气相色谱法测定非布索坦中残留有机溶剂含量

王 辉 ，常先平，周成钥，吕 凌，丁姗姗

(1．安徽省药物研究所·安徽省缓控释工程技术研究中心，安徽 合肥 230022;2．安徽省蚌埠市怀远县人民医院药剂科，安徽 蚌埠 233400;3．安徽医科大学，安徽 合肥 230031;4．安徽中医学院，安徽 合肥 230031)

非布索坦[1](febuxostat)为新型非嘌呤类XO抑制剂，临床上用于预防和治疗高尿酸血症及其引发的痛风。本品原料药在合成过程中使用了乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺等有机溶剂。按照2010年版《中国药典(二部)》附录ⅧP的要求及人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)的有机溶剂残留量指导原则[2－3]，需要对样品中的残留溶剂检查并进行方法学研究。本试验采用溶液直接进样气相色谱法，测定了原料药中其含量。方法简便灵敏，结果准确可靠。

1 仪器与试药

岛津GC－14C气相色谱仪(FID检测器);N2000色谱工作站。乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺(DMF)、N－甲基吡咯烷酮均为分析纯;非布索坦(北京海步国际医药科技发展有限公司，批号分别为090401，090402，090403)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱为 SPB －5毛细管柱(30 m ×0．53 mm，5．0 μm);柱温为40℃维持4 min后，以35℃ /min的升温速率升至220℃，维持8 min。进样口温度220℃，FID检测器温度为250℃。载气为高纯氮气;进样量为1 mL。

2．2 溶液制备

精密称取乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、DMF适量，用N－甲基吡咯烷酮溶解，配制成乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、DMF 质量浓度分别为 516．8，60．8，500．8，74．4，20．0，100．0 μg/mL 溶液，即得对照品溶液。精密称取样品约0．1 g，置1 mL容量瓶中，加N－甲基吡咯烷酮适量振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2．3 方法学考察

系统适用性试验:取对照品溶液和供试品溶液，按2．1项下色谱条件进行分析，记录色谱图，见图1。结果表明，乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、DMF分离度均大于1．5，理论板数均不低于2 000。

图1 气相色谱图

线性关系考察:精密称取乙醇0．064 6 g，乙酸乙酯0．062 6 g、四氢呋喃 0．009 3 g、DMF 0．012 5 g、二氯甲烷 0．007 6 g，吡啶0．049 8 g，置50 mL容量瓶中，用N－甲基吡咯烷酮溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述标准贮备液 0．5，1，2，3，4 mL，分别置5 mL容量瓶中，用N－甲基吡咯烷酮稀释至刻度，摇匀，按2．1项下色谱条件进行分析，以峰面积(A)为纵坐标、质量浓度(C)为横坐标进行线性回归，结果见表1。

精密度试验:取对照品溶液连续进样6次，按拟订的色谱条件进行分析。结果乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、DMF 峰面积的RSD分别为 1．94% ，2．58% ，1．61% ，1．62% ，3．97%，7．29%(n=6)。

表1 线性关系考察结果(n=5)

检测限:取各对照品溶液，经N－甲基吡咯烷酮不断稀释后进样，结果乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、吡啶、DMF的检测限分别为 0．048 4，0．091 5，1．31，0．086，1．992，4．9 ng。

2．4 样品含量测定

取3批样品，按2．2项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，按拟订色谱条件进行分析，按外标法计算6种有机溶剂的含量，结果见表2。

表2 样品中各溶剂残留量的测定结果(%)

3 讨论

气相色谱法测定原料药中有机溶剂残留量通常采用顶空进样和直接进样两种方法。顶空进样虽可避免将样品中的沸点难挥发性物质气化引入色谱柱，减少对色谱柱的污染，且进样量大，灵敏度较高，但DMF沸点较高(152．8℃)，挥发性太差，而且6种待测溶剂限量较高，容易测定，故不宜采用顶空进样方式，而采用直接进样方式。

本研究中6种待测溶剂的沸点差异较大，最低的二氯甲烷为39．75℃，最高的DMF为152．8℃，考虑到原料药的溶解性和溶剂之间的分离度，选择沸点更高的N－甲基吡咯烷酮(203℃)为溶剂。

本试验开始柱温为40℃维持2 min后，以35℃ /min的升温速率升温至210℃。发现DMF峰形拖尾，灵敏度低。后改用柱温为40℃维持4 min后，以35℃ /min的升温速率升温至220℃，DMF峰形和分离度均达到要求。

[1]唐春雷，王德才，陈 姝，等．新型抗痛风药物非布索坦[J]．中国新药杂志，2009，18(7):577 － 581．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:附录61．

[3]陈立亚，于宝珠，赵慧芳．ICH指导原则与各国现行药典药品的残留溶剂分析方法概述[J]．中国药事，2005，19(9):542－543．