海口市流感嗜血杆菌感染流行病学与病原学特征分析*

林 翀，苏应仙，吴多荣，王旭明，吴至成，林明冠

(1.海南省农垦总医院检验科,海口 570311；2.海南省海口市人民医院检验科 570208；3.海南省人民医院检验科 570102；4.海南医学院附属医院检验科,海口 570311)

流感嗜血杆菌(haemophilus influenza,Hi)除引起脑膜炎外，还常引起儿童中耳炎、会厌炎、蜂窝组织炎、脓毒性关节炎、心包炎、肺炎等疾病。其中b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)常引起脑膜炎和部分重症肺炎[1-2]。Hi也是目前国内儿童社区获得性呼吸道感染最主要的病原菌之一，有24.7%～29.0%的急性下呼吸道感染由Hi感染所致[3]。近年的研究发现，Hi肺炎发生率明显增加，约占社区获得性肺炎的8%～20%[4]。目前，肺炎是中国儿童住院及死亡的首位病因。有报道Hi还引起成年人上呼吸道感染[4]。根据其荚膜有无分为2个类型，其中侵袭人体引起症状的多为荚膜型。Hi根据荚膜多糖抗原的不同可分为6个独特的血清型，分别为a、b、c、d、e、f型。其中b型毒力最大，是儿童化脓性脑膜炎、肺炎、败血症、关节炎及蜂窝组织炎的主要致病菌，f型次之[5]。发病最高的年龄段为8～9个月，大于40%的病例小于1岁，60%～70%的病例发生在18个月之前，90%病例在5岁以前。在经济发达国家，患者主要表现为脑膜炎，而在发展中国家以急性呼吸道感染尤其是肺炎为多见[6]。在Hib疫苗使用之前，美国Hib引起细菌性脑膜炎的发病率为47/10万[7]，在澳大利亚和北美的土著居民中高达500/10万～1 000/10万[8]，而包括中国在内的发展中国家相关报道很少。在过去的60多年，很多国家已广泛开展了对Hib的研究。目前，国内外对在Hi菌株分型方面所进行的研究表明其有多型性和变异性的特点，国内多采用生物学和血清学方法进行分型，但因Hi的上述特点在分辨率上往往得不到满意的结果，从而影响相关方面的研究。氯霉素和四环素是治疗感染的主要抗菌药物，但因越来越严重的耐药性的产生以及药品本身不良反应的问题，目前临床医疗上已很少使用。氨苄西林被广泛应用到感染性疾病的治疗中，随着氨苄西林长期广泛的使用导致产β-内酰胺酶的耐氨苄西林菌株逐渐增多，耐药程度也逐渐严重[9]。不同地区在使用抗菌药物的品种、剂量和方法上的不同，导致细菌耐药特征上的不同，耐药情况在不同地区、不同时期也有较大差异。为了解海口市Hi感染的流行病学与病原学特征，本文对海口市各医院临床送检的238例咽拭子、痰、脑脊液标本进行培养鉴定，对分离的菌株进行血清和生物学分型、β-内酰胺酶和耐药性检测，并对结果进行分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1标本来源 收集海口市各医院(海南医学院附属医院、海南省人民医院、海口市人民医院、海南省农垦医院、海南省妇幼保健医院、海南省妇幼保健医院等)临床送检的咽拭子、痰、脑脊液标本238例，其中男103例，女135例；年龄为6个月至72岁，其中小于或等于14岁者93例，14～30岁者35例，31～50岁者34例，大于或等于50岁者76例。

1.1.2试剂与仪器 流感嗜血杆菌专用巧克力培养基(HAE)、药敏纸片，E-test试条，V+X、V、X因子诊断纸片，头孢硝噻吩试剂，流感嗜血杆菌血清型鉴定试剂等均购自英国Oxoid公司。生物分型试剂(吲哚、脲酶和鸟氨酸脱羧酶3种细菌微量生化反应管)等购于杭州微生物试剂有限公司。微生物鉴定仪有VITEK 2-compact型全自动细菌分析系统(法国生物梅里埃公司产品)及美华微生物鉴定药敏分析系统(MA120)。

1.2实验方法

1.2.1Hi菌株分离、鉴定 从临床送检的鼻咽拭子、痰、脑脊液等标本中分离Hi，培养基用嗜血杆菌专用巧克力培养基(HAE)，置5% CO2、37 ℃培养过夜，培养后挑取平皿上单个可疑菌落进行革兰染色，形态符合者做金黄色葡萄球菌卫星试验及Ⅴ、Ⅹ因子试验，结果完全符合者定为Hi，并用生化反应进行生物分型，购买流感嗜血杆菌国际标准菌株ATCC®49247ATCC®49766为质控菌株。

1.2.2Hi临床分离株的血清型鉴定 取上述分离获得的Hi，用a、b、c、d、e、f型抗血清以玻片凝集法进行血清分型，发生凝集反应的为阳性。

1.2.3Hi临床分离株的β-内酰胺酶的检测 β-内酰胺酶测定采用头孢硝噻吩纸片(Cefinase),实验步骤按说明书进行。

1.2.4Hi临床分离株的耐药性检测 用纸片扩散法检测Hi对常用抗菌药物的敏感性，包括氨苄西林、氯霉素、四环素、复方新诺明、头孢唑林、氧氟沙星、阿奇霉素等。

1.3统计学处理 采用SPSS13.0软件处理数据。采用χ2检验分析不同性别、年龄、标本来源的Hi阳性率情况。上述假设检验为双侧检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1Hi分离情况 238例标本中Hi的阳性率为26.1%(62/238)，其阳性率与标本来源和年龄有关系(P<0.05)，而与性别不相关(P>0.05)，见表1。

表1 238例标本中Hi的阳性率情况[n(%)]

2.2Hi分型结果 分离出的62株Hi中有45株(72.6%)为不可分型菌株，其余17株(27.4%)为可分型菌株。在可分型的17株菌株中，以d、e两种血清型为主，分别为23.5%(4/17)和47.1%(8/17)，见表2。共检出8个生物型，以Ⅱ、Ⅲ两种生物型为主，分别占35.5%(22/62)和30.6%(19/62)，见表3。

表2 62株Hi的血清分型情况

-：表示无数据。

表3 62株Hi的生物分型情况

表4 Hi对常见7种抗菌药物的耐药情况[n(%)]

2.3Hi β-内酰胺酶和耐药性检测 62株Hi对氨苄西林的耐药率最高，而对头孢唑林和氧氟沙星敏感，见表4。62株Hi的β-内酰胺酶阳性率为16.1%(10/62)。

3 讨 论

Hi是临床上一种重要的条件致病菌，其呼吸道致病性已经引起医务人员的高度重视。研究表明，Hi已成为儿童呼吸道感染的重要致病菌之一[10]。本研究结果显示，Hi在呼吸道感染的咽拭子标本中检出率较高，其阳性率为35.7%，说明咽拭子可以较好地检测Hi的感染情况，同时不同年龄组中，以小于或等于14岁的阳性率(48.4%)最高，说明Hi感染常见于儿童。

本研究分离出的62株Hi中有45株为不可分型菌株，其余17株为可分型菌株。说明本地Hi感染无荚膜的不可分型株占重要地位，提示无荚膜Hi也是Hi感染的重要致病菌。国内外研究表明Hi感染血清分型以Hib占多数，本研究结果以d、e两种血清型为主，分别为23.5%和47.1%，而Hib没有发现，说明Hib不是本地区目前侵袭性Hi感染的主要血清型。在前苏联和台湾，以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ生物型占多数(80%～85%)[11]，而本研究中则以Ⅱ、Ⅲ两种生物型为主，分别占35.5%和30.6%。造成这一差异的原因，除可能与地理分布有关外，很可能与菌株来源有关。作者在血清学分型中发现5个血清型，8个生物型；而Zheng和Lu[12]只发现2个血清型和4个生物型。这种差异很可能与作者所用菌株过少(18株)有关。因而，很有必要收集不同地区、不同来源的大量菌株做进一步的研究。

随着抗菌药物的广泛应用，Hi的耐药性状况也越来越受到重视。氨苄西林作为治疗Hi感染的常用药物，在世界范围内其耐药率也达到很高水平，2007年国内7家综合性医院和2所儿童医院的多中心监测结果显示该菌对氨苄西林的耐药率也达到30.1%[13]。对于头孢唑林和氧氟沙星，Hi则显示高度敏感性；而非β-内酰胺类抗菌药物，如四环素、氯霉素，由于不良反应较大，目前临床已很少应用。因此，目前临床用药还应以头孢类药物作为首选治疗药物。β-内酰胺酶产生是Hi耐药的主要机制。据报道，美国Hi产β-内酰胺酶的比率为34.5%，法国为29.3%，英国为21.2%，中国香港为20.2%[14]。中国不同地区Hi的β-内酰胺酶产酶率有较大差异，从3.2%～50.0%不等[15]。本资料检出的62株Hi的β-内酰胺酶阳性率为16.1%，介于其中。

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