杜鹃兰Crem astra appendiculata化学成分的分离

秦新英,申勇

(河北大学化学与环境科学学院,河北保定 071002)

杜鹃兰Crem astra appendiculata化学成分的分离

秦新英,申勇

(河北大学化学与环境科学学院,河北保定 071002)

采用硅胶、凝胶柱色谱及 HPLC对杜鹃兰(Cremastra appendiculata)的干燥假磷茎——山慈菇进行化学分离,根据化合物波谱数据鉴定其结构.结果表明,从山慈菇乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分中分离得到4个化合物,分别为7-羟基-2,4-二甲氧基菲(7-hydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene,Ⅰ),24-甲基环菠萝蜜醇(cyclolaudanol,Ⅱ),N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇(aurantiamide acetate,Ⅲ),1-(4-羟苄基)-2,7-二羟基-4甲氧基菲(1-(p-hydroxybenzyl)-2,7-dihydroxy-4-methoxyphe-nanthrene,Ⅳ),4个化合物均为首次从该种植物中分离得到.

山慈菇;杜娟兰;化学成分

杜娟兰属于兰科,分布于我国陕西、四川、甘肃、云南等省.山慈菇系兰科植物独蒜兰Pleione bu lbocodiodes(Franch.)Rofe、云南独蒜兰P.yunnanensisRolfe、杜鹃兰Crem astra appendiculata(D.Don)Makino的干燥假磷茎,被中华人民共和国药典目录收载为常用中药.据史料记载山慈菇化学成分临床上具有清热解毒,化痰散结等功效,可用来治疗肝病、乳腺癌、食道癌等多种肿瘤疾病.最近十几年,国内外对独蒜兰P.bu lbocodiodes的化学成分研究报道逐渐增多,报道了从中分离得到的包括木脂素类、黄烷醇类、二氢菲类、联苄类、二苄醚衍生物等近30个化合物[1-8].但对杜鹃兰C.appendiculata的化学成分及生物活性的研究报道较少,仅有一项日本专利中报道了2个化合物,具有显著降压活性,分别命名为cremastosineⅠ和Ⅱ[9];此外还有从该植物中分离得到一个生物碱cremastrine,实验证实其具有抑制氘代N-甲基东莨菪碱对毒蕈碱 M3受体的键合作用[10].张金超等[11]首次从山慈菇乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分中分离得到4个化合物 ,5-hydroxymethylfurfural,3′,5′,3″-trihy-droxybibenzyl,3,3′-dihydroxy-2(p-hydroxybenzyl)-5-methoxybibenzyl,3′,5-dihydroxy-2-(p-hydroxybenzyl)-3-methoxybibenzyl.迄今为止,从杜鹃兰中已分离得到包括菲类[12,15]、苷元[13]、生物碱[10]和黄烷酮类[14]在内的20余个化合物,研究的空间还很广泛.为了更加深入地探索和应用中药资源,寻找与其功能主治相对应的化学有效成分,为其应用提供科学准确的实验依据,作者对杜鹃兰C.appendicu lata的干燥假磷茎进行了分离纯化和结构鉴定,从乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分分离得到4个化合物,分别为7-羟基-2,4-二甲氧基菲(7-hydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene,Ⅰ),24-甲基环菠萝蜜醇(cyclolaudanol,Ⅱ),N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇(aurantiamide acetate,Ⅲ),1-(4-羟苄基)-2,7-二羟基-4甲氧基菲(1-(p-hydroxybenzyl)-2,7-dihydroxy-4-methoxyphe-nanthrene,Ⅳ),其结构见图1.4个化合物均为首次从该种植物中分离得到.

图1 化合物结构Fig.1 Structure of compounds

1 仪器与材料

Bruker AV-400 NM R型核磁共振仪;Thermo Finnigan-LCQ型质谱仪;FTIR 8400型红外光谱仪(KBr压片);H ITACH IU-2800型紫外光谱仪;X-5A型显微熔点测定仪(温度未校正);日本 YMC公司YMC-Pack C18柱(250 mm×10 mm,5μm).

杜娟兰块茎,2008年购自广东省广州市中药材市场;葡聚糖凝胶 (Sephadex LH-20)购自保定市华欣试剂仪器有限公司,为Pharmacia公司产品;层析用硅胶(41.5～75μm),购自保定市华欣试剂仪器有限公司,为青岛海洋化工厂产品.化学试剂为分析纯.

2 化合物的提取与分离

取杜娟兰C.appendicu lata的干燥假磷茎9.5 kg,研磨粉碎后用体积分数为80%的乙醇回流提取1 h.回收合并提取液,60℃减压浓缩得深棕色干浸膏(300 g),在水中悬浮规定时间后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到各部位的萃取物.石油醚、乙酸乙酯萃取物(82.4 g)与柱层析硅胶(41.5～75μm)拌样进行硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯(0～100%)梯度洗脱,经硅胶 TLC分析合并相同组分,共合并15个部分.第6部分经硅胶柱层析,V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=5∶1进行洗脱得Ⅰ的粗品,再经 Sephadex LH-20层析(甲醇洗脱)纯化得到化合物Ⅰ,第3部分经过 TLC(V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=10∶1)洗脱后经Sephadex LH-20反复柱层析得Ⅱ的粗品,再经V(氯仿)∶V(甲醇)=1∶1洗脱得到化合物Ⅱ.第9部分经过硅胶柱层析,V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=4∶1洗脱后得到a1,a2,a3 3个成分,成分a3经过Sephadex LH-20层析(甲醇洗脱)纯化得到Ⅲ.第11部分经硅胶柱层析,V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1洗脱得粗品,经Sephadex L H-20柱纯化(甲醇洗脱)得化合物Ⅳ,通过1H NM R,13C NM R,H MQC,H MBC确证其结构,并对文献中未归属的13C NMR数据进行准确归属.

3 化合物的鉴定

[1]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Stilbenoids fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1996,42：853-856.

[2]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Flavan-3-ols and Dihydrophenanthropyrans fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1998,47：1125-1129.

[3]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Stilbenoids fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1996,42：853-856.

[4]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Lignans and a bichroman fromPleione Bu lbocodioides[J].Phy tochem istry,1997,44：341-343

[5]L IB,MASU KAWA N,YAMA KIM,et al.Two bibenzyl glucosides fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1997,44：1565-1567.

[6]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Flavan-3-ols and Dihydrophenanthropyrans fromPleione Bu lbocodioides[J].Phy tochem istry,1998,47：1125-1129.

[7]L IB,MASUKAWA N,YAMAKIM,et al.A polyphenol and two bibenzyls fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1998,47：1637-1640.

[8]L IB,MASUKAWA N,YAMA KIM,et al.Four stilbenoids fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1998,48：327-331.

[9]Fujisawa Pharmaceutical Co.,L td.Antihypertensive cremastosineⅠandⅡisolation.Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 82 35,518(Cl.A 61K35/78),26 Feb 1982

[10]YOSH ITA KA I,H IKARU N,TAMOTSU F,et al.Cremastrine,a Pyrrolizidine Alkaloid fromCremastra appendiculata[J].Journal of Natural Products,2005,68：572-573.

[11]张金超,申勇,朱国元,等.杜鹃兰Cremastra appendiculata化学成分研究[J],河北大学学报：自然科学版,2007,27(3)：262-264

[12]薛震,李帅,王素娟,等.山慈菇Cremastra appendiculata化学成分[J].中国中药杂志,2005,30(7)：511-513.

[13]夏文宾,薛震,李帅,等.杜鹃兰化学成分及肿瘤细胞毒活性研究[J].中国中药杂志,2005,30(23)：1827-1830.

[14]SH IM J S,KIM J H,LEEJ Y,et al.Anti-angiogenic activity of a homoisoflavanone fromcrem astra appendiculata[J].Planta Medica,2004,70(2)：171-173.

[15]XUE Zhen,L IShuai,WANG Sujuan,et al.Mono-,Bi-,Triphenanthrenes from the TubersofCrem astra appendiculata[J].Journal of Natural Products,2006,69：907-91

[16]何菱,周文,W DAV ID NES,等.甾体甲基化转移酶的研究 [J].华西药学杂志,2000,15(5)：331-334.

[17]梁侨丽,闵知大,成亮.地胆草中的两个寡肽 [J].中国药科大学学报,2002,33(3)：178-180.

[18]MASAE Y,L IB,KEIKO I,et al.Benzylphenanthrenes from Bletilla striata[J].Phytochemistry,1990,29：2285-2287.

Separation of Chem ical Constituents from Cremastra appendiculata

QIN Xin-ying,SHEN Yong
(College of Chem istry and Environmental Science,Hebei University,Baoding 071002,China)

Compoundswere separated by HPLC or column chromatography w ith silica gel,and Sephadex LH-20,and identified by spectral analysis respectively.The results showed that four compoundswere isolated from the ethanol extract of the tubers ofCrem astra appendiculata.Their structures w ere determined as 7-hydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene(Ⅰ),cyclolaudanol(Ⅱ),aurantiamide acetate(Ⅲ)and 1-(p-hydroxybenzyl)-2,7-dihydroxy-4-methoxyphe-nanthrene(Ⅳ).Four compounds w ere isolated from tubers ofCrem astra append iculatafor the first time.

Shancigu;Cremastra appendiculata;chem ical constituents

O 621.4

A

1000-1565(2011)04-0393-04

2010-10-15

河北省科技厅资助项目(10967126D);河北省教育厅基金资助项目(2008307)

秦新英(1978-),男,河北邯郸人,河北大学讲师,主要从事化学分析研究.

E-mail：qinxy@hbu.edu.cn

梁俊红)