高效液相色谱法测定盐酸巴尼地平相关物质

万 琼 唐永丰 刘云华

（1 湖北百科亨迪药业有限公司，湖北 荆门 448000；2 湖北荆门第二人民医院药剂科，湖北 荆门 448000）

盐酸巴尼地平（Barnidipine hydrochloride）化学名hydrochloride，（s-（r*，r*）-hyl1-（phenylmethyl）-3-pyrrolidinyleste，本品为强效、长效二氢吡啶类钙拮抗剂抗高血压药。具有较强的抑制钙离子内流，使细胞中钙离子减少，从而使血管松弛、扩张，降低外周血管阻力而发挥显著的降压作用。用于轻、中、重度高血压的治疗。在合成过程中可能引入相关的杂质，本文采用HPLC法对相关的杂质进行检测，以保证产品的质量[1]。所用的分析方法灵敏、准确、可靠。

1 仪器与试药

Agilent1100液相色谱仪，Agilent 色谱工作站，磷酸二氢钾（AR）、磷酸（AR）、甲醇（色谱级）、盐酸巴尼地平消旋体（杂质）、盐酸巴尼地平对映体（杂质）、S-1-苄基-3-羟基吡咯烷（杂质）、右旋单羧酸酯（杂质），盐酸巴尼地平对照品，盐酸巴尼地平样品。

2 实验方法及结果

2.1 色谱条件及溶液

2.1.1 Agilent1100液相色谱条件

色谱柱：C18（4.6mm×150mm×5μm），检测器：紫外检测器，流动相：0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调pH值为4.0）-甲醇（50∶50），进样量：10μL，流动相流速：1.25mL/min，波长：238nm，柱温：室温。

2.1.2 溶液的制备

专属性溶液：分别称取盐酸巴尼地平样品、盐酸巴尼地平对映体、S-1-苄基-3-羟基吡咯烷、右旋单羧酸酯适量置4个量瓶中加流动相溶解得到浓度分别为25.17μg/mL、19.96μg/mL、1018μg/mL、7.74μg/mL的溶液。

对照品溶液-取盐酸巴尼地平对照品适量用流动相制成浓度为524.8μg/mL的溶液。对照品对照溶液-精密移取对照品溶液1mL至100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度制成浓度为5.248μg/mL的溶液。

定量检测限贮备溶液：称取盐酸巴尼地平对照品适量置量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度制成浓度为480.2μg/mL溶液。

线性溶液配制：称取盐酸巴尼地平适量用流动相制成浓度为50.378μg/mL的溶液。再分别量取上述溶液1mL、3mL、5mL、10mL、12mL分别置5个100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度摇匀，制成浓度分别为0.504μg/mL、1.511μg/mL、2.519μg/mL、5.038μg/mL、6.045μg/mL的溶液。

回收率溶液的配制：称取盐酸巴尼地平对照品适量用流动相制成浓度为50.346μg/mL溶液，再分别量取上述溶液1mL、3mL、10mL分别置3个100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度摇匀，制成浓度分别为0.503μg/mL、1.510μg/mL、5.035μg/mL的溶液。

样品溶液的制备：取盐酸巴尼地平样品约0.025g，精密称定，分别置50mL的量瓶中，用流动溶解并稀释至刻度，制成浓度约为500μg/mL的溶液。

样品对照液的制备：量取盐酸巴尼地平样品溶液1mL置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀，制成浓度为5μg/mL的溶液。

2.2 专属性试验

将流动相进样一针，无干扰。进四种专属性溶液，各物质的保留时间分别为：盐酸巴尼地平15.108min、对映体17.225min、S-1-苄基-3-羟基吡咯烷4.184min、右旋单羧酸酯9.307min，各物质不存在干扰或重合。

2.3 系统适用性试验

在上述试验条件下，取对照品对照溶液进样5针，盐酸巴尼地平峰面积RSD为0.93%，巴尼地平计算理论塔板数为：7716，拖尾因子1.1，盐酸巴尼地平与最近杂质峰之间的分离度2.85，能够完全分离和达到检测要求。

2.4 定量检测限

取定量检测限贮备溶液逐级稀释，按照上述试验条件，当信噪比S/N=10时，平行测定6次，即盐酸巴尼地平的定量检测限为0.336μg/mL（相对于盐酸巴尼地平样品0.07%），RSD为3.47%。

2.5 检测限

取定量检测限贮备溶液逐级稀释，按照上述试验条件，当信噪比S/N=3时，平行测定3次，即盐酸巴尼地平的定量检测限为0.101μg/mL（相对于盐酸巴尼地平样品0.02%）。

2.6 线性范围

在上述试验条件下，相同浓度溶液平行测定2次。分别以盐酸巴尼地平浓度为横坐标（X），以盐酸巴尼地平峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，结果表明在各浓度范围内线性关系良好。见表1。

表1 回归方程与线性范围试验结果（n=5）

2.7 回收率试验

在上述试验条件下测定，根据对照品对照溶液5针盐酸巴尼地平峰面积的平均值和盐酸巴尼地平浓度进行计算，结果见表2。

2.8 溶液的稳定性

取盐酸巴尼地平样品溶液，以24h、48h分别连续进样，单杂质和总杂质检测结果没有增加，且没有出现新的杂质峰，溶液放置2d是稳定的。

2.9 样品测试

取各批次供试品，按上述试验条件进行测定，结果见表3。

表2 回收率试验表

表3 样品测试表

3 讨 论

波长的选择：盐酸巴尼地平在紫外区的最大吸收波长为238nm，因此选择238nm作为检测波长。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2010.