HPLC法测定康妇膜中盐酸小檗碱的含量Δ

2011-08-10齐齐哈尔医学院药学院齐齐哈尔市161006

中国药房 2011年35期

王静，秦伟（齐齐哈尔医学院药学院，齐齐哈尔市 161006）

康妇膜是由黄柏、荆芥、防风、苦参等6味中药组成的复方制剂，具有清热解毒、燥湿止痛、杀虫止痒的功效，直接外用给药治疗湿热下注型阴道炎和宫颈糜烂，效果较好。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定康妇膜中主要药效成分盐酸小檗碱的含量，以为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

Waters 600E型HPLC仪（美国Waters公司）；SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津公司）；HH-S2恒温水浴（巩义市英峪仪器厂）。

黄柏、荆芥、防风、苦参、青黛、冰片饮片购自齐齐哈尔市医药商厦，经齐齐哈尔市药品检验所鉴定为真品；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0708-9704）；康妇膜（黑龙江鹤翔制药有限责任公司试生产，批号：201001、201002、201003）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]与系统适用性试验

色谱柱：Agilent extend C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：265 nm。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定。结果表明，阴性对照溶液的吸收曲线在与盐酸小檗碱相同保留时间处不存在吸收峰，说明阴性对照无干扰。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.盐酸小檗碱对照品；B.供试品；C.阴性对照Fig1 HPLC chromatogramsA.berberine hydrochloride control；B.test sample；C.negative control

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液精密称取于100℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品适量，加流动相制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液取重量差异项下的本品约1 g，剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1∶100）混合溶液50 mL，密塞，称定重量，置60℃水浴中加热15 min，超声处理（功率：250 W，频率：40 kHz）40 min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇（1∶100）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得。

2.2.3 阴性对照溶液取缺黄柏的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液，即得。

2.3 方法学考察[2，3]

2.3.1 线性关系考察取上述对照品溶液，分别进样2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL，按含量测定方法测定峰面积。以峰面积积分值（X）为横坐标，对照品进样量（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝4.424 86×10-4X+2.884 21×10-3（r＝0.999 9，n＝6）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.128 25～0.765 90 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验取对照品溶液适量，照上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果，RSD＝1.82%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.3 重复性试验取同一批样品适量，按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，按含量测定方法测定。结果，RSD＝1.94（n＝6），表明方法重复性良好。

2.3.4 稳定性试验取同一供试品溶液适量，室温下放置，分别于0、2、4、8 h测定1次峰面积。结果，RSD＝1.47%（n＝4），表明供试品溶液在制备后8 h内稳定。

2.3.5 准确度试验取已知含量的同一批样品适量，共6份，分别精密加入对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。