HPLC测定益母草片中盐酸水苏碱含量

周立伟，张赞

(哈药集团三精制药股份有限公司，黑龙江 哈尔滨 150069)

*周立伟，E-mail460255301@qq.com

HPLC测定益母草片中盐酸水苏碱含量

周立伟*，张赞

(哈药集团三精制药股份有限公司，黑龙江 哈尔滨150069)

目的建立益母草片中盐酸水苏碱含量的测定方法。方法运用HPLC对盐酸水苏碱含量进行测定，色谱柱：强酸型阳离子交换色谱柱 (200mm×4.6mm，5μm)，流动相：0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值2.3,检测波长：192nm，流速1.0mL·min-1,柱温：室温。结果盐酸水苏碱的量在25～300μg·mL-1浓度同峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率为100.92%，RSD=0.43%。结论所建立的方法可靠，可用于益母草片的质量控制。

益母草片；盐酸水苏碱；高效液相色谱法

益母草片是哈药集团三精制药股份有限公司生产的活血调经的中药制剂，其质量标准中盐酸水苏碱含量测定为沉淀称重法[1],但该法操作繁琐、测定周期长，误差较大，通过检索对其他含益母草的药品检测方法的文献发现，盐酸水苏碱含量测定方法较为常见的有薄层色谱法[2]、高效液相色谱法[2,3]、HPLC-ELSD法[5]，本文应用高效液相色谱法测定益母草片中盐酸水苏碱含量并对其进行方法学考察，结果表明该法简便、快速、准确。

1 仪器和试药

岛津2550紫外分光光度计、岛津LC20A高效液相色谱仪(DGU-20A5脱气机，LC-20AT高效泵，SPD-20A检测器，SIL-20A自动进样器)Lc-solution工作站软件，梅特勒电子分析天平。

三乙胺(分析纯，天津科密欧)，磷酸二氢钾(分析纯，天津科密欧)，磷酸(天津科密欧)，0.45μm微孔滤膜(津腾)，溶剂过滤器。益母草片(哈药集团三精黑河药业，批号：100804,100805,100901,100902,101001)。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：强酸型阳离子交换色谱柱(200mm×4.6mm,5μm)，填充剂为阳离子交换树脂。流动相：0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值2.3,检测波长：192nm，柱温：室温。

2.2对照品溶液制备

取经105℃烘干至恒重的盐酸水苏碱对照品，精密称定，加70%乙醇溶解转容后，制成25μg·mL-1的盐酸水苏碱对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取同一批益母草片(含量为14.8mg/片、基片重0.25g)去糖衣，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶内精密加入70%乙醇25mL，称定重量，加热回流2h，放冷再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液2mL，加70%乙醇定容至100mL，即得。

2.4线性范围及标准曲线制备

分别吸取1，2，4，6，8，10，12μL对照品溶液，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，得线性回归方程Y=426.821X-25.5，r=0.9998，盐酸水苏碱的量在25～300μg·mL-1浓度同峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

取盐酸水苏碱对照品加70%乙醇溶解制成25μg·mL-1的溶液，精密量取10μL注入色谱仪，按上述色谱条件连续进样6次，计算盐酸水苏碱峰面积积分值的RSD=0.38%，说明仪器精密度较高。

2.6稳定性试验

取同一批益母草片供试品溶液，分别在1，4，8，12，24h进样，计算盐酸水苏碱峰面积积分值的RSD=0.51%，结果表明样品在24h内是稳定的。

2.7重复性试验

取同一批益母草片供试品溶液，制备6份供试液，按上述色谱条件进样，计算盐酸水苏碱含量的RSD=1.57%，结果表明本方法重复性好。

2.8回收率试验

取5份益母草基片约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶内精密加入70%乙醇25mL，称定重量，加热回流2h，放冷再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液2mL，加70%乙醇定容至100mL，取5mL并同时加入盐酸水苏碱对照品0.5752mg，置50mL量瓶，加甲醇至刻度，按上述色谱条件测定，结果见表1。

表1 盐酸水苏碱加样回收率试验

2.9样品含量测定

取5批益母草片用沉淀称重法及HPLC两种方法同时测定盐酸水苏碱含量，结果见表2。

表2 益母草片中盐酸水苏碱含量测定 mg/片

对比分析表明HPLC较沉淀称重法测定的盐酸水苏碱含量准确度有所提高，耗时大大缩短。

3 讨论

3.1实验方法选择

文献中盐酸水苏碱的含量测定方法较多，考虑高效液相色谱法应用的普遍性及其检测结果的准确性，分别采用了大连伊利特，Dikma，Diamonsil3个厂家的强酸型阳离子交换色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)，进行试验，并参考《中国药典》2010年版一部“益母丸”含量测定项下要求，采用高效液相色谱法进行含量测定，其检测结果准确，且方法简便，耗时短。

3.2测定波长的选择

取盐酸水苏碱对照品乙醇溶液，置岛津2100紫外分光光度计上，在波长范围160～270nm测定，结果其最大吸收波长为192nm，与2010年版《中国药典》中益母丸中含量项下的检测波长相符，故选择192nm为测定波长。

3.3流动相选择

益母草片采用益母草为原料，流动相选择时参考《中国药典》益母丸及其他文献[4]中盐酸水苏碱的流动相，均为磷酸二氢钾溶液(含0.04%三乙胺和0.15%磷酸),本品按此流动相分离效果不理想，后调整为0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值2.3作流动相后，分离完全，故选择0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值2.3作流动相。

[1] 卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂[S].第13册.1997：175.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：1024-1026，272-273.

[3] 冯旭.杜成智.梁臣艳，等.HPLC-ELSD测定益母草中盐酸水苏碱的含量[J].广西中医药，2007，30(6)：53-54.

[4] 邹华,吴云波,王金萍，等.HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量[J].辽宁中医药大学学报，2006，8(6)：147.

DeterminationofStachydrineHydrochlorideofYimucaoPianbyHPLC

ZHOU Li-wei，ZHANG Zan

(HarbinPharm.GroupSanjingPharmaceuticalShareholdingCo.Ltd,Harbin150069,China)

Objective: Established method for determination of Stachydrine hydrochloride of Yimucao Pian.MethodsUsing high performance liquid chromatography (HPLC) were determined on Stachydrine hydrochloride, column: Actalyst of cation exchange chromatographic column (200mm×4.6mm,5μm), mobile phase:0.05mol·L-1KH2PO4of0.1% triethylamine (TEA, adjusted with phosphoric acid pH=2.3), detection wavelength:210nm, flow rate1.0mL·min-1, column temperature: room temperature.ResultsEphedrine hydrochloride concentration demonstrated good linear relationship in the range of25～300μg·L-1.The average recovery was100.92%, and RSD was0.43%.ConclusionThe method is reliable and can be used for quality control of Yimucao Pian.

Yimucao Pian; Stachydrine hydrochloride; HPLC

2011-01-05)