羚羊感冒胶囊的质量标准研究

郑 莉，宋 英（成都中医药大学附属医院药剂科，成都市 610072）

羚羊感冒胶囊是由金银花、牛蒡子、羚羊角、淡竹叶、桔梗、甘草、连翘等组成的复方中药制剂，功能清热解表，用于治疗流行性感冒、伤风咳嗽、头晕发热、咽喉肿痛。为了进一步完善、提高已有的羚羊感冒胶囊质量标准，有效控制产品内在质量，笔者在原质量标准的基础上保留了羚羊角的显微鉴别，增加了对牛蒡子、桔梗、甘草、金银花等药味的薄层色谱（TLC）鉴别和金银花含量的高效液相色谱（HPLC）测定，以期更加有效的控制羚羊感冒胶囊质量。

1 仪器与试药

1100 HPLC仪，包括Waters2695泵、Waters 2487检测器、Empower色谱工作站（美国惠普公司）；BP-211D电子分析天平（德国赛多利斯公司）。

牛蒡子苷、绿原酸对照品和牛蒡子、桔梗、甘草对照药材（中国药品生物制品检定所，批号分别为110819-200505、110753-200413、 120903-200608、 121028-200608、 120904-200511）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状

本品为硬胶囊剂，内容物为黄棕色的粉末；气香、味凉、苦而后甜。

2.2 显微特征

取本品，置显微镜下观察，可见不规则形碎块，近无色或淡灰色，微透明，稍有光泽，偶见棕褐色色素颗粒。小碎片较多，显颗粒性，较大碎片中均匀分布有多数近平行排列的纵向空隙，空隙呈长圆形、新月形、长条形或裂缝状。羚羊感冒胶囊显微特征见图1（图中A、B、C、D均为同一胶囊不同视角下的羚羊粉末）。

图1 羚羊感冒胶囊显微特征Fig 1 Microscopic characteristics of Lingyang ganmao capsules

2.3 薄层鉴别[1～3]

2.3.1 牛蒡子的TLC鉴别 取本品内容物2 g，加50%甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加50%甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺牛蒡子阴性样品内容物2 g，同法制成缺牛蒡子阴性对照溶液；另取牛蒡子苷对照品，加50%甲醇制成每1 mL含5 mg的溶液，作为对照品溶液；再取牛蒡子对照药材2 g，加50%甲醇20 mL，同法制成对照药材溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（40∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。牛蒡子的TLC见图2。

2.3.2 金银花的TLC鉴别 取本品内容物1 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺金银花阴性样品内容物2 g，同法制成缺金银花阴性对照溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（34∶5∶5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照无干扰。金银花的TLC见图3。

2.3.3 桔梗的TLC鉴别 取本品内容物2 g，研细，加7%硫酸乙醇-水（1∶3）的混合溶液20 mL，加热回流2 h，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，加水30 mL振摇洗涤，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺桔梗阴性样品内容物2 g，同法制成缺桔梗阴性对照溶液；另取桔梗对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。桔梗的TLC见图4。

2.3.4 甘草的TLC鉴别 取本品内容物2 g，研细，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15 mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15 mL，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1 g，同法制成对照药材溶液；取缺甘草阴性样品内容物2 g，同法制成缺甘草阴性对照溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇（7∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照无干扰。甘草的TLC见图5。

图2 牛蒡子的TLCFig 2 TLC of Arctium lappa

图3 金银花的TLCFig 3 TLC of Lonicera japonica

2.4 含量测定[3]

2.4.1 色谱条件与系统适用性试验

色 谱 柱 ：Kromasil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm），Phenomenex C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）；检测波长：326 nm；柱温：35℃；流速：0.8 mL·min-1。在此色谱条件下，对照品溶液与供试品溶液色谱峰保留时间一致（约16.3 min），分离度＞1.5，理论板数按绿原酸色谱峰计＞1 000。色谱见图6。

2.4.2 溶液的制备 （1）供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研匀，取约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率：150 W，频率：33 kHz）15 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（2）对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加50%甲醇制成每1 mL中含40 µg的溶液，得对照品贮备液。（3）阴性对照溶液的制备：按处方除去金银花药材，依本品制备工艺制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.4.3 线性关系考察 取绿原酸对照品9.94 mg，精密称定，置于100 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL中含99.4µg的溶液，再分别精密吸取2、5、10、15、20、25 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释成不同浓度的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μL，测定。以绿原酸峰面积积分值（Y）为纵坐标，绿原酸的进样量（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝1 135 798.4X+252.4（r＝0.999 9，n＝6）。结果表明，绿原酸进样量在0.079 52～0.994 00 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。2.4.4 精密度试验 精密吸取每1 mL中含99.4µg的绿原酸对照品溶液10 μL，重复进样6次，按“2.4.1”项下色谱条件测定。结果，RSD＝0.16%（n＝6），表明仪器精密度良好。

图4 桔梗的TLCFig 4 TLC of Platycodon grandiflorum

图5 甘草的TLCFig 5 TLC of Glycyrrhiza uralensis

2.4.5 稳定性试验 取“2.4.3”项下的绿原酸对照品溶液（39.76 µg·mL-1）10 µL，注入液相色谱仪，在24 h内每隔4 h进样测定1次，峰面积基本一致。结果，RSD＝0.40%（n＝6），表明绿原酸的50%甲醇溶液在24 h内稳定。

2.4.6 重复性试验 分别取同一批羚羊感冒胶囊样品（批号：060301）6份，按“2.4.2（1）”项下方法制备供试品溶液，按上述方法测定。结果，绿原酸的平均含量为5.402 mg·g-1，RSD＝0.70%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.4.7 加样回收率试验 取同一批已知含量的羚羊感冒胶囊（批号：060301，绿原酸含量：5.402 mg·g-1）6份，按“2.4.2（1）”项下方法制备供试品溶液，按上述方法测定，计算加样回收率。结果，平均回收率为100.6%，RSD＝1.41%（n＝6）。

2.4.8 样品含量测定 取本品10个生产厂家的10批样品，按“2.4.2（1）”项下的方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件测定10批样品中绿原酸的含量，结果见表1。

依据10批样品含量测定结果，可暂将含量限度定为每1 g含金银花以绿原酸（C16H18O9）计，不得少于3.0 mg，即每粒含金银花以绿原酸（C16H18O9）计，不得少于1.3 mg。

3 讨论

笔者曾对连翘、薄荷脑进行TLC鉴别，但试验中连翘的供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，且斑点较多，阴性对照有干扰，所以未收入正文；薄荷脑的供试品色谱因检出的薄荷脑斑点太小，不明显，故也未收入正文。

用HPLC法测定金银花中绿原酸的含量时，分别用乙醇、甲醇、水和50%甲醇进行提取，效果均不理想，故参照2010年版《中国药典》方法，将正文中提取溶剂定为50%甲醇。

表1 样品含量测定结果（n＝6）Tab 1Results of content determination of samples（n＝6）

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.

[2] 万德光.中药品种品质与药效[M].上海：上海科学技术出版社，2007：35.

[3] 沙世炎，徐 礼.中草药有效成分分析法（上册）[M].北京：人民卫生出版社，1982：41.