正交试验优选紫冰乳膏的提取工艺Δ

马 瑛，姚鸿萍，庞成森，王 娟（西安交通大学医学院第一附属医院药学部，西安市 710061）

正交试验优选紫冰乳膏的提取工艺Δ

马 瑛＊，姚鸿萍，庞成森，王 娟（西安交通大学医学院第一附属医院药学部，西安市 710061）

目的：优选紫冰乳膏的最佳提取工艺。方法：以左旋紫草素含量为评价指标，以溶剂用量、提取时间、提取温度、提取次数为考察因素，采用正交试验优选提取工艺。结果：最佳提取工艺为8倍量的95%乙醇，在60℃条件下提取3次，每次1h。结论：优选的工艺合理、可行，制得的制剂质量稳定。

紫冰乳膏；左旋紫草素；高效液相色谱法；正交试验；提取工艺

紫草作为药用紫草的主要来源，始载于《神农本草经》，列为中品。味苦，性寒。有凉血、活血、解毒和透疹的功能，主治血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤等[1]。

以紫草为主药的外用烧伤制剂多以麻油油煎，但油性较大，不易吸收，使用和携带不方便，又容易污染衣物。因此，笔者研制了O/W的紫冰乳膏，由紫草、大黄、地榆、冰片等组成。主要用于治疗Ⅰ、Ⅱ度烧伤、烫伤、伤口感染、褥疮等多种外科疾病和皮肤病。它对皮肤表面分泌物具有亲合力，有减少创面渗出、促进创面愈合修复的作用。为充分提取药材中有效成分，本试验采用高效液相色谱（HPLC）法和正交试验，以左旋紫草素含量为评价指标，对提取工艺进行优化。

1 仪器与试药

Waters 510型HPLC仪，包括486型紫外检测器、510型HPLC泵（美国Waters公司）；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵、旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ-300DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；LLEGRATMX-22R型高速低温离心机（美国贝克曼公司）。

紫草饮片（购自西安中药饮片厂，产地：新疆，批号：20060715）；左旋紫草素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0769-9903）；紫冰乳膏（西安交通大学医学院第一附属医院药学部自制）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 左旋紫草素含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（200mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（80∶20）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：516nm；柱温：25℃；进样量：10μL。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.左旋紫草素对照品；B.供试品

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取左旋紫草素对照品适量，加甲醇稀释成每1mL含4.8μg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取自制紫冰乳膏1g，精密称定，加适量甲醇超声30min使溶解，过滤，滤渣再加适量甲醇溶解，过滤，合并滤液，转移至50mL容量瓶中并用甲醇定容，摇匀，低温离心机离心（3000r·min-1）10min，作为供试品溶液。

2.1.4 线性关系考察 分别吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、0.9mL，置10mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，制成浓度分别为0.048、0.096、0.192、0.288、0.384、0.432μg·mL-1的溶液，分别精密吸取10μL，注入色谱仪，记录峰面积。以左旋紫草素检测浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝395549X+3730（r＝0.9996，n＝6）。结果表明，左旋紫草素检测浓度在0.048～0.432μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件连续进样5次，记录峰面积。结果，RSD＝1.06%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，在上述色谱条件下分别于0、2、4、6、8h进样1次，每次10μL，记录峰面积，观察其稳定性。结果，RSD＝2.56%（n＝5），表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.1.7 重复性试验 按供试品溶液制备方法，平行制备3份样品溶液，在上述色谱条件下分别进样3次，每次10μL，记录峰面积。结果，RSD＝0.84%（n＝9），表明方法重复性良好。

2.1.8 加样回收率试验 精密称定样品（含量：7.2μg·g-1）6份，每份1g，分别精密加入浓度为4.8μg·mL-1的对照品溶液1.5mL，按供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件测定，计算加样回收率。结果，平均回收率为98.94%，RSD＝1.68%（n＝6）。

2.2 提取工艺优选

紫草的主要化学成分为萘醌类色素，其亲脂性强，易溶于石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇等溶剂，难溶于水。且此类色素具有热不稳定性，60℃以上颜色由红色变为紫黑色，且随温度升高其变化速度加快[2]。一般采用植物油中浸泡或用95%乙醇提取，压榨，过滤得油提液，可最大程度提取紫草中有效成分，但考虑油提成本较高，因此通过正交试验优选紫草的醇提工艺。

本试验采用L9（34）正交试验设计，从提取温度（A）、提取时间（B）、溶剂用量（C）、提取次数（D）等不同因素、水平考察，以左旋紫草素含量为指标，优选提取工艺。因素水平见表1；正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

表2 正交试验结果Tab 2 Results of orthogonal test

表3 方差分析结果Tab 3 Results of variance analysis

由表2、表3可知，因素A、B对工艺有显著性差异（P＜0.05），各因素影响大小依次为A＞B＞D＞C，优选的工艺为A1B2C1D3，即提取温度60℃，提取时间1h，溶剂用量8倍量，提取次数3次。

2.3 工艺验证

按照优选的生产工艺制备紫冰乳膏样品5批，精密称取样品1g，按供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件测定，记录峰面积，计算左旋紫草素含量，结果见表4。

表4 样品含量测定结果（n＝5）Tab 4Results of samples determinatio（nn＝5）

3 讨论

2010年版《中国药典》（一部）中采用分光光度法测定紫草中羟基萘醌总色素的含量，采用HPLC法测定β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量[3，4]。试验中发现，乳膏剂用石油醚提取得到的残渣很难用流动相溶解完全，不适合以阿卡宁的含量作质控指标，故采用HPLC法对紫冰乳膏中左旋紫草素进行含量测定。

HPLC法测定左旋紫草素含量常采用的流动相为甲醇-0.025mol·L-1磷酸（85∶15）[5]、甲醇-水（75∶25）[6]。经试验，选用甲醇-水（80∶20）作为流动相，在516nm波长处基线平稳，出峰时间较短，左旋紫草素色谱峰无其他杂质干扰。经方法学考察，认为本方法简便、快速、准确、重复性好、灵敏度高，可用于紫冰乳膏的质量控制。

正交试验设计研究表明，对紫草提取工艺影响最大的是提取温度，其次为提取时间，提取次数影响不大。故结合实际工作，确定最佳提取工艺为药材加8倍95%乙醇，提取温度为60℃，提取时间为1h，提取3次。验证试验表明，在此提取条件下有效成分的损失最小，同时可达到较高的提取效率，工艺稳定，适合工业化生产。

[1] 阴 健.中药现代研究与临床应用[M].北京：学苑出版社，1993：6431.

[2] 赵雪梅，王桂玲，费洪荣，等.紫草有效成分的提取及其抗炎作用研究[J].中药药理与临床，2008，24（4）：36.

[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：320.

[4] 曾祖平，王子君，王 宏，等.HPLC法测定紫其中β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量[J].中国药房，2011，22（15）：1407.

[5] 杜春双，宋晓坤.紫黄膏中左旋紫草素的含量测定[J].中国医院药学杂志，2007，27（10）：1468.

[6] 张善玉，朴桂兰，李 梅，等.HPLC法测定紫草涂膜剂中紫草素的含量[J].中国野生植物资源，2004，23（1）：58.

Optimization of the Extraction Technology of Zibing Cream by Orthogonal Experiment

MA Ying，YAO Hong-ping，PANG Cheng-sen，WANG Juan（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Medical College，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of Zibing cream.METHODS：The extraction technology of Zibing cream was optimized by orthogonal experiment using content of L-shikonin as index and with amount of solvent，extraction time，extraction temperature，extraction times as factors.RESULTS：The optimal extraction was as follows：8fold 95%alcohol，soaking and extracting for 3times at 60℃，1h each time.CONCLUSION：The technology is reasonable and feasible，and prepared cream is stable in quality.

Zibing cream；L-shikonin；HPLC；Orthogonal experiment；Extraction technology

R283.621；R284.2

A

1001-0408（2011）35-3296-02

Δ陕西省科技研究发展攻关项目（2004K18-G9）

＊副主任药师，硕士。研究方向：医院药学。电话：029-85323243。E-mail：maying6704@sina.com

2011-06-02

2011-07-20）