高效液相色谱法同时测定调味料中的8种合成着色剂

朱虹，佘晓麒，黄让明

（广东省汕头市质量计量监督检测所，广东汕头 515041）

高效液相色谱法同时测定调味料中的8种合成着色剂

朱虹，佘晓麒，黄让明

（广东省汕头市质量计量监督检测所，广东汕头 515041）

建立一种同时测定调味料中8种合成着色剂的高效液相色谱分析方法。样品经30%甲醇水溶液提取，采用Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6 mm），以甲醇-1.55 g／L乙酸铵为流动相，在最佳梯度洗脱条件下对8种合成着色剂进行分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。8种合成着色剂的线性范围为0.5～10.0 μg／mL，回收率为95.0%～101%。对样品进行6次重复测定，峰面积测定结果的相对标准偏差为0.84%～3.51%(n=6)。

调味料；合成着色剂；高效液相色谱法

食品着色剂(食用色素)是以给食品着色为主要目的的添加剂。食用色素使食品具有悦目的色泽，对增加食品的嗜好性及刺激食欲有重要作用。着色剂按来源可分为人工合成着色剂和天然着色剂［1］。食用天然着色剂主要是指由动、植物组织中提取的色素，包括微生物色素、动物色素及无机色素。常用的天然着色剂有辣椒红、甜菜红、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、可可色素、焦糖色素等。天然着色剂色彩易受金属离子、水质、pH值、氧化、光照、温度的影响，一般较难分散，染着性、着色剂间的相溶性较差，且价格较高。合成着色剂的原料主要是化工产品。我国食品添加剂使用卫生标准（GB 2760-2011）列入的合成色素有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝等。与天然色素相比，合成色素颜色更加鲜艳，不易褪色，且价格较低。除了食用色素外，目前市面上还发现某些食品非法添加如酸性橙Ⅱ等非食用的着色剂，这些着色剂作为工业用途的化工产品，属于食品中的禁用添加物质。超剂量摄入合成着色剂，会对人体造成不同程度的危害。调味料用以食物调味，与日常生活息息相关，为使其色泽鲜亮诱人，常添加着色剂，如番茄酱通常添加日落黄和赤藓红为着色剂。调味料是餐桌上不可或缺的一类产品，对其着色剂进行监控，对保障人民身体健康有着重要意义。

目前测定合成着色剂常见的方法包括高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法［1］和毛细管电泳法［2］等。为了满足日常检验的需要，笔者通过对样品前处理和色谱条件进行优化，建立了一种测定调味品中柠檬黄、胭脂红、苋菜红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红、酸性橙Ⅱ等8种常见合成着色剂的高效液相色谱法，该方法操作简便、高效。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Agilent1200型，配有二极管阵列检测器DAD，美国安捷伦科技有限公司；

无机滤膜(聚醚砜)和有机滤膜（尼龙）：13 mm×0.45 μm，上海安谱科学仪器有限公司；

甲醇：色谱纯；

柠檬黄、胭脂红、苋菜红、日落黄、诱惑红、亮蓝标准溶液：浓度均为1.00 mg／mL，国家标准物质研究中心；

赤藓红、酸性橙Ⅱ：德国Dr公司；

乙酸铵溶液：1.55 g／L；

标准储备液：分别称取100 mg赤藓红、酸性橙Ⅱ，用甲醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中，配制成1.0 mg／mL标准储备液；

实验用水：超纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A为甲醇，流动相B为乙酸铵溶液，洗脱条件见表1；流速：1.0 mL／min；后运行：15 min；柱温：40℃；检测波长：254，610 nm ；进样量：10 μL。

表1 HPLC梯度洗脱条件

1.3 标准溶液配制

用纯水将各标准品稀释成浓度为50 μg／mL的混合标准溶液，再用纯水稀释成浓度为0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μg／mL 的系列标准工作溶液，临用前配制。

1.4 实验方法

将固态样品粉碎，将半固态、液态样品混匀。准确称取5 g样品（精确至0.001 g）于50 mL比色管中，用30%甲醇水溶液定容至50 mL，旋涡1 min，60℃水浴 15 min，冷却，以 12 000 r／min 离心5 min，取上清液经0.45 μm滤膜过滤后，在1.2色谱条件下进行测定。采用保留时间识别各目标组分，以外标法确定相应组分的浓度。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理条件的选择

（1）提取溶剂

由于各种着色剂在水溶液及甲醇溶液中的溶解性能各不相同，分别用水、5%氨化甲醇、甲醇、30%甲醇溶液作为提取溶剂对加标样品进行前处理。结果发现，用水直接提取，样品溶液混浊，过滤膜净化较为困难，且回收率低；用5%氨化甲醇提取，操作繁琐，且回收率低；用甲醇提取，回收率理想，但有机溶剂用量较大，不利于环保和节约成本；用30%甲醇水溶液提取，能达到较好的提取效果，且步骤简便，成本低。故选择30%甲醇水溶液作为提取溶剂。

（2）提取方法

分别采用60℃水浴加热和超声萃取两种方法对样品进行处理，实验发现，在相同的提取时间下，60℃水浴加热的提取效果比超声萃取效果好，且在15 min时，提取浓度趋于稳定。故选择60℃水浴加热15 min对样品进行提取。

2.2 色谱条件选择

为保证各组分快速、有效地分离，采用梯度洗脱的方法，梯度洗脱条件见1.2。分别取各组分浓度为0.05 mg／mL的溶液，在200～800 nm波长范围内扫描。结果显示，柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性橙Ⅱ、赤藓红分别在429，523，509，483，505，628，479，531 nm 处有强吸收，且柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性橙Ⅱ、赤藓红在254 nm处均有较强吸收。故采用多通道检测，柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性橙Ⅱ、赤藓红在254 nm处检测，亮蓝在610 nm处检测。

2.3 色谱图

在1.2设定的色谱条件下对8种着色剂混合标准样品进行分析，得到了较好的分离效果，结果见图1，其中图1a和图1b分别为254，610 nm处检测所得色谱图。

图1 8种着色剂混合标准样品色谱图

2.4 线性方程和定量限

对1.3中系列标准溶液进行测定，以组分的响应值为纵坐标（y），组分的含量为横坐标（x，μg／mL）进行线性回归，线性范围为 0.5～10.0 μg／mL，按10S／N［4］计算各组分的定量限，回归方程、定量限见表2。

表2 各组分线性回归方程、相关系数及定量限

2.5 方法精密度和回收率

以具代表性的辣椒酱作为本底，在空白样品中加入一定量的标准样品，按照1.4实验方法进行预处理，在1.2设定的色谱条件下，做回收率和精密度试验，试验结果见表3。由表3可知，8种合成着色剂的加标回收率在95.0%～101.0%之间，相对标准偏差均小于4%，由此可见，该法测量结果可靠，重现性良好，符合检测要求。

表3 回收率和精密度试验结果

3 结语

通过对样品前处理方法和色谱条件进行优化，建立了高效液相色谱法同时测定调味料中柠檬黄、胭脂红、苋菜红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红、酸性橙Ⅱ8种合成着色剂的方法，用30%甲醇水溶液提取样品，操作简便，节约成本，具有较高实用价值。

［1］洪国涛.怎样使用食用着色剂［J］.应用推广，2012(1)： 29-30.

［2］GB／T 5009.35-2003 食品中合成着色剂的测定［S］.

［3］赵欣颖，贾丽，周晓晶，等.毛细管电泳法同时测定糖果中5种人工合成色素的含量［J］.现代仪器，2008(4)： 58-60.

［4］杨祖英，马永健，常凤启.食品检验［M］.北京：化学工业出版社，2001： 119.

Simultaneous Determination of 8 Synthetic Colours in Condiment by High Performance Liquid Chromatography

Zhu Hong， She Xiaoqi， Huang Rangming
（Guangdong Shantou Institute of Supervision and Test of Quality and Metrology， Shantou 515041， China）

A high performance liquid chromatographic method was developed for the simultaneous determination of 8 synthetic colours in condiment. The sample was extracted with methanol water solution， separated on Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm) column with methanol-1.55 g／L ammonium acetate as mobile phase by gradient elution. The target compounds were confirmed by diode-array detection and quantified by the external standard method. The results showed that the linear range of 8 synthetic colours was 0.5-10.0 μg／mL and recovery was 95.0%-101.0%. The relative standard deviation of six times repeated measurements of the peak area was 0. 84%-3.51%(n=6).

condiment; synthetic colour; high performance liquid chromatography

O657.7

A

1008-6145(2012)04-0047-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2012.04.014

联系人：朱虹；E-mail： zsuzhuhong@163.com

2012-03-19