沙棘体外抗阴道毛滴虫作用研究

陈建芳 闫艳 刘金燕 李文慧

滴虫性阴道炎是由阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)引起的一种常见性传播疾病，可引起多种并发症，孕期妇女感染滴虫可诱发早产、死胎及低体重儿出生。滴虫病还与不孕症、子宫癌的发生密切相关，并可增加HIV感染机会［1］。目前，临床上治疗阴道毛滴虫病的常用药物是甲硝唑，但由于存在严重的毒副作用，如致畸，致癌等，并且国内外有关阴道毛滴虫对甲硝唑耐药性的病例报道呈上升趋势，限制其在临床上的广泛应用［2］。因此，探索高效、低毒的抗滴虫病药物备受国内外学者的关注。沙棘属胡颓子科沙棘属植物，对沙棘的营养成分分析、化学成分分析、药效学研究表明，沙棘含有多种维生素、叶酸、微量元素等营养成分，还含有多种生物活性物质，具有缓解心脑血管疾病、增强免疫力、保护肝脏、防止衰老和抑菌杀菌的功效［3］。沙棘在我国资源丰富、来源广泛，是我国古代藏医、蒙医中常用药物，具备高效、低毒、价格低廉的优势，有着很好的医药开发前景。本实验选用沙棘果粉作为研究对象，探讨其体外抗滴虫作用。

1 资料与方法

1.1 实验药物 沙棘果粉由内蒙古宇航人科技有限公司提供，用蒸馏水配制成浓度1000 mg/ml溶液，4℃冰箱保存备用。

1.2 阴道毛滴虫虫株 取自临床诊断为滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物，接种于肝浸汤培养基中，pH 5.6～5.8，培养前加入10%小牛血清(56℃灭活30 min)，青霉素、链霉素各100 U/ml。37℃无菌培养，每隔24 h传代一次，稳定传代3次，滴虫浓度达到1×105个/ml进行实验。

1.3 实验方法 将沙棘果粉溶液进行倍比稀释，选择五个药物浓度进行实验，分别取药液加入含有肝浸汤培养基的试管中，获得培养基药物浓度为 200.00、100.00、50.00、25.00、12.50 mg/ml，同时设无药对照组。将药物实验组与对照组分别加入阴道毛滴虫，37℃恒温培养，于加药后 2、4、8、12、24 h，分别吸取各管虫液滴片镜检，在高倍镜下观察虫体形态、活动情况，随机计数100个虫体，计数死亡虫体数量并计算死亡率。将虫体变圆，边缘不齐，体内有大量颗粒或空泡，不活动的虫体判定为死亡滴虫。所有实验均重复3次。应用SPSS 13.0统计软件分析实验结果，各组间差异采用方差分析，结果以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 沙棘果粉体外抗阴道毛滴虫的光镜观察 高倍镜下可见对照组的阴道毛滴虫，虫体无色透明，多为梨形或椭圆形，鞭毛和波动膜摆动明显，运动活跃，染色虫体边界清晰，胞质着色均匀。药物作用后，滴虫形态变化明显，虫体变圆、运动缓慢，胞质内颗粒增多，出现空泡，最终滴虫裂解成碎片状死亡，染色可见淡染的虫体碎片。

2.2 沙棘果粉体外抗阴道毛滴虫的效果 由表1可见，沙棘果粉对阴道毛滴虫有一定的杀灭和抑制作用。观察结果显示，当药物作用时间相同时，沙棘果粉各浓度组阴道毛滴虫死亡率均显著高于对照组，随药物浓度的增加，各实验组阴道毛滴虫死亡率均逐渐增加(P＜0.05)。同一药物浓度，随着作用时间的延长，各实验组阴道毛滴虫死亡率均逐渐增加(P＜0.05)。药物作用 24 h 后，200.00、100.00、50.00 mg/ml浓度组滴虫全部死亡。最低有效药物浓度为50.00 mg/ml。

表1 沙棘果粉对阴道毛滴虫的杀灭作用

3 讨论

沙棘为胡颓子科，酸刺属的灌木或小乔木。沙棘含有多种维生素、微量元素及生物活性物质，具有抗炎、抗辐射损伤、抗肿瘤等作用［3］。阴道毛滴虫主要寄生于女性阴道内，不仅可破坏阴道内的弱酸性环境，还有可能引起阴道细胞发育异常，诱发癌前病变。滴虫性阴道炎患者如不及时治疗，炎症可波及女性子宫附件、盆腔、宫颈等。感染了阴道毛滴虫，女性阴道内环境改变，不利于精子生存活动，而且滴虫能吞噬精子，可引起不孕症，给患者造成严重危害，因此滴虫性阴道炎的治疗受到广泛关注。有学者研究表明，沙棘籽油对阴道炎具有治疗作用［4］。本实验初次探讨沙棘果粉抗阴道毛滴虫的作用。沙棘果粉50.00～200.00 mg/ml的浓度对阴道毛滴虫均具有抑制和杀灭作用。同一作用时间，随药物浓度的增加，各实验组阴道毛滴虫死亡率均逐渐增加;同一药物浓度，随着作用时间的延长，各实验组阴道毛滴虫死亡率均逐渐增加。在200.00 mg/ml浓度组4 h后滴虫全部死亡，50.00 mg/ml浓度组24 h滴虫全部死亡，12.50～25.00 mg/ml浓度组虽然滴虫没有全部死亡，但是对滴虫仍有一定的抑制作用，因此沙棘果粉触杀阴道毛滴虫的最低有效浓度为50.00 mg/ml。

沙棘作为我国传统的中药，具备高效、生长广泛，无毒副作用的优势。本实验对沙棘果粉体外抗滴虫的有效浓度进行初步探索，为临床应用沙棘果粉治疗滴虫性阴道炎提供了实验依据。因此，沙棘果粉有望成为一种良好的抗滴虫药物，将为我们今后探索高效无毒治疗阴道毛滴虫病新药开辟一个新思路。

［1］Miller WC，Swygard H，Hobbs MM，et al.The prevalence of trichomoniasis in young adults in the united states.Sex Trans Dis，2005，32(10)：593-598．

［2］Sarah LC Kiera LD，Shanndon FH，et al.Treatment of Iifections caused by metronidazole-resistant trichomonas vaginalis.Clin Microbiol Rev，2004，17(4)：783-793．

［3］闫涛，罗丽梅，等.沙棘的化学成分及生物功能的研究进展.吉林医药学院学报，2010，31(1)：52-54．

［4］唐军，郭燕燕，李诗兰，等.复方沙棘籽油栓治疗阴道炎的疗效观察. 中国妇产科临床，2001，2(4)：223-224．