延胡索鲜品及炮制品的指纹图谱研究分析

王 荣

（湖南省郴州市临武县人民医院药剂科，湖南 郴州 424300）

延胡索为罂粟科（Papaveraceae）紫堇属植物的干燥块茎，最早见于唐朝《本草拾遗》，有两千多年的使用历史，延胡索味辛性温，有行气、行血功效，是临床治疗血瘀气滞、心腹及肢体疼痛的要药[1]，为《止痛中药》重点研究课题之一。

中药指纹图谱作为中药现代化的重要手段，已经在中药注射剂中正式实施，该方法通过对某种中药或中药制剂进行系统性的化学成分研究，并进行对应的药效学研究，筛选出中药的有效部位，再采用适当的分析手段对该中药特征性的成分和有效性成分描绘在一张图谱上，通过这张图片可以较为全面的反映出该中药或中药制剂所含化学成分的种类和数量，达到识别中药及中药制剂真伪，辨认质量优劣，从而对其质量及疗效进行判定。这种图谱和人的指纹较为相似，故被形象的称为指纹图谱[2,3]。根据所研究的中药有效成分的特性不同，指纹图谱的研究方法及技术也有所不同，当前，中药指纹图谱绝大多数还是以色谱指纹图谱的方式出现[3]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

烘箱、恒温水浴锅、日本岛津HPLC系统。

1.2 试剂

甲醇、乙腈、冰醋酸、纯化水、食用醋、黄酒。

1.3 对照品与药材

延胡索乙素对照品；去氢紫堇碱对照品；原阿片碱对照品；盐酸小檗碱对照品；巴马汀对照品。四川、陕西、浙江产三种延胡索药材。

2 方法及结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Micsphere-C18。流动相A为乙晴，B为0.01%冰醋酸溶液（三乙胺调pH至6.0），梯度洗脱。检测波长：280nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；分析时间85min，进样量：10μL。

2.2 炮制

将所购三种药材进行炮制，分别得水煮品、醋制品和酒制品，共12个样品。

2.3 对照液制备

精密称取延胡索乙素对照品、去氢紫堇碱对照品、原阿片碱对照品、盐酸小檗碱对照品、巴马汀对照品制备五种对照品的混合对照液。

2.4 供试品溶液制备

分别精密称取12个待测样品延胡索细粉于250mL磨口圆底烧瓶中，按照如下步骤制样：向磨口烧瓶中加入浓氨-甲醇溶液50.0mL，称定重量，浸渍1h，加热回流lh，放冷至室温，再称定重量，并用浓氨试液-甲醇溶液补足减失重量，震摇均匀，用快速滤纸过滤。吸取续滤液25.0mL，水浴挥干，用甲醇少量多次溶解浸膏并转移至5mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，震摇，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。按照选定的色谱条件进样检测。

2.5 采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度系统软件，对测定的供试品HPLC色谱图进行处理，得到供试品间色谱峰的相似度（0.912～0.992）及延胡索药材HPLC指纹图谱。

2.6 鲜延胡索和不同制品延胡索的指纹图谱中，峰的数量和出峰时间相似度较高，但是鲜品和制品延胡索的峰面积有明显的差异。结果见表1。

表1 不同延胡索五种主要有效成分含量均值

从表1可以看出，酒制延胡索五种有效成分的含量较其他制品延胡索和鲜品延胡索均较高。

3 讨 论

延胡索在临床用量较大，研究其质量控制标准，有助于规范延胡索的质量管理。指纹图谱是今后中药材及中药制剂质量标准的发展方向[4-6]。我们采用高效液相色谱法对延胡索的有效成分组进行检测，通过对12各样品的分析检测，确定了色谱条件（检测波长、流动相、流动相流速）及对照物质。本组资料采用二级管阵列检测器，在检测样品时，我们对样品进行了200～600nm波长之间的紫外连续扫描，得到了三维光谱图[7,8]。分析光谱图，以280nm扫描的色谱峰峰形为佳、各色谱峰间分离度较好、出峰数量和延胡索的主要有效成分一致，因此，我们将280nm确定为延胡索样品的检测波长。延胡索中含有的有效成分主要为多种生物碱，因此在流动相中适当加一些碱性物质可以防止延胡索生物碱的解离而影响有效成分含量的正确检出。我们采用过多种碱性物质，如磷酸盐缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液，采用他们做流动相，均获得了良好的分离效果，然磷酸盐类属难挥发物质类，醋酸盐则为有机物，具有一定的挥发性，对色谱的损伤小于磷酸盐类物质，因此我们选择了醋酸加三乙胺调节pH 6.0，形成醋酸铵-醋酸缓冲液。我们还对流动相的洗脱方式进行了比较，分别采用等度洗脱和梯度洗脱，结果表明，梯度洗脱程序条件更易控制，且溶剂对指纹图谱无干扰，样品的保留时间亦具有良好的重现性好，获得了良好的分离度及柱效。延胡索的主要有效活性成分有5种[9]，出于指纹图谱是综合反映药材质量的考虑[10]，我们选择了这五种成分延胡索乙素、去氢紫堇碱、原阿片碱、盐酸小蘗碱、巴马汀作为为延胡索的含量控制项目。通过本组研究资料，我们建立了延胡索药材的HPLC指纹图谱的测定方法，得到延胡索药材HPLC指纹谱及相关数据，为延胡索药材及其他含延胡索的中药复方制剂制定质量标准提供参考。

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