MicroRNA及其研究现状＊

呼高伟，陈兆国，程天印，许 娟

MicroRNA及其研究现状＊

呼高伟1，2，陈兆国2，程天印1，许 娟3

MicroRNA（miRNA）是一类非编码的内源性小RNA分子，长度约20～25个核苷酸（nucleotides，nt），参与调控诸多基因的表达。miRNA的作用方式有2种：一种是通过与靶标基因mRNA的完全匹配结合，促使m RNA发生降解；另一种是通过不完全地与靶mRNA的3′非编码区（3′untranslatied region，3′UTR）互补结合，抑制靶m RNA的翻译，将蛋白控制在生命活动所需要的最佳水平上。这些靶m RNA会进一步调控机体的多种生物学行为，如机体发育进程、细胞分化、细胞凋亡、肿瘤以及疾病的发生等。因此，全面而深入地了解miRNA的发生、作用机理和功能，将会揭示这些生物过程发生的机理以及一些疑难疾病的分子基础。本文通过对miRNA的发现、结构特征、合成与作用机制、分析方法、功能及应用进行综述，对下一步研究进行展望，以期为利用miRNA研究成果进行新药研制、疾病诊疗提供新的思路和理论基础。

1 miRNA的发现

1993 年，Lee等［1］在对秀丽隐杆线虫 （Caenorhabditis elegans）进行突变体遗传分析时，发现一种控制细胞发育时序的长度约为22 nt的RNA lin－4，通过碱基配对的方式结合到靶mRNA lin－14的3′UTR，从而抑制lin－14的翻译，但不影响其转录。2000年，Reinhart等人［2］在线虫中发现了另一种重要的具有转录后调节作用的miRNA－let－7。从而使lin－4和let－7成为了miRNA家族的奠基性成员。在随后的一段时间里，许多研究者相继在其他物种中也发现了miRNA，这类小分子不仅在发育阶段起作用，同时也在不同的组织器官中表达，起到调节个体生理代谢的作用。miRNA的发现为研究生物的基因表达调控机制提供了新的视角。

2 新miRNA的判断标准

新的miRNA识别和鉴定的最初方法主要是采用构建c DNA文库进行测序，但是该方法的最大缺陷是新的miRNA会受到其它一些小分子RNA的影响，导致假阳性的产生。因而为了将miRNA与siRNA、其 他 非 编 码 小 分 子 RNA （non－coding RNA，ncRNA）或 mRNA 片段区分开，Ambros等［3］从RNA的生成、表达的角度提出了miRNA生成的判断标准为：（1）具有发夹结构前体，且miRNA序列在前体的一条臂上，发夹结构具有最低自由能，结构中不应含有大的内环或泡，尤其是大的不对称的泡；（2）miRNA序列及其前体在二级结构上具有进化上的保守性；（3）随着Dicer酶功能的降低，前体能够不断积累。

3 miRNA的结构特征和特点

miRNA的一个明显特征是转录它的前体常能形成分子内茎环结构，而且含有大量的U／G碱基对，这个前体需要经过核酸酶的进一步加工后形成成熟的miRNA。miRNA有以下5个明显的特点：（1）广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，且不具有开放阅读框（open reading frame，ORF）；（2）一般长度为20 nt～24 nt，但在3′端可以有1～2个碱基的长度变化；（3）成熟的miRNA 5′端有一磷酸基团，3′端为羟基，这一点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片段区别开来；（4）几乎所有的miRNA都是来自于前体的一条臂，无论是5′端还是3′端；（5）动物 miRNA的前体长度大约在60 nt～80 nt，而植物miRNA的前体长度变化幅度较大，一般从几十到几百nt［4］。除此之外，多数miRNA还具有高度保守性、组织特异性和时序性。

4 miRNA的合成和作用机制

在细胞核内编码miRNA的基因转录成初级转录本（primary miRNA，pri－miRNA）。pri－miRNA在一种叫Drosha的RNase的作用下，剪切为长度约70 nt、具有茎环结构的miRNA前体（precursor miRNA，pre－miRNA）［5］。pre－miRNA 在 Ran－GTP依赖的核质／细胞质转运蛋白Exportin 5的作用下，从核内运输到胞质中。在双链RNA专一性RNA内切酶Dicer的作用下，miRNA的前体被剪切成21 nt～25 nt长度的双链miRNA。成熟的miRNA与其互补序列互相结合成所谓miRNA：miRNA＊双螺旋结构（miRNA＊是miRNA的互补序列）；随后，双螺旋解旋，其中一条结合到RNA诱导的基因沉默复合物（RNA－induced silencing complex，RISC）中，形成非对称RISC复合物（asymmetric RISC assembly）［6］。在动物中，该复合物会结合到目标靶mRNA上，在大多数情况下，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3′UTR不完全互补配对，从而阻断后者的翻译过程。

5 miRNA的分析方法

迄今发现新的miRNA的方法主要有3种［7］。第1种方法是首先构建长度为16 nt～28 nt的小分子RNAs的cDNA文库，再将这些cDNA进行克隆、测序，然后将克隆序列用Blast软件等在该物种基因组数据库中进行同源性搜索，将具有同源性的基因组序列用Mfold软件进行二级结构预测分析，最后将具有发夹结构的小分子RNA进行Northern杂交或荧光定量PCR分析，检测其表达情况，最终将符合miRNA标准的小分子RNA鉴定为新的miRNA。

第2种方法是利用生物信息学软件进行预测。随着生物信息学技术的发展，一些预测生物体中可能存在microRNA基因的软件被开发出来，用这些软件对物种的全基因组序列进行分析，可以挖掘新的miRNA。对于没有进行全基因组序列测定的物种，可在已知miRNA基因附近搜索基因簇。

第3种是高通量测序与生物信息学相结合的方法。首先对该物种小RNAs进行高通量测序，在进行生物信息学处理前要先行去除3′接头、3′端和5′端空载体等污染片段，然后通过与该物种基因组进行比对定位，进一步排除其他污染片段并统计其分布信息。在此基础上，通过数据库比对等方法，对测序片段进行分类，去除核糖体 RNA（ribosome RNA，r RNA）、转运RNA（transfer RNA，tRNA）、小核RNA（small nuclear RNA，sn RNA）、核仁小分子RNA（small nucleolar RNA，snoRNA）、其他ncRNA以及重复序列等。用去除了这些非编码小RNA及重复序列且在基因组上有良好定位信息的片段搜索miRNA数据库，获得已知miRNA信息；未获得比对结果的片段可作为miRNA候选片段。

6 miRNA的生理功能

6．1 参与细胞增殖和分化 2002年，Hipfner等在果蝇中发现了第1个与增殖相关的miRNA基因—Bantam，该基因参与编码了果蝇幼虫抑制程序性死亡和促进细胞增殖的miRNA。通过生物信息学方法，作者发现Bantam的靶基因为Hid，而Hid是程序性死亡的主要激活因子。Bantam与Hid的m RNA的3′UTR互补结合，阻止了Hid的mRNA翻译，进而抑制蛋白的表达，最终起到了促进细胞增殖的作用。相反，如果敲除Bantam，Hid的表达水平将上调，诱导凋亡的发生，从而抑制细胞增殖［8］。

动物中的miRNA还参与细胞分化。miR－23与Hes－1基因能够较好地互补（互补性约为77%）。Hes－1以一种基本的螺旋－环－螺旋结构存在，它只在未分化细胞中表达。研究者将人工合成的miR－23加入到未分化的NT2神经细胞中，发现细胞内Hes－1基因的表达水平明显下降。但是将人工合成的miR－23突变体加入到未分化的NT2细胞中，Hes－1基因的表达水平保持不变，且其含量与将野生型miR－23加入到已分化的NT2细胞中是一样的，这表明miR－23在翻译水平上抑制了 Hes－1基因的表达，从而影响细胞分化［9］。

6．2 调控基因的表达 如前所述，miRNA对基因表达的调控主要是通过转录后的调控来实现的，miRNA通过与m RNA的3′UTR作用，从而抑制翻译的进行，最终抑制特定基因的表达。那些可以被miRNA调控的基因大多参与细胞的发育过程。6．3 调节细胞周期 miRNA对细胞周期有反馈调控作用，并且这种反馈调节机制在细胞中广泛存在。比如，人体内转录因子E2F家族是参与细胞周期调控和凋亡过程的重要分子，家族中E2F1、E2F2和E2F3（合称E2F1－3）可使静止的细胞进入S期。内源性的E2F1－3直接与人的13号染色体上含有6个miRNA的miR－17－92簇启动子结合，活化miR－17－92簇的转录，所生成的 miR－17－92家族 成员miR－20a反过来抑制E2F1－3的翻译过程，这样便在E2F1－3和 miR－17－92簇之间形成了调节的反馈抑制环路。从而影响E2F的蛋白合成，进而监控细胞周期中E2F分子的异常积累，对增殖信号进行控制，严格调控细胞周期［10］。Melton等［11］报道，miR－NA let－7参与抑制胚胎干细胞中的自我更新程序。这种抑制可以被一组胚胎干细胞ESCC miRNA（调控型miRNA，它们调控细胞周期）逆转，说明let－7和ESCC miRNA之间的互动作用提供了一个能够支配细胞命运的机制。

6．4 影响激素的分泌 Poy等［12］从葡萄糖诱导的鼠胰岛 β细胞系（murine pancreaticβ－cell line）MIN6及鼠胰岛α细胞系（murine pancreaticα－cell line）TC1的总RNA中克隆出了大量长度为21～23 nt的RNA，从中鉴定出了67种不同的miRNAs序列，其中11种是首次发现。在这些新的克隆产物中，miR－375含量最多。Northern杂交结果表明，miR－375只在MIN6、TC1及鼠胰岛中出现，在外分泌型胰腺细胞、肺、肝脏、脂肪、小肠、肾、脾、脑、心以及其他检测的组织中均未发现。而miR－376也只在MIN6和鼠胰岛细胞中特异表达。这些结果表明部分胰岛特异的miRNAs已经被鉴定出来。

6．5 miRNA与骨关节炎发生的关系 骨关节炎是一种严重的关节性疾病，miRNA－140与骨关节炎有着密切的关系。Miyaki［13］等通过细胞实验发现，骨关节炎患者的软骨细胞miRNA－140的表达水平明显低于正常人软骨细胞miRNA－140的表达水平，并且白细胞介素Ⅰ能抑制miRNA－140的表达水平。这说明在炎症状态下，miRNA－140的表达水平受到了影响，从而引发骨关节病的发生。

6．6 miRNA与肿瘤发生的关系 在肿瘤中miRNA的表达通常不受限制，而miRNA有数百个靶标，因此探明特异性miRNA和其靶标的相互作用与肿瘤发生的相关性是当前面临的主要问题。Bartel［14］报道，阻断miRNA对哺乳动物的一个单基因的调节会导致肿瘤基因的激活，研究人员检测了编码高移动组A2（high mobility group protein，HMGA2）蛋白的基因。HMGA2蛋白通过改变染色质结构来调节基因在多种癌症发生的早期表达，它是肿瘤中染色体重排的靶标，这样会使其羧基端和m RNA的3′UTR的缺失。但小鼠的HMGA2的3′UTR包含7个保守的let－7 miRNA补偿位点，它们在肿瘤发生的晚期表达，揭示了let－7可能调控HMGA2的表达。将let－7导入F9小鼠胚胎肿瘤细胞中，能抑制HMGA2的表达；而抑制内源性let－7则增加NIH3T3细胞中HMGA2的表达。以F9细胞为模型，构建HMGA2的3′UTR突变体，阻断了其中2个或7个let－7的补偿位点，结果发现，let－7共转染诱导HMGA2下调的水平与完整位点的数目有关，且这种抑制可以被共转染的、突变HMGA2的3′UTR的突变体或者是突变let－7的结合突变体逆转。由此提示，let－7能够直接抑制HMGA2。含野生型HMGA2开放阅读框而无突变的let－7结合位点的载体稳定表达则导致NIH3T3细胞的非贴壁依赖性生长，这些细胞也可在免疫缺陷鼠体内形成肿瘤，提示let－7是通过直接抑制癌基因来实现肿瘤抑制功能［15］。这些研究表明，miRNA介导的基因调节的缺失可能是肿瘤发生的共同机制，在研究癌症相关突变时应予以考虑。

6．7 miRNA的免疫调控作用 最近，研究者发现miRNA参与了免疫细胞的发育和炎症的发生等多种生理病理过程。比如，miR－155参与调控T、B细胞的分化，与B细胞抗体类别的转换密切相关；miR－17～92参与了B细胞的生长发育；miR－150负向调控B细胞发育和炎症反应；miR－181a参与T细胞的生长发育；miR－146a则参与负向调控炎症反应。而且，miRNA调控的免疫反应在应对刺激因子和病原过程中存在复杂的调控网络［16］。Ruggiero等［17］对miRNA调控炎症反应的发生机制进行了研究。作者分析了miRNA在受脂多糖（LPS）诱发的巨噬细胞活化中所起的作用，结果发现LPS显著诱导了miR－155的表达，而该诱导是通过KSRP（KH type shearing regulated protein，KH 型剪切调控蛋白）促进miR－155的成熟实现的。作者还证明，同时抑制miR－155和KSRP，能够提高LPS诱导的特定炎症介质的表达水平。

7 miRNA的应用

随着科学技术的发展和对miRNA研究的深入，miRNA的应用研究逐渐展开，在许多新的领域不断取得进展。

7．1 新型基因治疗方案的设计和发展 miRNA介导的基因活性调控机制的阐明可能对分子水平鉴定和治疗疾病有着重要的作用。理论上，原癌基因和转基因的表达都能被合成的miRNA抑制，这是一种简单有效的基因治疗手段。因此，目前已知一些人类疾病包括癌症和心血管系统失调等均涉及miRNA或其机制，利用miRNA特异地敲除靶基因可作为一种简单的基因治疗手段。

7．1．1 在抗病毒治疗方面的应用 2009年12月，科学家们报道了应用miRNA治疗丙型肝炎的新方法，丙型肝炎病毒通过miR－122（它在肝脏中有表达）来感染肝脏中的细胞。Lanford等［18］在对黑猩猩的研究中，应用一种被称为SPC3649的化合物来阻断在4个感染了丙型肝炎病毒的黑猩猩中的miR－122。结果发现，这种治疗手段可有效减轻黑猩猩丙型肝炎的症状，而且该丙肝病毒没有产生抵抗力。如果进一步的临床试验成功，这可能成为丙型肝炎治疗的有效途径。此外，miRNA与很多疾病的致病机制有关，如病毒如何建立潜伏感染及逃避宿主天然或适应性免疫系统。因此，揭示miRNA在与人类疾病相关的细胞活动中的作用将开辟蛋白功能调控的新机遇，而且有助于对其在干预治疗中的潜力进行评价。

7．1．2 在肿瘤治疗中的作用 由前文所提miRNA的生理功能可知，miRNA相关的肿瘤发生通常是由于某些特定的miRNA低表达或者不表达，或者某些特定miRNA的高表达。编码let－7家族的分子可以用于治疗某些特殊肿瘤如肺癌等，通过病毒或脂质体将miRNA分子转染细胞，这些技术通过在组织特异性的启动子控制下，表达pre－miRNA发夹和侧序列，激起内源性的miRNA加工和产生，以抑制靶基因。2010年，Ding等［19］在肝癌染色体变异区内鉴定了肝癌转移促进因子miR－151，发现染色体8q24．3位点的扩增导致了miR－151及其宿主基因FAK在肝癌中的高表达。而miR－151的过表达将会显著增加肝癌细胞的迁移与侵袭能力，并促进肝癌细胞发生肝内转移。研究者进一步鉴定出RhoGDIA基因是miR－151的靶基因，介导miR－151的促肝癌转移功能。miR－151与宿主基因FAK协同作用活化Rac、cdc42及Rho GTPase，进而促进肝癌细胞的迁移、侵袭与转移。通过利用抗miRNA的方法来抑制miRNA的表达，使肿瘤细胞的转移得到抑制。上述研究为肝癌治疗提供了新的思路，同时也为将抑癌miRNA的全身给药作为一种抗癌途径提供了理论依据。

7．2 在肿瘤检测中的应用 寻找肿瘤标志物并对其进行准确检测一直都是癌症研究领域的重点。Wang等［20］研 究 了 miR－21、miR－210、miR－155 和miR－196a等4个miRNA在胰腺癌患者和健康人群血清中的表达情况，结果发现结合4个miRNA的表达水平对胰腺癌的诊断其敏感性为64%、特异性为89%，因此认为血清microRNA作为肿瘤诊断和预后的标志物，可应用于早期肿瘤的检测，而且检测损伤小、灵敏度高、稳定性好，值得进一步研究。

7．3 在抗心律失常方面的应用 近年来，研究者发现了miRNA在心血管系统中的关键调控作用，miRNA通过调节多种心血管系统中重要蛋白的表达，参与心脏发育和心脏的病变过程，如心肌肥厚、心肌衰竭、心律失常等。miRNA参与调控多种心脏电活动相关蛋白的表达，例如HCN2（窦房结通道蛋白2）、HCN4、GJA1、KCNJ2、KCNH2、KCNQ1、和ERK等，miRNAs的失衡将引起这些离子通道蛋白的功能失调进而导致心肌肥厚、心力衰竭和心肌缺血时恶性心律失常发生，因此，miRNA是潜在的心律失常作用靶点。另外，动物实验证明，miR－1和miR－133在心肌组织表达量最为丰富，与各种心律失常关系密切。Ai等［21］研究发现急性心肌梗死病人外周血miR－1在治疗前后表达量明显不同，治疗前miR－1含量显著增高，治疗后恢复至正常水平。此研究提示，miR－1可能成为潜在预警心肌缺血性心律失常发生的生物标志物，并有望研制出能快速检测miRNA的试剂盒，用于临床预警心肌缺血性心律失常或评估心脏猝死发生的危险性。以miRNA作为治疗靶点，不同于经典的治疗方法，是通过调节靶基因m RNA的稳定性或抑制翻译过程而发挥作用的。

7．4 在功能缺失转基因动物建立过程中的应用

利用miRNA及其沉默靶基因表达的机制已经发展出一种新的、简单的方法，用于建立功能缺失转基因动物。例如，为了确定miRNA作用过程中的关键分子，通过人工构建的miRNA，现已建立起功能缺失突变的斑马鱼模型。由于启动子的不相容性，功能缺失的转基因斑马鱼不能利用siRNA，而是用内含子miRNA来完成。miRNA转基因动物模型的潜在应用是在体内检测基因的功能和药物的作用机制，由于这种策略可产生用于功能缺失研究的miRNA，所以该类型的动物模型又为miRNA研究提供了空前的资源。

7．5 在育种中的应用 李秋玲等［22］利用实验方法进行了中国荷斯坦牛HSF1基因microRNA SNPs与耐热性能的相关性研究。结果发现了2个miRNA种子序列新SNPs——T909C和G4693T。该研究首次发现中国荷斯坦牛HSF1基因miRNA SNPs与热应激反应存在显著相关，从而说明HSF1基因miRNA SNPs可作为选育高耐热性奶牛的新遗传标记应用于育种实践中。

8 存在的问题及研究展望

虽然miRNA的研究己经取得了很大的进展，但从现有的研究成果来看，还存在一些问题亟待解决，如：（1）除现有的几种模式生物的miRNA外，更多物种的miRNA还有待于进一步发现；（2）miRNA基因的转录和miRNA加工的信号通路尚未完全确定；（3）目前研究的miRNA的作用形式单一，是否存在其他的作用形式尚无法确定；（4）如何解决3′端不完全与目的靶基因匹配而引起的靶标位点鉴定上的困难尚无很好的解决办法；（5）miRNA靶基因的预测存在假阳性的问题，以及其与靶基因的相互作用机制问题尚待解决；（6）目前的研究仅限于miRNA在正常或疾病状态下的表达谱变化问题，而miRNA在正常组织发育和疾病发生中所发挥的具体作用机制的相关报道尚很少；（7）miRNA的实际应用还有待于进一步拓展。

尽管目前miRNA的研究还基本处在理论层面上，但是研究者已经可以系统地鉴定miRNA及其靶基因，并通过过量表达或沉默技术来研究特殊miRNA的功能［23］。人工构建的miRNA也能特异性地降解靶m RNA，为在分子水平上研究新一代药物提供了除siRNA以外的另一个切入点。所以，研究者利用过量表达或沉默技术研究特殊miRNA的功能、开展拮抗miRNA的化学合成药物研究等，对以miRNA为基础的疾病诊断和治疗策略具有重要意义。相信随着研究的深入，miRNA研究中存在的上述问题将会被逐步解决，其必将在生命起源和物种进化、基因表达调控的复杂性、疾病发生和发展的机制等方面发挥更为深远的作用，有助于科学家们对众多生命之谜的进一步破解。

［1］Lee RC，Feinbaum RL，Ambros V．The C．elegans heterochronic gene lin－4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin－14［J］．Cell，1993，75（306）：843－846．

［2］Reinhart BJ，Slack FJ，Basson M，et al．The 21－nucleotide let－7 RNA regulates development timing in Caenorhabditis elegans［J］．Nature，2000，403（6772）：901－906．

［3］Ambros V，Bartel B，Bartel DP，et al．A uniform system for microRNA annotation［J］．RNA，2003，9（3）：277－279．

［4］Lau NC，Lim LP，Weinstein EG，et al．An abundant class of tiny RNAs with probable regulatory roles in Caenorhabditis elegans［J］．Science，2001，294（5543）：858－862．

［5］Lee Y，Ahn C，Han J，et al．The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing［J］．Nature，2003，425：415－419．

［6］Khvorova A，Reynolds A，Jayasena SD．Functional siRNAs and miRNAs exhibit strand bias［J］．Cell，2003，115：209－216．

［7］Wang JF，Zhou H．Identification of microRNAs from Oryza sativa［J］．Nucleic Acids Res，2004，32（5）：1688－1695．

［8］David R，Hipfner，Julius Brennecke，et al．Bantam encodes a developmentally regulated microRNA that controls cell proliferation and regulates the propoptotic gene Hid in Drosophila［J］．Cell，2003，113（1）：25－36．

［9］Jing Q，Huang S，Guth S，et al．Involvement of MicroRNA in AU－Rich Element－Mediated mRNA Instability［J］．Cell，2006，120（5）：623－634．

［10］Donnell KA，Wentzel EA，Zeller KI，et al．c－myc－regulated microRNAs modulate E2F1 expression［J］．Nature，2008，435（7043）：839－843．

［11］Melton C，Judson R L，Blelloch R．Opposing microRNA families regulate self－renewal in mouse embryonic stem cells［J］．Nature，2010，463（7281）：621－626．

［12］Poy M N，Eliasson L，Krutzfeldt J，et al．A pancreatics is letspecific microRNA regulates insulin secretion［J］．Natrue，2004（432）：226－230．

［13］Miyaki S，Nakasa T，Otsuki S，et al．MicroRNA－140 is expressed in differentiated human articular chondrocytes and modulates interleukin－1 responses［J］．Arthritis Rheum，2009，60（9）：2723－2730．

［14］Bartel DP．MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanism and function［J］．cell，2004，23（116）：197－281．

［15］Zhu S，Si ML，Wu H，et al．MicroRNA－21 targets the tumor suppressor gene tropomyosin1 （TPM1）［J］．J Biol Chem，2007，282（19）：14328－14336．

［16］胡志德，孙懿，黄元兰，等．microRNA的免疫调控作用及其机制的研究［J］．中国肿瘤生物治疗杂志，2010，17（61）：678－682．

［17］Ruggiero T，Trabucchi M，De Santa F，et al．LPS induces KH－type splicing regulatory protein－dependent processing of microRNA－155 precursors in macrophages［J］．FASEB J，2009，23（9）：2898－2908．

［18］Lanford R E，Hildebrandt－Eriksen E S，Petri A，et al．Therapeutic silencing of microRNA122 in primates with chronic hepatitis C virus infection［J］．Science，2010，327（5962）：198－201．

［19］Ding J，Huang S，Wu S，et al．Gain of miR－151 on chromosome 8q24．3 facilitates tumour cell migration and spreading through downregulating RhoGDIA［J］．Nat Cell Biol，2010，12（4）：390－399．

［20］Wang J，Chen J，Chang P，et al．MicroRNAs in plasma of pancreatic ductal adenocarcinoma patients as novel blood－based biomarkers of disease［J］．Cancer Prev Res（Phila Pa），2009，2（9）：807－813．

［21］Ai J，Zhang R，Li Y，et al．Circulating microRNA－1 as a potential novel biomarker for acute myocardial infarction［J］．Biochem Biophys Res Commun，2010，391（1）：73－77．

［22］李秋玲，鞠志花，贾祥捷，等．中国荷斯坦牛HSF1基因microRNA SNPs与耐热性能的相关性研究［J］．中国农业科学，2011，44（3）：570－578．

［23］Kota J，Chivukula RR，O′Donnell KA，et al．Therapeutic microRNA delivery suppresses tumorigenesis in a murine liver cancer model［J］．Cell，2009，137（6）：1005－1017．

Q522

A

1002－2694（2012）02－0167－05

＊国家科技重大专项项目（2012ZX10004220－008）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2010JB12，2012JB16）；上海市科技兴农重点攻关项目［No．沪农科攻字（2005）3－4］联合资助

陈兆国，Email：zhaoguochen＠shvri．ac．cn；

程天印，Email：cty68＠yahoo．cn

1．湖南农业大学动物医学院，长沙 410128；

2．中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241；3．河南安阳市汤阴县畜牧兽医总站，汤阴 456150

2011－10－20；

2011－11－28