UF-50全自动尿沉渣分析仪对尿液有形成分检测结果干扰因素分析

2012-04-18杨秀清秦晨曦李雪莲袁小美

解放军医药杂志 2012年5期

杨秀清，高蕾，李程，秦晨曦，李雪莲，袁小美

尿沉渣检验有较高的临床诊断价值，是尿液分析的重要内容。UF-50全自动尿沉渣分析仪因操作简便、重复性好等特点在临床检验中的应用越来越广泛。但尿液成分具有多样性、复杂性的特点，有些成分的大小、形态以及性质相近，UF-50分析仪均无法正确识别与分类，因而会对所有检测项目产生干扰，导致某些检测结果的假阳性或假阴性，且与尿干化学分析结果不一致［1-2］。本文对UF-50全自动尿沉渣分析仪对尿液有形成分检测结果的干扰因素进行分析，旨在为临床提供更加可靠的诊断依据。

1 UF-50全自动尿沉渣分析仪检测尿液有形成分的机制

UF-50全自动尿沉渣分析仪利用流式细胞计数法(FCM)技术来获得尿液中的细胞前向散射光及前向荧光的强度参数，在对细胞进行荧光染色后，每个细胞都暴露在高度密集的激光束照射之下，单个细胞会按不同角度发出荧光和散射光。系统将对这些电信号进行分析，按照荧光强度和散射光强度生成二维散点图，以便对各种有形成分进行识别。从前向散射光的发光强度可获知细胞的大小和表面状态等，从染色细胞发出的荧光可获知细胞表面和胞质内的性状，以及细胞核的性质。

2 尿液有形成分检测及干扰因素

2.1 管型 UF-50全自动尿沉渣分析仪根据管型内容物染色后产生的荧光强度来区分病理管型和透明管型，不能作病理管型的分类［3］。

2.1.1 假阳性原因:管型检测的假阳性率最高［4］。主要原因有:①由于管型、上皮细胞及黏液丝的形态、大小、染色性有许多相似之处，导致仪器不能准确区分。尤其是合并感染时黏液丝和上皮细胞增多，会造成管型的假阳性增高［5］。大量精子堆积在一起形成类柱状体，与管型相似，分析仪测出的强散射光信号和强荧光信号为假管型［6］。②有时少量白细胞聚集成脓细胞或黏附于黏液丝上，其前向散射光强度、荧光强度等测定信号偏离尿白细胞的信号范围，也可被误认为管型［7］。③另外尿液变质、尿pH值＞9，应用嘧啶类、青霉素类等药物，尿液中含有较多分泌物时尿蛋白可出现假阳性。因此，肾病患者的尿液不适合用干化学过筛检验，对于尿蛋白阳性的尿液标本，必须辅以镜检［8］。

2.1.2 假阴性原因:管型检测假阴性率较低。镜下可见少量透明管型时会导致管型检测假阴性。可能是由于管型短小使前向散射光强度降低，荧光脉冲较少、较低而导致漏检［4］。某些蛋白尿形成的管型短小或断裂而被漏检［9］。尿蛋白和尿管型的主要成分是白蛋白，尿干化学反应主要对白蛋白敏感，而对球蛋白不敏感。某些尿蛋白阳性的病例仪器不能确认是否存在管型，必须镜检才能发现。尿管型与尿蛋白有一定的相关性，但并非平行关系［10］。

2.2 尿白细胞尿白细胞检测对泌尿系统感染等疾病的诊断有重要价值。尿白细胞种类较多、形态多样、大小不一，因此其所产生的前向散射光强度及电阻抗等测定信号变化范围较大，较易出现假阳性或假阴性，检测过程中应加以注意。

2.2.1 假阳性原因:①大多数情况下，分析仪测定白细胞的结果与镜下所见基本相符［11］，但某些原因如上呼吸道或尿路感染，特别是妇科疾病所引起的上皮细胞增多时，仪器会将某些上皮细胞误认为白细胞，从而造成假阳性［10］。②尿液中某些成分如上皮细胞(尤其是肾小管上皮细胞)、大量非定形尿酸盐结晶、成堆细菌颗粒等，其大小及染色敏感性与尿白细胞相似，测定信号与尿白细胞相近或重叠，仪器分析时误将以上成分计数为尿白细胞，导致假阳性［7］。③尿液中含有真菌时也会对白细胞计数产生干扰。尿液中只含有真菌时，会造成真菌的假阴性和白细胞的假阳性。当尿液中同时含有白细胞和红细胞时分为两种情况，白细胞浓度低时，仪器对白细胞计数准确，对红细胞的计数出现错误。当白细胞浓度高时，真菌对白细胞计数产生干扰，造成假阳性。提示尿液中有形成分组成和浓度对白细胞造成的干扰是不同的［12］。

2.2.2 假阴性原因:①肾移植患者发生排异反应、慢性扁桃体炎、慢性肾炎时，尿液中以淋巴细胞为主，干化学分析仪法检测白细胞为阴性，镜检法检测为阳性［2，13］。尿液中以单核细胞为主时也会出现此结果［2］。②有时少量尿液白细胞聚集成脓细胞或黏附于黏液丝，测定信号偏离尿白细胞信号范围，可被误认为管型等其他成分而被漏检，造成假阴性。UF-50分析仪仅适用于过筛检测，工作中必须用镜检法复检，以免漏检［4，7］。③黄疸尿也会造成白细胞假阴性，由于胆红素的颜色与散射光及荧光的抵消作用影响，使白细胞计数随黄疸程度增加而减少［14］。④低渗尿及碱性尿白细胞增大，而高渗尿及酸性尿白细胞萎缩，可能导致漏检，造成假阴性［7］。

2.3 尿沉渣尿沉渣检测尤其是红细胞的检测对泌尿系统疾病的诊断、辅助诊断及治疗有重要意义。UF-50分析过程中易受结晶、类酵母细胞及其他杂菌、精子等干扰，当仪器出现报警时，必须用镜检确认［15］。如结晶标志、类酵母细胞标志、精子标志出现(+)和(或)出现红细胞信息异常时，必须镜检复核以排除假阳性结果［16-17］。

2.3.1 假阳性原因:①结晶对红细胞结果影响很大。有研究表明50%假阳性源于结晶。由于尿中的草酸钙结晶、非晶型盐类结晶等与红细胞大小、形态，荧光强度、染色敏感度和前向散射光强度均与红细胞相似，故常被误认为红细胞而出现假阳性［18］。②也有研究认为，在影响检测准确性的因素中细菌占首位(47．2%)［19］。主要原因可能是尿液中存在大量球菌和杆菌时，细菌可代谢产生一些有毒物质(如内毒素)，使细菌在尿液中结成堆，菌落大小与红细胞相似，被误认为红细胞而产生干扰。有研究证实，一定浓度的细菌会使尿液红细胞计数出现假阳性，其中葡萄球菌对红细胞计数影响最明显，可能与其形态排列有关，而革兰阴性杆菌和肠球菌对红细胞计数影响较小，但其浓度较大时会出现聚集排列，因此也会影响红细胞计数［20］。有报道称，利用UF-50全自动尿沉渣分析仪检测时，金黄色葡萄球菌可影响其对尿红细胞计数的测定结果，但并无规律，应辅以镜检确诊［16］。当细菌浓度较高且聚集，大小与红细胞相近时，散点分布与红细胞有重叠，分析仪有可能将其误认为红细胞，造成红细胞计数的假阳性。③酵母菌的影响。酵母菌形态、大小和前向散射光强度与红细胞相似而被误认为红细胞［21］;类酵母样细胞，由于草酸钙结晶和类酵母样细胞与尿液红细胞具有相似的荧光或前向散射光特性［22］，降低了分析仪对红细胞的识别能力。精子、卵磷脂小体、脂肪滴可影响红细胞计数，精子虽然前向散射光强度小，荧光强度高，但其成堆时，仪器无法区分，散射光强度可能会与红细胞接近而造成假阳性［18］。④标本含有大量细菌，超出仪器设定范围，导致红细胞计数的偏差;标本含有不完整管型被染色误认为是红细胞［18］。⑤尿干化学法检测时，如果尿中有肌红蛋白、次氯酸盐、氧化型清洁剂或细菌尿时，可引起尿红细胞假阳性［14］，尿液清洁度不够或混浊时，尿液中的杂质易被误认为是红细胞，从而影响分析结果，出现假阳性［18］。

2.3.2 假阴性原因:红细胞假性减低的主要干扰因素为患者本身的红细胞具有高度异形性，其次是红细胞附着在黏液丝上。当尿中出现血红蛋白时，分析仪检测潜血反应阳性，但是镜检为阴性。

2.3.2.1 红细胞的形态异常:分析仪只能对尿中完整红细胞有形成分进行检测，对异形红细胞如球形红细胞、棘形红细胞等会漏诊［23］，导致假阴性。原因:①畸形红细胞。某些畸形红细胞大小仅为正常红细胞的1/8～1/10，低倍视野根本无法看到，高倍视野仅见很小的环状形，折光性弱;“鬼怪影”畸形，普通高倍视野隐约可见，位相镜通过正负相对比可观察;小球形畸形，细胞整体固缩，折光性强，胞膜增厚，易将这类红细胞误认为酵母菌或真菌孢子［24］;一个红细胞出现多个芽孢，使胞体变小，芽孢在四周连接成花环形。②由于病变导致红细胞膜改变，造成红细胞的破裂及芽孢的脱落，血红蛋白溢出，出现影细胞、红细胞碎片、红细胞高度异形性或聚集时易导致假阴性［18］。高倍视野下仅能观察到形态不规则的小红细胞碎片，由于形状不规则且折光性弱，很容易将其看作其他杂质［24］。当UF-50全自动尿沉渣分析仪测定结果出现红细胞阳性且为肾内科患者，必须进行显微镜复检，以提高检测的准确性［18］。

2.3.2.2 红细胞附着在黏液丝上:UF-50全自动尿沉渣分析仪虽具有吹打自动混匀功能，但不能彻底混匀附着在黏液丝上的红细胞团，尤其是吸样时只能定量吸取，如未能吸到红细胞团，就造成了红细胞假性减低，白细胞假性减低也是此原因［1］。

2.3.2.3 干化学法检测:当尿中存在大量维生素C，可影响尿红细胞计数，使结果出现假阴性［10］。尿液中含有对热不稳定的酶、菌尿及存放时间过长均可导致潜血阳性，而镜检红细胞阴性［2］。陈旧尿液的标本，即便红细胞溶解，分析仪也能打印出来，但显微镜下检测不到［10］。

尿液分析仪潜血反应既能与完整的红细胞发生阳性反应，也可与红细胞溶解释放的血红蛋白发生阳性反应，而显微镜只能检出尿中未溶解的红细胞。血管内溶血、上尿路出血时尿液分析仪潜血阳性，但尿沉渣镜检观察不到红细胞或仅见红细胞碎片。当心肌或骨骼肌发生严重损伤尿液中还有肌红蛋白时，分析仪检测潜血阳性，镜检红细胞阴性［2］。非发酵菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对潜血结果影响较大，其中铜绿假单胞菌的影响最显著。可能主要与其产生的细胞色素氧化酶有关，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均可产生过氧化物酶，从而影响潜血结果的检测，肠球菌和白假丝酵母菌不产生此类物质，故对结果影响不明显［24］。

UF-50分析仪主要起过筛作用，而尿液中有形成分复杂，显微镜检查可对有形成分进行最直观的分析，因此，阳性标本应与镜检结合，从而避免仪器检测造成的误诊、漏诊，提高尿沉渣检测的质量。

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