人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠体内血管活性物质的调节作用

于 蕾 王健春 黄 民 孙晓霞 (吉林大学白求恩医学院生理学系，吉林 长春 3002)

人参二醇组皂苷(PDS)具有降血脂、抗血小板聚集、抗心肌缺血、提高机体免疫力、预防感染等作用〔1～4〕。实验证明，PDS通过改善微循环状态，对内毒素休克具有保护作用〔5〕。血管活性物质在内毒素休克发病过程中扮演重要角色，其中血栓素(TXA2)、前列腺素I2(PGI2)及一氧化氮(NO)对维护机体血管功能及内环境稳定具有重要意义。但由于前二者半衰期较短，直接测定其含量困难极大，故国内外均测定其代谢产物血栓素 B2(TXB2)及 6-酮-前列腺素 F1α(6-Keto-PGF1α)作为检测指标。本实验通过复制内毒素休克模型，观察PDS对内毒素休克大鼠体内TXB2、6-keto-PGF1α及NO含量的影响，探讨PDS对内毒素休克大鼠体内血管活性物质的调节作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 Wistar大鼠50只，体重230～250 g雌雄各半，由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。

1.1.2 药品 PDS由吉林大学天然药物化学教研室提供，为淡黄色粉末，纯度85%以上;地塞米松注射液(天津药业集团新郑股份有限公司，批号:030216);大肠杆菌内毒素(LPS，Sigma公司)，血清型OⅢ:B4，均用5%葡萄糖溶液配制。TXB2、6-Keto-PGF1α检测试剂盒(中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所，批号:20060108)。NOS、NO检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号:20030813、20030829)。

1.2 方法 Wistar大鼠50只，实验前禁食24 h，自由饮水。随机分为五组:对照组(Control组，C组);内毒素休克组(LPS组，L组);地塞米松预治疗组(LPS+Dex组，LD组);PDS预治疗组(LPS+PDS组，LP组)。动物用戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧固定于鼠板上，分离一侧颈总动脉，插动脉插管，通过压力传感器连接BL-420医学机能实验系统，记录血压，待血压平稳后，记录正常的心率、血压。实验前C组和L组大鼠舌下静脉注射5%葡萄糖溶液5 ml/kg，LD组静脉注射地塞米松(2 mg/kg)葡萄糖溶液5 ml/kg，LP组分别静注PDS(45 mg/kg、90 mg/kg)葡萄糖溶液 5 ml/kg，10 min 后除 C组外均静脉注射LPS(5 mg/kg)，C组注入等量的葡萄糖溶液，以血压降到实验前基础血压的2/3时判断为休克状态〔6〕。各组在休克2、4 h时腹主动脉取血离心10 min(3 000 r/min)取血清待用。在休克4 h时处死动物，称取肝组织20 mg置微型匀浆器中，加无水乙醇0.1 ml研磨，再加生理盐水0.9 ml充分研磨制成匀浆，置于－20℃以下保存，待测TXB2和6-Keto-PGF1α的含量。肝组织中TXB2、6-Keto-PGF1α含量及血清NOS活性、/测定的操作方法按说明书。

1.3 统计学方法 采用SPSS11.0统计软件包处理，两组间数据比较采用t检验，所有结果均用表示。

2 结果

2.1 PDS对内毒素休克大鼠肝组织中TXB2、6-keto-PGF1α的变化 在休克4 h时处死动物，称取肝20 mg匀浆后，测得L组大鼠肝组织中TXB2及6-Keto-PGF1α的含量与对照组相比明显升高(P ＜0.01);LP(45、90 mg/kg)组 TXB2及 6-Keto-PGF1α的含量均显著低于 L组(P＜0.05，P＜0.01);LP(45 mg/kg)组6-Keto-PGF1α/TXB2比 L 组降低;LP(90 mg/kg)组 6-Keto-PGF1α/TXB2与L组比较未见差异。见表1。

2.2PDS对内毒素休克大鼠血清中NOS活性、NO－2/NO－3含量的影响 注射内毒素大鼠休克2～4 h后L组的血清NOS活性和 NO生成水平明显升高(P＜0.01)，LD组和 LP(45 mg/kg)组2～4 h时NOS活性、NO－2/NO－3低于L组(P＜0.05)，LP(90 mg/kg)组只在2 h时NOS活性、NO－2/NO－3低于L组(P＜0.01)，4 h时与L组无明显差异。见表2。

表1 PDS对内毒素休克大鼠肝组织中的TXB2、6-Keto-PGF1α水平的影响(，n=10，pg/mg)

表1 PDS对内毒素休克大鼠肝组织中的TXB2、6-Keto-PGF1α水平的影响(，n=10，pg/mg)

与C组比较:1)P＜0.01;与L组比较:2)P＜0.05，3)P＜0.01

组别 6-Keto-PGF1α TXB2 6-Keto-PGF1α/TXB2 13.18±2.53 12.68±1.83 1.06±0.23 L组 21.62±3.431) 21.40±2.851) 1.10±0.26 LD组 13.38±2.983) 13.34±3.243) 1.06±0.35 LP(45 mg/kg)组14.40±4.113) 18.68±2.992) 0.81±0.323)LP(90 mg/kg)组15.09±3.722) 15.60±0.913)C组0.93±0.26

表2 PDS对内毒素休克大鼠血清中NOS活性及NO2－/NO3－含量的影响(，n=10)

表2 PDS对内毒素休克大鼠血清中NOS活性及NO2－/NO3－含量的影响(，n=10)

与C组比较:1)P＜0.01;与L组比较:2)P＜0.05，3)P＜0.01

组别 剂量(mg/kg)NOS(nmol·min －1·g－1)NO(μmol/gprot)84 L组 5 45.43±6.281) 38.33±5.451) 32.48±2.611) 41.77±9.721)LD组 2 35.47±8.882) 30.17±5.842) 29.10±2.702) 32.91±6.192)LP组 45 39.20±8.832) 30.81±6.482) 29.96±1.742) 31.34±7.432)90 36.75±4.193) 33.37±6.02 28.77±2.323)2 h 4 h C组 － 29.23±1.84 28.45±4.20 26.71±2.28 25.21±1.2 h 4 h 33.07±7.29

3 讨论

血管内皮细胞释放多种血管活性物质，它们的活性特别是它们之间的相互作用决定血管口径的变化。其中PGI2和NO有抑制血小板聚集和扩张小血管的作用;NO作为一种反应极强的自由基可以直接或间接介导内毒素对组织器官的损伤。一氧化氮合酶(NOS)作为NO生成的限速酶，是影响内毒素性休克发病过程的重要中介物质〔7〕。由血小板微粒体合成并释放的TXA2可促进血小板的聚集和小血管的收缩。感染性休克的病原微生物和内毒素直接作用并损伤内皮细胞，导致PGI2/TXA2平衡失调，成为引发弥散性血管内凝血(DIC)发生的重要原因之一。故内毒素血症及内毒素休克的高发病率和高死亡率一直是困扰医学界的一大难题。PDS作为人参中提取的天然活性成分，临床应用副作用小，能够改善微循环、抗血小板聚集、提高免疫力、预防感染〔2，4，5〕，具有传统的抗休克药物地塞米松无法比拟的优点。

本实验结果显示，内毒素休克大鼠体内 TXB2、6-Keto-PGF1α、血清NOS和NO水平与对照组相比均明显升高，它们之间的相互作用或比例失衡可能是导致休克大鼠血管舒张、血小板聚集及持续性低血压的重要原因〔8〕。PDS治疗后，上述指标均有降低，LP(45 mg/kg)组6-Keto-PGF1α与TXB2的比值降低，提示PDS能够调节体内多项血管活性物质的含量，改善微循环，在感染性休克治疗中发挥重要作用。

1 胡翠华，徐华丽，于晓风，等.人参二醇组皂苷对实验性2型糖尿病大鼠血糖及血脂代谢的影响〔J〕.吉林大学学报医学版，2006;32(6):1004-8.

2 于晓风，曲绍春，刘 巍，等.西洋参茎叶20s-原人参二醇组皂苷对实验性脑缺血大鼠血小板功能及血液流变学的影响〔J〕.中药材，2011;34(2):272-5.

3 韩 冬，于晓风，曲绍春，等.人参二醇组皂苷对心肌梗死后心室重构大鼠心脏形态学及血动力学的影响〔J〕.中国老年学杂志，2011;31(1):57-9.

4 谢新生，张秀丽，高 聆.一氧化氮对白血病HL-60细胞作用的研究〔J〕.中国现代医学杂志，2002;23(1):37-9.

5 唐笑迪，孙晓霞，王健春.人参二醇组皂苷对感染性休克大鼠血液流变性及微循环的影响〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(12):3044-6.

6 Jones SB，Romano FD.Plasma catecholamines in the conscious rat during endotoxicosis〔J〕.Circ Shock，1984;14(3):189-201.

7 刘 钢，吴新民，王 庚，等.内毒素血症大鼠肺主动脉中一氧化氮合酶蛋白表达〔J〕.中华外科杂志，2001;39(2):171-3.

8 Gross SS，Wolin MS.Nitric oxide:Pathophysiological mechanisms〔J〕.Annu Reu physiol，1995;57:737-69.