高效液相色谱法测定双水杨酯片的有关物质

2012-03-18文丽丽张立升吕文军

哈尔滨医药 2012年3期

文丽丽，张立升，吕文军

(1.黑龙江省黑河市药品检验所，黑龙江黑河164300;2.黑龙江省黑河市第一人民医院，黑龙江黑河164300)

双水杨酯片是消炎镇痛非甾体抗炎药，用于缓解各类疼痛，包括头痛、牙痛、神经痛、关节痛及软组织炎症等中等度疼痛。与阿司匹林结构和作用类似，其在生产中未反应的，或在贮存期中(特别是贮存不当)水解产生的水杨酸，不仅对人体有毒性，且分子中酚羟基在空气中逐渐被氧化成一系列醌型有色物质，可使双水杨酯片变色，故药典规定双水杨酯检查游离水杨酸，但药典方法为分光光度法，前处理很麻烦，而且所用提取试剂为三氯甲烷，对人体伤害也很大，本文建立了高效液相色谱法测定水杨酸含量的方法，快速准确，精密度好。

1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪(包括自动进样器、二元输液泵、柱温箱和2998紫外检测器);水杨酸对照品(批号:100106-200303，来源:中国药品生物制品检定所);冰醋酸，四氢呋喃为化学纯，乙腈、甲醇均为色谱纯。

2 色谱条件的选择

色谱柱:采用 waters C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相:乙腈-四氢呋喃-冰醋酸 -水(20∶5∶5∶70)。检测波长303 nm，柱温30℃，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，理论板数按水杨酸计不低于5000，分离度符合要求。

3 实验方法与结果

3.1 溶液的制备

3.1.1 供试品溶液:精密称取本品细粉适量(约相当于双水杨酯0.5 g)，置100 mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液即得。

3.1.2 对照品溶液:精密称取水杨酸对照品适量，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀释至每1 mL中含15 μg的溶液，即得。

3.1.3 阴性对照溶液的制备取1%冰醋酸的甲醇溶液，作为阴性对照溶液。

3.2 系统适用性试验:按上述色谱条件，取对照品溶液10 μL，进样，记录色谱图，见图1，调节检测灵敏度，使水杨酸色谱峰的峰高约为满量程的20%，双水杨酯和水杨酸分离度大于1.5，对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液的色谱图，见图2、3，供试品溶液在303 nm检测波长下色谱图中如出现与对照溶液中水杨酸位置相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算含量。

3.3 线性关系考察:精密称取水杨酸对照品15 mg，置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量1、2.5、5、7.5、10 mL 分置 100 mL 量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，依照上述色谱条件测定其峰面积，以各对照品峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)进行线性回归。回归方程:Y=85462C-4257.7，r=0.997.结果表明，水杨酸在2.97～29.7 μg/mL的浓度范围内有良好的线性关系。

3.4 破坏性试验［1］:取本品进行酸性、碱性和加热破坏试验后，按上述色谱条件进行试验，结果表明，各种破坏条件下产生的杂质与水杨酸分离良好，其中加热水解产生大量的游离水杨酸。

3.5 精密度试验:取水杨酸对照品溶液，按上述测定法测定，连续进样6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD=0.6%，结果表明仪器的进样精密度良好。

3.6 溶液的稳定性试验:取水杨酸对照品溶液，在室温下放置，于0，2，5，7，12 h 时分别进样，测得峰面积 RSD 为 10%，表明水杨酸溶液的稳定性非常不好，应临用新制。

3.7 回收率试验:取阴性对照溶液，分别精密加入一定量的水杨酸对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备，按外标法测定水杨酸含量，计算回收率，结果表明，平均回收率为99.0%，RSD 为 1.0%。

3.8 样品的测定:取样品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各批样品有关物质水杨酸相当于双水杨酯标示量的百分含量。结果见表1。