白鸭禽流感H5亚型疫苗免疫促进剂的筛选

张济培，陈建红，刘佑明，廖洁丹，张福英，罗贵庭，陈海文，刘成彪

（佛山科学技术学院，广东 佛山 528231）

近年来研究发现，许多药物包括一些维生素、矿物质、激素和中药及其提取物对家禽免疫具有促进作用，但促进效果常因疫苗及家禽种类不同而有较大差异。水禽禽流感油乳灭活疫苗免疫效果经过免疫程序相关多种因素筛选仍然常会出现应答不良的情况［1－4］，通过免疫促进的研究不失为解决问题的一个途径。本试验对白鸭禽流感油乳灭活苗免疫促进剂进行筛选试验，旨在筛选出适合于水禽的免疫促进剂或免疫促进剂组合。

1 材料与方法

1.1 免疫促进剂 禽源干扰素（冀中药业有限公司），黄芪多糖溶液（0.02 g／m L，江西中成药业集团有限公司），人参皂苷（95%，东方植物保健科技有限公司），禽用抗菌肽B-001（圣西马生物技术有限公司），植物血细胞凝集素（PHA，印尼思特生物制品有限公司），蜂灵散（采用蜂胶、灵芝粉、多种维生素和多种氨基酸等按比例配制）。

1.2 疫苗、抗原与实验动物 H5N1 AI油乳苗（2009098，经快速效价检测抗原HA效价为4log2）、AI H5 HI抗原，均由哈尔滨维科公司生产。1日龄仙湖肉鸭，本校科研禽场提供。

1.3 动物分组与处理 将1日龄仙湖肉鸭隔离饲养至7日龄随机抽检30只AI H5母源抗体，13日龄随机分为17组，11只／组。1～15组分别于14 d皮下注射AI疫苗0.3 m L／只、21日龄和28日龄皮下注射0.6 m L／只。每次接种疫苗前后3 d连续使用3次促进剂：1组皮下注射3倍量禽源干扰素／只，2组喂服黄芪多糖0.02 g／只，3组喂服人参皂苷1 g／只，4组喂服抗菌肽1 g／只，5组喂服蜂灵散0.15 g／只，6组皮下注射血凝素0.02 mg／只，7～15组分别使用各促进剂的两两组合。16组为接种疫苗不使用促进剂对照，17组为不接种疫苗不使用促进剂对照组。各组试验鸭从13日龄（首免）开始每间隔一周采血作 AI H5 HI抗体检测［5－6］。

2 结果

2.1 6种免疫促进剂单用组的免疫促进结果 各组小鸭各周采血分离血清检测AI HI抗体均值见表1。

表1 各组小鸭各周采血分离血清检测AI HI抗体均值（log2）

从表1可见，试验小鸭母源抗体在第3周降至最低值2log2以下，疫苗免疫组抗体均值均低于不免疫组，提示AI油乳疫苗免疫接种会一定程度加快相应母源抗体的消散。3周龄所有免疫组抗体水平均开始快速上升，多数组于第6周龄达到值峰。其中血凝素组、蜂灵散组、抗菌肽组抗体峰值相近达9log2或以上，高于免疫对照组1log2以上。禽源干扰素组、人参皂苷组与免疫对照组抗体峰值很相近，为7.7log2～9.0log2之间。黄芪多糖组抗体峰值最低为7.3lg2，约低于免疫对照组1个滴度。

2.2 6种免疫促进剂两两组合组的免疫促进结果

各组合试验组小鸭各周采血分离血清检测AI HI抗体均值见表2

表2 各组小鸭各周采血分离血清检测AI HI抗体均值（log2）

从表2可见，干扰素＋蜂灵散组抗体峰值比干扰素单用组高1.6log2，比蜂灵散单用组高0.46log2；干扰素＋黄芪多糖组比干扰素单用组高1.64log2，比黄芪多糖单用组高2.34log2，各监测点抗体水平多数高于免疫对照组峰值近2个滴度（9.64∶7.75）；人参皂苷＋抗菌肽组免疫后抗体上升最快，峰值最高（9.09log2），相对于人参皂苷单独处理组（7.73log2）显示出较明显的配伍效应。其余各组合免促组无明显的配伍促进效应，甚至配伍后免促效果会有所降低。

3 讨论

关于免疫促进，一直受到医学及兽医学领域的重视。在家禽方面目前对鸡的免疫促进研究最多，而且主要集中于黄芪及其有效单体提纯物、人参叶皂苷及有关复方的研究［7－13］。而对水禽的免疫促进研究要比鸡少得多，且筛选出的免疫调节剂其免疫促进效果并不甚理想［14］。近年来水禽养殖量不断扩大，而水禽传染病种类日益增加，水禽尤其是幼禽发病、死亡率有上升倾向，其原因与水禽（尤其是白鸭）在2周龄内由于免疫系统发育尚未成熟，免疫应答的能力低下，只形成短暂和较低的免疫应答过程有关，故如何提高幼龄期鸭对禽流感、水禽副黏病毒病等常接疫苗的免疫抗体，对有效预防危害水禽的几种急烈性传染病的发生具有临床意义。开展免疫促进剂研究，筛选出有效的免疫促进剂，为改善幼龄水禽的免疫反应能力较为有效的方法。

本试验将蜂灵散、禽源干扰素、黄芪多糖溶液、人参皂苷、禽用抗菌肽、植物血细胞凝集素六种免促进剂单用及两两组合，对仙湖三号小鸭作禽流感油乳灭活疫苗免疫促进试验。结果表明，几种免疫促进剂单独对小鸭作试验组，首免后1周免疫鸭抗体水平均开始快速上升，多数组于第6周龄达到峰值（7.3log2～9.18log2），其中以血凝素组、蜂灵散组、抗菌肽组抗体峰值相近且最高，高于免疫对照组1个滴度以上，而黄芪多糖组抗体峰值最低并低于免疫对照组，禽源干扰素组、人参皂苷组与免疫对照组抗体峰值很相近，表明几种免疫促进剂单独对小鸭作试验，以蜂灵散、抗菌肽、血凝素3种免疫促进效果最好。6种免疫促进剂两两组合对小鸭作试验组，各免疫组免疫抗体在6～7周龄达到峰值（7.3log2～9.6log2），其中干扰素＋蜂灵散组抗体峰值比干扰素单用组高1.6log2，比蜂灵散单用组高0.46log2；干扰素＋黄芪多糖组比干扰素单用组高1.64log2，比黄芪多糖单用组高2.34log2，各监测点抗体水平多数高于免疫对照组峰值近2个滴度（9.64∶7.75）；人参皂苷＋抗菌肽组免疫后抗体上升最快，峰值最高（9.09log2），相对于人参皂苷单独处理组（7.73log2）显示出较明显的配伍效应。其余各组合免促组无明显的配伍促进效应，甚至配伍后免促效果会有所降低。本试验结果提示，干扰素＋蜂灵散组合免促组，对小鸭禽流感免疫促进作用最好，与之相近效果的还有植物血凝素免促组、蜂灵散单独免促组，其后依次为人参皂苷＋抗菌肽组、抗菌肽单独免促组、干扰素＋黄芪多糖免促组。而抗菌肽＋蜂灵散配伍免促组抗体水平低于免促对照组，说明以免促最佳的单因子相加作配伍，不一定能收到更佳的效果。试验初步筛选出效果较为明显的雏鸭禽流感疫苗免疫促进剂，为以后的进一步研究及应用奠定了基础。

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