-4型自动化提取工作站上应用EQ1000法医DNA提取试剂盒运行“工作站-磁珠法”提取程序，分孔提取上述上清液及男性精子细胞悬液，最终得到的DNA样品采用SinofilerTM试剂盒进行复合扩增，扩增产物以3130XL型遗传分析仪进行检测分析。

2 结果与讨论

10份混合斑检材均分离获得男性精子DNA的STR分型。EZ-tape胶带是公安部物证鉴定中心研制的一种针对脱落细胞的提取装置，其原理为利用胶带直接粘取渗透性和非渗透性客体表面上的脱落细胞，胶带固定在基座上易于操作，使用前后存放于有机玻璃密闭容器中，避免污染[3]。

本研究将EZ-tape胶带应用到强奸案件混合斑中精子的分离，除利用EZ-tape胶带的上述优点外，还利用其不破坏检材载体即可取到载体表面目的细胞的特性。这就避免了检材载体带来的载体体积过大、载体本身易碎易烂、载体所含抑制物以及载体深层附着的大量女性细胞等不利因素，缩短了女性细胞的消化时间，简化了精子的离心分离、洗涤等操作步骤，降低了混合斑分离的难度及成本。

在实际检验中，最好先使用特定波长的紫外光源照射上述检材，通过护目镜可观察到混合斑迹的荧光区域范围，再结合显微镜检查大体了解女性上皮细胞及男性精子细胞的数量，最后根据检材实际情况对粘取次数、粘取范围、一步消化时蛋白酶K的用量以及消化时间略作调整。

综上所述，EZ-tape胶带的使用很大程度上避免了检材载体带来的诸多不利因素，提高了男性精子的检出率，可在强奸案件中加以利用。

[1]郑秀芬.法医DNA分析[M].北京：中国人民公安大学出版社，2002：47.

[2]匡金枝，聂同钢，朱巍，等.DNA自动化检案及其规范程序的研究与应用[C]//公安部物证鉴定中心.法医遗传学进展与应用：第三届全国法医DNA检验技术研讨会论文选.北京：群众出版社，2008：20-22.

[3]李万水，胡兰，刘海东，等.用EZ-tape胶带提取接触DNA一例[C]//公安部物证鉴定中心.法医遗传学进展与应用：第三届全国法医DNA检验技术研讨会论文选.北京：群众出版社，2008：367-368.

2012-02-13）

（本文编辑：李成涛）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2012.02.015

1004-5619（2012）02-0133-01

王玉健（1973—），男，天津人，副主任法医师，主要从事法医DNA检案工作；E-mail：mayan0615@126.com