乙型病毒性肝炎患者血清IFN-γ、IL-10、TGF-β1检测的临床意义

赵磊 刘殿武 王俊英 南月敏 戴二黑

乙型肝炎是我国的常见病，其发病率高、治疗困难、对人类健康危害严重。细胞因子对乙型肝炎的作用很复杂，成为近年来研究的重点。本实验通过观察分析肝炎患者血清中IFN-γ、白介素-10(IL-10)、TGF-β1的含量及其与肝功能和肝纤维化指标的关系，从而评价乙型肝炎患者血清三种细胞因子检测的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 按2000年全国第十次病毒性肝炎及肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准［1］随机选取70例于2005年11月至2006年5月在河北医科大学附属第三医院和石家庄市第五医院住院的乙型肝炎患者。其中急性肝炎(AHB)组6例;慢性肝炎轻度(CHBⅠ)组15例，男10例，女5例;平均年龄(43±8)岁;慢性肝炎中度(CHBⅡ)组17例，男11例，女6例;平均年龄(47±8)岁;慢性肝炎重度(CHBⅢ)组14例，男11例，女3例;平均年龄(41±11)岁;肝硬化(LC)组18例，男11例，女7例;平均年龄(54±8)岁。入选病例均除外心、肾、脑、肺等重要脏器疾患，并除外甲、丙、丁、戊型肝炎。以18例健康体检者为对照(NC)组，男12例，女6例;平均年龄(44±8)岁。

1.2 方法 上述所有受检对象清晨空腹抽肘静脉血4 ml，分离血清，－80℃保存备用。肝功能指标检测采用日本产全自动生化仪;HBV-DNA定量采用PCR法;肝纤四项指标检测采用放射免疫法;血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 检测采用 ABC-ELISA法，试剂盒购自北京鼎国生物工程公司，实验操作严格按照试剂盒操作说明书进行。

1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，均数比较采用F检验和q检验，相关性采用直线相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 6 组血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 水平比较 在 AHB、CHB及LC组中，AHB、CHB组血清IFN-γ水平显著高于NC组，AHB组显著高于CHB及LC组，CHBⅢ和LC组显著高于CHBⅠ和CHBⅡ组，LC组显著高于CHBⅢ组，差异均有统计学意义(P＜0.05或 ＜0.01);AHB、CHB 和 LC 组血清 IL-10水平显著高于NC组，AHB组显著低于CHB及LC组，CHBⅢ和LC组显著高于CHBⅠ和CHBⅡ组，差异均有统计学意义(P＜0.05);AHB、CHB和LC组血清TGF-β1水平显著高于LC组，AHB组显著低于CHB及LC组，CHBⅡ、CHBⅢ和LC组显著高于CHBⅠ组，LC组显著高于CHBⅡ和CHBⅢ组，差异均有统计学意义(P ＜0.05 或 ＜0.01)。见表1。

2.2 CHB 和 LC 患者血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 与肝功能的关系 在CHB和LC患者血清中，IFN-γ与ALT无相关关系(r=－0.165，P ＞0.05)，与TBIL 呈显著负相关(r= －0.704，P ＜0.01)，与 ALB 和 PTA 呈显著正相关(r=0.547、0.693，P ＜0.01)，;IL-10 与 ALT 无相关关系(r= －0.185，P ＞0.05)，与TBIL呈显著正相关(r= －0.366，P ＜0.05)，与 ALB和 PTA呈显著负相关(r= －0.655、－0.564，P ＜0.01);TGF-β1 与ALT无相关关系(r=0.04，P ＞0.05)，与 TBIL呈显著正相关(r=0.701，P ＜0.05)，与 ALB 和 PTA 呈显著负相关(r=－0.577、－0.607，P ＜0.01)。见表1。

表1 6 组研究对象血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 水平pg/ml，x¯±s

2.3 CHB 和 LC 患者血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 与肝纤四项的关系 在CHB和LC患者血清中，IFN-γ与肝纤四项呈显著的负相关(r= －0.648、－0.744、－0.822、－0.592，P ＜0.01);IL-10除与HA具有明显正相关外(r=0.374，P ＜0.01)，与其余三项均无相关关系(r=0.156、0.229、0.188，P ＞0.05);TGF-β1 与肝纤四项呈正相关(r=0.649、0.552、0.642、0.521，P ＜0.01)。

2.4 CHB和LC患者血清肝纤四项与血清HBV-DNA的关系在CHB和LC患者血清中，HBV-DNA阳性患者肝纤四项水平要显著高于阴性患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。而且随着HBV-DNA复制水平的增高，肝纤四项水平也逐渐增高。见表2。

表2 CHB和LC患者血清肝纤四项与血清HBV-DNA的关系x¯±s

3 讨论

乙肝自然感染率高，转归差异大，其发病机制尚未完全阐明。机体抗病毒免疫的功能及病毒逃避免疫的能力决定HBV感染的发生、发展和转归。辅助性T淋巴细胞根据其分泌细胞因子的不同，可将其分为Th1和Th2两个亚群［2］。Th1亚群分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β等，主要参与细胞介导的免疫反应。Th2亚群分泌IL-4、IL-5、IL-6等，主要促进体液免疫反应。近年来认识到Th1/Th2失衡可能是HBV感染慢性化的重要机制。Penna等［3］检测了急性自限性乙型肝炎急性期和恢复期患者外周血Th细胞分泌的细胞因子。急性期产生Th1类细胞因子(IFN-γ)明显比对照组高。恢复期患者Th细胞表现为Th0功能，同时分泌Th1和Th2细胞因子(IL-4、IL-5)，提示Th1细胞不仅与肝损害有关，可能在控制感染，促进疾病恢复方面起作用。

本次实验发现，在不同临床类型乙型肝炎患者中，AHB和CHB组血清IFN-γ和IL-10水平均显著高于正常组，AHB组血清IFN-γ水平也显著高于CHB组，而AHB组血清IL-10水平显著低于CHB组，差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.01)。此研究表明，随着病情的逐渐加重，血清IFN-γ水平逐渐下降，而血清IL-10和TGF-β1水平逐渐增高。提示三种细胞因子与慢性乙型肝炎的病情有关系。这些表明在急性肝炎患者体内以Th1类细胞介导的细胞免疫反应为主，而在慢性肝炎患者体内以Th2类细胞介导的体液免疫反应为主，随着Th2类细胞合成的增加，限制了Th1类细胞的合成，削弱了IFN-γ杀灭 HBV的作用，导致HBV在体内持续存在，从而引起肝炎患者的慢性化。这与文献报道［4］一致。因此，IL-10可能是决定机体产生有效的免疫反应抵抗HBV感染的关键因子。

本研究结果还表明，CHB和LC组患者血清IFN-γ与TBIL呈显著负相关(P ＜0.01)，与ALB、PTA呈显著正相关(P ＜0.01);血清IL-10与TBIL呈显著正相关(P ＜0.01)，与ALB、PTA呈显著负相关(P＜0.01)。说明了上述因子参与了慢性乙型肝炎的肝损伤，并与肝储备功能有关。

现已知TGF-β1是肝纤维化形成过程中一个重要的调控因子，促进了肝纤维化的发展。TGF-β1在肝纤维化中的主要作用是激活星状细胞，促使细胞外基质产生增加;抑制胶原酶及基质金属蛋白酶使胶原降解减少及间接促星状细胞增殖作用［5，6］。本研究结果表明，CHB 和 LC 组患者血清 TGF-β1 水平升高，且其升高水平与乙型肝炎的严重程度一致。随着病情加重和肝纤维化进展，血清TGF-β1水平与TBIL呈正相关，与ALB和PTA呈负相关，提示血清TGF-β1与肝脏储备功能下降有关。测定患者血清TGF-β1在一定程度上能反映肝功能。

血清PCⅢ、LN、HA、CⅣ水平是肝脏基质代谢产物，其血清水平从不同侧面反映肝脏细胞外间质的代谢情况和肝纤维化进展情况［7］。本实验结果表明，血清IFN-γ水平与肝纤四项水平均呈明显负相关，表明IFN-γ参与肝纤维化的形成，有较强的抗肝纤维化作用，其水平的降低，提示抗纤维化能力减弱;血清IL-10水平只与肝纤四项中的HA有显著正相关，而与其他三项并无相关关系，提示IL-10伴随着肝纤维化的进程，其具体作用机制有待进一步深入研究。血清TGF-β1水平与肝纤四项呈直线正相关，其结果与报道相［8］一致，说明TGF-β1是参与ECM的合成与沉积的关键因子，提示TGF-β1与肝纤维化密切关系，能反映肝纤维化程度和肝硬化的形成。

本实验结果还表明，肝纤四项水平在HBV-DNA阳性患者中显著高于阴性患者。乙肝病毒持续存在造成对肝脏的持续损害，则使HSC持续活化，促肝纤维化进展。由此可见，抗病毒治疗对于慢性病毒性肝炎患者来说是根本治疗，既可以清除病毒，又可延缓肝硬化的形成。

细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β1不仅与肝细胞的损伤有良好的相关性，而且与肝纤维化的形成密切相关。因此，测定乙肝病毒及细胞因子水平，在监测慢性乙型肝炎疾病的发生发展、肝纤维化进展程度以及评价治疗疗效及预后具有重要的实用价值。

1 中华医学会传染病与寄生虫病学分会，肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，2001，19:56-62.

2 Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cell clone 1 definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins.J Immunol，1986，136:2348-2357.

3 Penna A，Prete GD，Cavalli A，et al.Predorminant T-helper 1 cytokine profile of hepatitis B virus nucleocapsid-specific T cells in acute self-limited hepatitis B.Hepatology，1997，25:1022-1027.

4 张萍，颜学真，吴文漪，等.慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Th1、Th2型细胞标志物及其细胞因子的表达.中华传染病杂志，2003，21:42-43.

5 Annoni G，Weiner FR，Zem MA.Increased transforming growth factor-β1 expression in human liver disease.J Hepatology，1992，14:259.

6 Bachem MG，Meyer D，Melchior R，et al.Action of rat liver perisinusoidal lipocytes by transforming growth factor derved form myofiblastlike cell a potential mechanism of self perpetuation in liver fibrogenesis.J Clin Inwest，1992，89:19-27.

7 刘露，张木坤，何伶俐.肝纤维化血清标志物在肝病诊断中的意义.放射免疫学杂志，2004，17:23-25.

8 张立煌，方海林，裘云庆，等.病毒性肝炎患者血清转化生长因子β1活性及其与肝纤维化的关系.中华传染病杂志，1997，15:82.