度冷丁溶液对成年大鼠臀肌挛缩症的影响

吴 兴，韩永台，赵建勇，陈广先，于从海，杜志国，王华柱，史继军

河北省沧州中西医结合医院骨五科（沧州 061000）

臀肌挛缩症（gluteal muscle contracture，GMC）又称臀肌纤维化，是由多种原因引起的臀肌及筋膜纤维挛缩变性，导致髋关节功能受限，表现出特有的步态、体征、髋关节功能障碍，特别是髋内收困难和髋外展畸形的临床综合征[1]。确切的发病机制尚未完全阐明。苯甲醇做青霉素溶媒是最危险的因素[2]，近年来随着对苯甲醇副作用的认识，临床上已弃用苯甲醇作为青霉素的溶媒，减少了臀肌挛缩症患者的数量。但近些年来一些有长期度冷丁注射史的臀肌挛缩症患者逐渐增多。为研究长期肌肉注射度冷丁对臀肌纤维化的影响作用，进行了此项动物实验。

1 材料与方法

1.1 材料 健康成年Wistar大鼠90只，8周龄，体重（200±20）g，由河北医科大学动物实验中心提供。度冷丁购自沈阳第一制药厂，规格为2 mL：100 mg。苯甲醇注射液购自河南华利药业有限责任公司，规格为2 mL：40 mg。生理盐水购自石家庄制药厂，规格为250 mL/袋。青霉素购自石家庄制药厂，规格为160万U/瓶，批号：X1110402。

1.2 分组及模型制备

大鼠用标准饲料喂养1 周，按照机械抽样法随即分为3组：A组为阳性对照组30只，注射苯甲醇青霉素溶液8周；B组为阴性对照组30只，注射生理盐水青霉素溶液8周；C组为实验组30只，注射度冷丁溶液8 周。3 组均再饲养2 周后处死。均选用左臀部注射相应药物，每日注射2 次，每次0.1 mL，中间间隔6 h以上。

1.3 观察指标 每日观察大鼠步态变化，下肢畸形，髋关节被动活动时弹响情况。动物处死后取注射侧臀肌观察肌肉颜色，挛缩带、出血点等，触摸肌肉弹性变化。

显微镜下仔细将臀部肌肉完整取出，剔除表面的软组织，立即置入福尔马林固定液中固定，梯度乙醇脱水：80%、90%、100%、100%乙醇各1 h，二甲苯透明2 h，浸蜡2 h，石蜡包埋。将包埋好的组织块在切片机上连续切片，厚度为4 μm，从每块标本中央区的连续切片中选取1张裱于蛋白甘油处理的载玻片上，然后在60 ℃温箱内干燥24 h。将切片置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ脱蜡各15 min，浸入苏木素3 min，自来水冲洗。用1%盐酸分色，浸入伊红2 min，自来水冲洗。梯度乙醇脱水：70%乙醇3 min、80%乙醇5 min、90%乙醇5 min、100%乙醇Ⅰ15 min、100%乙醇Ⅱ15 min，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明各15 min。中性树胶封片后MASSON 染色。显微镜下观察肌肉纤维排列情况，胶原纤维数量，结缔组织数量，细胞核大小，中性粒细胞及淋巴细胞数量等。

1.4 统计学分析 多组间计量资料用行×列χ2比较，如组间有差异（P ＜0.05），进一步用bonferoni法进行多重比较，P＜0.05认为有统计学差异。

2 结果

2.1 步态观察 A 组注射8 周后，21 只跛行十分严重；B 组在第7 周时1 只有步态异常表现，行走稍跛行，停止注射2 周后恢复。其余注射期间未发现步态异常。C 组在注射8 周后11 只步态异常，停止注射后未见明显恢复。3组间比较P均小于0.05，三组间比较均有统计学差异。

2.2 臀肌病理学变化

2.2.1 肉眼观察 A组8周后21只大鼠臀肌色泽苍白，可见挛缩带，累及臀大肌全层，肌肉无弹性，呈腱样组织，髋关节活动受限（图1的1、2）。B组8周后可见肌肉颜色红润，未见挛缩带，肌肉弹性好。1只发现纤维挛缩束带。C组8周后11只大鼠臀肌色泽苍白，肌肉颜色红润，部分可见挛缩带，未累及臀大肌全层，肌肉弹性差，停止注射后未见恢复（图1 的3、4）。3 组间比较P 均小于0.05，3 组间比较均有统计学差异。

图1 各组大鼠臀肌改变肉眼特点

2.2.2 光镜观察 A组8周后21只可见肌纤维排列紊乱卷曲，肌细胞明显萎缩，胞核增多并延肌纤维呈串珠样排列，肌纤维间隙明显增高，较多中性粒细胞及淋巴细胞浸润，大量胶原纤维增生，纤维化区域可见大片致密胶原纤维结缔组织，粗大胶原束内可见一些细长梭形的纤维细胞，与胶原纤维平行走向，同肌腱结构相似（图2 的A1、A2）。B 组8 周后可见肌纤维排列整齐，核大小适中，染色质着色均匀；可见中性粒细胞及淋巴细胞浸润。C组8周后11只肌纤维排列紊乱，胞浆着色较淡，核固缩，肌纤维间间隙明显增宽，中性粒细胞及淋巴细胞浸润，肌纤维间及肌束间可见胶原纤维。其它肌纤维正常（图2的B1、B2）。

3 讨论

图2 各组大鼠臀肌改变的镜下特点

大鼠臀肌注射苯甲醇青霉素溶液注射8周后大部分大鼠出现GMC的症状，停止注射2周后症状无改善。大体观察可见肌肉颜色苍白，弹性差，胶原纤维增生，纤维化区域可见致密胶原纤维结缔组织。光镜下可见粗大胶原束内可见一些细长梭形的纤维细胞，与胶原纤维平行走向，同肌腱结构相似。研究发现，大鼠臀肌注射苯甲醇青霉素溶液8 周可导致GMC，在停止注射后，GMC 不可恢复。大鼠臀肌注射生理盐水青霉素溶液2 个月，并未在全部鼠制作出GMC模型。只有1只大鼠出现了行走跛行，大体观察臀肌可见挛缩带，肌肉弹性稍差，髋关节活动无明显差异，光镜下可见肌纤维排列较规则，胞浆着色尚均匀，肌纤维间隙增宽，肌纤维间及肌束间均可见绿染胶原纤维，可见频繁肌肉注射生理盐水青霉素溶液是GMC 的一个影响因素。但对影响因素的大小，本实验因实验时间较短，未得出结论。大鼠在注射度冷丁溶液8周后11只步态异常，停止注射后未见明显恢复。大体观察臀肌色泽苍白，肌肉颜色红润，部分可见挛缩带，未累及臀大肌全层，肌肉弹性差。光镜下可见肌纤维排列紊乱，胞浆着色较淡，核固缩，肌纤维间间隙明显增宽，中性粒细胞及淋巴细胞浸润，肌纤维间及肌束间可见胶原纤维。其它肌纤维正常。研究发现，臀肌注射度冷丁溶液8 周可导致大鼠GMC，在停止注射后，GMC 不可恢复。通过几种药物对大鼠臀肌影响作用的比较，认为苯甲醇青霉素注射对大鼠GMC 的影响作用大于度冷丁和生理盐水青霉素注射，度冷丁注射对大鼠GMC的影响作用大于生理盐水青霉素注射。

在本实验中，注射苯甲醇青霉素溶液造成的患GMC大鼠最多，生理盐水青霉素溶液对大鼠GMC的影响最为轻微。苯甲醇作为溶媒可以在注射时起到止痛的作用，因此在上个世纪八十年代应用较多，随后长期注射苯甲醇溶液可以导致儿童及成人GMC被发现，国内诸多学者对此做过相应的临床及实验室研究[3]。因此苯甲醇溶液现在已基本不再作为溶媒使用[4]。本实验再次证明了苯甲醇作为溶媒肌注引起GMC的危险性，所以在临床上应避免使用苯甲醇溶液作为溶媒使用。目前普遍使用的生理盐水溶媒有无导致GMC的作用，在本实验中未得出阳性结果，有待于进一步研究。近年来有长期度冷丁注射史的成人患者逐渐增多。长期臀肌注射度冷丁是不是GMC 的影响因素，国内外未查及此方面相关报道。通过本实验发现，长期注射度冷丁溶液有可能是GMC的一个危险致病因素。因此在临床工作中，遇到GMC的患者应询问有无长期度冷丁注射史，并告知需长期臀肌注射杜冷丁溶液的患者，长期臀肌注射杜冷丁溶液有GMC的风险。

总之，长期肌肉注射度冷丁溶液有可能是GMC的一个危险致病因素，临床上尚应避免使用苯甲醇溶液作为溶媒使用。

[1]卢浩浩,刘国辉,杨述华,等.臀肌挛缩症病因及诊断的研究进展[J]. 中国矫形外科杂志,2007,15(3):207-209.

[2]唐学阳,刘利君,辛文琼,等.取消苯甲醇肌注对预防臀肌挛缩症的初步评价[J]. 现代预防杂志,2009,36(19) :3789-3791.

[3]李群伟,景学安,吴多文,等.青霉素溶液对大鼠臀肌纤维化影响的实验观察[J]. 泰山医学院学报,2002,23(4):334-336.

[4]王剑,孔繁增,苏峰,等.臀肌挛缩发病聚集区人群干预效果的前瞻性观察[J]. 河北北方学院学报(医学版),2007,24(2):5-8.