不同基质的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱体外溶出研究Δ

胡立志，李静，桂卉（湖南中医药大学，长沙市410007）

吴藿降压滴丸为吴茱萸和淫羊藿提取物经精制后制成的滴丸，主要治疗高血压兼有肝寒、浊气上逆的病证。其主要成分为吴茱萸碱、淫羊藿苷等。目前滴丸的基质种类很多，为了考察不同基质（如聚乙二醇（PEG）4000、PEG6000、泊洛沙姆-188）制备的本制剂的差异，本试验以吴茱萸碱的累积溶出量为指标，测定其在不同基质制备的滴丸中的体外溶出情况，为选择最佳的滴丸基质提供试验依据。

1 仪器与试药

ZRS-8G型智能溶出度实验仪（天津大学无线电厂）；1200型高效液相色谱（HPLC）仪（美国Agilent公司）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：450 W）；AUY120型分析天平（日本岛津公司）。

吴茱萸碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110802-200606）；吴藿降压滴丸（湖南中医药大学药剂教研室自制）；人工胃液按2005年版《中国药典》（二部）方法[1]配制；PEG4000、PEG6000（天津科密欧化学试剂有限公司）；泊洛沙姆-188（湖北恒硕化工有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 吴藿降压滴丸的制备

吴茱萸经提取纯化、浓缩干燥得到浸膏后，粉碎，过100目筛，得吴茱萸浸膏粉，备用；淫羊藿经40%乙醇提取过滤后，经大孔吸附树脂纯化处理，同法干燥，粉碎，得到淫羊藿浸膏粉。将2种干浸膏粉按一定比例混合后分别与PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆-188作为基质制成滴丸。

2.2 吴茱萸碱含量测定方法

2.2.1色谱条件色谱柱：NUCLEOSIL 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-甲醇-水（38∶19∶43）；检测波长：225 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。理论板数按吴茱萸碱峰计算应不低于3 000。

2.2.2 溶液的制备 （1）对照品溶液的制备：精密称取吴茱萸碱对照品适量，置于棕色量瓶中，加甲醇溶解，配成浓度为100.0 μg·mL-1的吴茱萸碱对照品贮备液。精密吸取此贮备液10 mL，置于50 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。（2）供试品溶液的制备：分别精密称取以PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆-188为基质制备的吴藿降压滴丸20粒，计算平均重量，研细后分别称取与平均重量相应的滴丸，置于100 mL量瓶中，用溶出介质溶解，超声1 h，冷却至室温，用溶出介质定容，摇匀，分别作为供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

2.2.3 系统适用性试验 分别取溶出介质、吴茱萸碱对照品溶液和供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10 μL进样，考察溶出介质对吴茱萸碱的含量测定有无干扰，色谱见图1。

2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取吴茱萸碱对照品贮备液0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10 μL，分别注入色谱仪，以吴茱萸碱进样量（X，μg）为横坐标，吴茱萸碱的峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝129.17X+8.847 3（r＝0.999 8）。结果表明，吴茱萸碱进样量在1.0～100.0 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 精密吸取吴茱萸碱对照品溶液适量，进样10 μL，连续进样6次，记录吴茱萸碱的峰面积。结果，RSD＝0.64%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 分别精密吸取供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，于0、2、4、8、12、24 h进样，记录吴茱萸碱的峰面积。结果，各供试品溶液中吴茱萸碱峰面积的RSD分别为0.47%、0.51%、0.40%（n均为6），表明各供试品溶液在24 h内稳定性均良好。

2.2.7 重复性试验 精密称取以PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆-188为基质的吴藿降压滴丸，按“2.2.2”项下方法各制备6份供试品溶液，分别进样，测定吴茱萸碱的峰面积。结果，RSD分别为2.27%、1.86%、1.57%（n均为6），表明方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验 分别精密称取不同基质制备的吴藿降压滴丸细粉6份，每份约20 mg，置于100 mL容量瓶中，分别加入吴茱萸对照品贮备液10、15、20 mL各2份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定每份溶液中吴茱萸碱的含量，每份测定3次，计算回收率，结果见表1。

2.2.9 样品含量测定 将每个取样时间点取得的样品液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，按“2.2.1”项下色谱条件进样，测定样品液中吴茱萸碱含量。

表1 加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test

2.3 溶出度试验

2.3.1 溶出介质的选择 由于本试验所测得的指标成分吴茱萸碱可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，为了选择最佳的溶出介质，笔者考察了吴藿降压滴丸在水、10%的甲醇水溶液、人工胃液、人工肠液中的溶出情况。结果表明，在10%的甲醇水溶液中，不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的溶出最多，故选用10%的甲醇水溶液作为溶出介质。不同溶出介质中吴茱萸碱的溶出度见表2。

表2 不同溶出介质中吴茱萸碱的溶出度（%）Tab 2 Dissolution of evodiamine in different dissolution mediums（%）

2.3.2 溶出方法的选择 以10%的甲醇水溶液100 mL为溶出介质，温度（37±0.5）℃，转速100 r·min-1。首先比较了转篮法和浆法，45 min内，转篮法平均溶出量为87.4%，浆法平均溶出量为98.2%，因此宜选用浆法。另外，还比较了100、80、50 r·min-13种转速，45 min平均溶出量分别为98.6%，94.1%，93.7%，因此选用转速100 r·min-1。因为吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的含量较少，故选用小杯法。

2.3.3 100%溶出量测定 取“2.2.2”项条件下供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，按“2.2.9”项下方法测定吴茱萸碱的含量，作为不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的100%溶出量。

2.3.4 溶出曲线的制备 按2005年版《中国药典》（一部）项下[1]规定，采用浆法测定药物的溶出度。溶出介质为100 mL的10%的甲醇水溶液，温度（37±0.5）℃，转速100 r·min-1。分别精密称取不同基质制得的吴藿降压滴丸，投入溶出杯中后，分别于1、3、5、10、15、20、30、45、60 min抽取溶出介质2 mL（同时加补2 mL的空白介质），用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为样品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样10 μL，测定吴茱萸碱峰面积，计算出各个时间点吴茱萸碱的溶出量，再与100%溶出量比较计算溶出度，每种基质滴丸测定6粒，求出各时间下的累积溶出百分数[2，3]，以平均累积溶出度（%）为纵坐标，时间（t，min）为横坐标，制备溶出度曲线。不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的累积溶出度见表3；不同基质制备的吴藿降压滴丸的溶出曲线见图2。

2.3.5 溶出度比较 将表3中的累积溶出度数据按威布尔公式在Excel中计算[4]，分别求出累积溶出参数m、t0.3、t0.5、td、t0.8，并对其进行方差分析[5]。结果，各溶出参数都具有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01），表明不同基质的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的体外溶出特性存在极显著性差异。不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的溶出参数见表4；溶出参数的方差分析结果见表5。

表3 不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的累积溶出度（±s，n＝6）Tab3 Theaccumulativedissolutionofevodiaminein Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

表3 不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的累积溶出度（±s，n＝6）Tab3 Theaccumulativedissolutionofevodiaminein Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

时间/min 累积溶出度/%泊洛沙姆-188PEG4000PEG6000 1 3 51 0 15 20 30 45 60 4.84±0.90 10.87±1.66 33.98±1.41 80.57±3.43 92.92±3.49 95.48±3.54 98.62±1.12 99.02±0.45 99.14±0.34 8.60±0.77 31.01±1.34 65.61±1.17 85.74±1.39 92.97±2.03 93.21±1.24 93.40±1.47 95.17±1.33 95.24±1.47 8.23±0.30 28.02±0.77 56.12±1.26 81.24±3.27 88.44±1.09 90.35±1.30 92.44±1.65 93.01±1.23 93.60±0.96

图2 不同基质制备的吴藿降压滴丸的溶出曲线Fig 2 The dissolution profiles of the evodiamine in Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix

表4 不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的溶出参数（±s，n＝6）Tab 4 The dissolution parameters of the evodiamine in Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

表4 不同基质制备的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的溶出参数（±s，n＝6）Tab 4 The dissolution parameters of the evodiamine in Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

基质泊洛沙姆-188 PEG4000 PEG6000溶出参数m 1.25±0.05 0.85±0.01 0.85±0.01 t0.3/min 4.56±0.29 2.47±0.18 2.87±0.14 t0.5/min 7.75±0.53 5.39±0.41 6.30±0.33 td/min 10.38±0.76 8.29±0.65 9.70±0.53 t0.8/min 15.19±1.23 14.53±1.17 17.03±1.03

表5 溶出参数的方差分析Tab 5 Analysis of variance of dissolution parameters

3 讨论

由于本滴丸中吴茱萸碱的含量相对较低，而溶出含量测定方法中线性范围和检查灵敏度要求指标成分必须达到一定的量，经参考文献[6]，本试验中溶出度测定方法选用小杯法，且仅加入100 mL的溶出介质，避免了溶出度测定时溶液中吴茱萸碱含量低的问题。

试验结果表明，3种基质的吴藿降压滴丸中吴茱萸碱的体外溶出t0.8均在20 min以内，

其累积溶出量均达到90%以上，说明吴茱萸碱在10%的甲醇水溶液介质中溶出情况较好。其中，吴茱萸碱在泊洛沙姆-188为基质的滴丸中累积溶出量（99.1%）高于PEG类基质的滴丸（95.2%，93.6%），提示可能是滴丸中的基质（泊洛沙姆-188、PEG类）均为非离子型表面活性剂，对吴茱萸碱的溶出起增溶剂的作用，且泊洛沙姆-188增溶效果强于PEG类基质所致。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录72、附录73.

[2] 何 群，周景来，谢宗明.两种转速下测定麻杏石甘滴丸体外溶出度的研究[J].中草药，1998，21（7）：455.

[3] 何 群，曾 嵘，王 丽，等.麻杏石甘滴丸与栓剂体外溶出度比较[J].中成药，2002，22（12）：833.

[4] 胡祥珍，董 荩.Excel在测定药物制剂溶出度参数数据处理中的应用[J].解放军药学学报，2003，19（1）：74.

[5] 周 欣，宋洪涛，陈月红.不同厂家奥美拉唑肠溶胶囊的体外溶出度比较[J].解放军药学学报，2009，25（4）：358.

[6] 洪 清，袁 曦，刘亦伟，等.天宁滴丸体外溶出度测定[J].中国药房，2008，19（9）：678.