Bmi-1蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者术后生存的相关性

张爱荣 梁丽梅 许 颖 胡海燕 (北华大学附属医院消化内科，吉林 吉林 300)

胃癌发病与原癌基因的高表达有密切的相关性。多梳基因(PcG)家族由多种与细胞周期和增殖相关的转录抑制子组成，是一类重要的与发育相关的基因。Bmi-1基因是PcG基因家族的成员之一〔1〕，可协同c-myc基因共同促进细胞转化和肿瘤形成，使肿瘤细胞逃逸凋亡〔2〕。目前证实Bmi-1基因在多种肿瘤中均呈高表达〔3〕，且与患者预后有关。本文拟研究Bmi-1基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者术后生存的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象及标本来源 我院2009年1～12月接受胃癌手术治疗的患者90例，其中术后随访资料完整者62例。术前均未接受化疗放疗及免疫治疗，其中男44例，女18例，年龄34～81岁，其中胃底-贲门癌32例，胃体癌10例，胃窦癌5例，全胃癌11例，残胃癌4例;鳞癌14例，腺癌48例;高分化10例，中分化14例，低分化38例;有无淋巴结转移者分别为25、37例;Borrmann分型:Ⅰ～Ⅱ型23例，Ⅲ～Ⅳ型39例。所有标本分别在癌灶、癌旁3 cm以内及手术远端正常黏膜组织3处取材，均经病理证实。均随访3～5年。

1.2 免疫组化染色法检测胃组织中Bmi-1表达 采用SP法检测。每个蜡块取3 μm连续切片，具体操作按试剂盒说明。鼠抗人Bmi-1单克隆抗体购自上海广盛生物有限公司，SP免疫组化试剂盒和抗体稀释液购自福州迈新技术有限公司。免疫组化染色结果评价应用普通光学显微镜，高倍镜下随机选取4个不同的视野，计算核阳性细胞数占细胞总数的百分比，阳性细胞率＜10%为1分，阳性细胞率＞10%且≤50%为2分，阳性细胞率＞50%且≤75%为3分，阳性细胞率＞75%为4分。根据染色强弱程度计分:阴性为1分，弱染色2分，中等强度染色3分，强染色4分。通过二者的成绩判断结果:≤4分为(-);＞4分且≤8分为(+);＞8分且≤12分为();＞12分且≤16分为();以上结果由至少两位病理科医师在双盲情况下观察所得。

1.3 统计学分析 采用Kaplan-Meier法统计Bmi-1阳性表达及胃癌患者各项临床指标对其存活时间的影响，Cox回归多因素模型分析筛选影响胃癌患者生存期的独立因素。

2 结果

2.1 Bmi-1在胃癌组织中的表达 胃癌组织中Bmi-1的阳性率高达75.8%(47/62)，而癌旁组织的阳性率为33.9%(21/62)，两者差异显著(P＜0.05)，且两者的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织(1.3%，P＜0.01)。见图1。

2.2 Bmi-1蛋白与胃癌患者术后生存的关系 存活3年以上者39例(62.9%)。随访者中47例Bmi-1阳性者，存活3年以上者20例(42.5%);15例Bmi-1阴性者，存活3年以上者12例(80%)，两者差异显著(P＜0.05)。

图1 Bmi-1在胃癌组织中的表达(DAB，×200)

2.3 临床病理特征与胃癌患者的生存分析 Kaplan-Meier单因素分析显示:年龄、分化程度、Borrmann分型、有无淋巴结转移及Bmi-1阳性表达是影响胃癌患者生存的重要因素。而COX回归分析显示Borrmann分型，有无淋巴结转移及Bmi-1阳性表达是影响胃癌患者生存的独立危险因素。见表1，表2。

表1 胃癌患者单因素生存分析(Kaplan-Meier法)

表2 Cox回归多因素分析与预后相关的独立危险因素

3 讨论

人类Bmi-1基因定位于10p11.23，由10个外显子组成，cDNA全长3 251 bp，位于506～1 486 bp之间的开放阅读框编码一个含326个氨基酸，相对分子量为45 kD的核蛋白质。Bmi-1基因通过负性调控下游INK4a/ARF调控位点而影响细胞增殖和衰老〔4〕。在不同启动子的作用下，INK4a编码p16 INK4a与 p19ARF两种蛋白，在细胞周期中，由于 cyclinD/CDK4/6复合物的作用，pRB是高度磷酸化的，故不能结合并抑制E2F转录因子，而允许E2F靶基因转录，使细胞由G1期进入S期，促进细胞生长和增殖〔5〕。当 Bmi-1过度表达时，p16INK4a蛋白则表达下调，cyclin D与CDK4/6复合物则形成增多，最终通过p16INK4a/cyclin D/Rb通路，促进细胞生长和增殖〔6〕。另外，Bmi-1高表达还可以抑制p19ARF蛋白表达，通过p19ARF/MDM2/p53通路而阻止细胞周期停滞和细胞凋亡〔7〕。肿瘤细胞中Bmi-1基因表达失调而导致的pRb和p53异常调控可能是pRb和p53肿瘤抑制途径频繁受阻的重要原因。近年发现，Bmi-1基因在多种恶性肿瘤如白血病、结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等高表达，并且与这些肿瘤的侵袭、转移、预后等一系列病理过程有关〔8〕。本研究结果提示Bmi-1蛋白在胃癌的发生发展中也有着不可忽视的作用。另外，本文在对胃癌患者生存期随访的研究结果表明，影响胃癌患者术后生存的因素众多，包括年龄，分化程度、Borrmann分型、有无淋巴结转移及Bmi-1阳性表达，而其中的后三者则是影响胃癌患者术后生存的独立因素。由此可见，Bmi-1高表达增强了胃癌细胞增殖及侵袭能力，与胃癌浸润、转移及预后方面有重要影响。这为胃癌的基因治疗提供了新的靶点。

1 Dimri GP，Martinez JL，Jacobs JJ，et al.The Bmi-1 oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells〔J〕.Cancer Res，2002;62(16):4736-45.

2 Molofsky AV，Pardal R，Iwashita T，et al.Bmi-1 dependence distinguishes neural stem cell self-renewal from progenitor proliferation〔J〕.Nature，2003;425:962-7.

3 刘丹丹，张艳丽，孟秀香.Bmi-1基因与肿瘤关系研究进展〔J〕.大连医科大学学报，2009;31(3):355-8.

4 Jacobs JJ，Kieboom K，Marino S，et al.The oncogene and polycomb-group gene Bmi-1 regulates cell proliferation and senescence through the ink4a locus〔J〕.Nature，1999;397(6715):164-8.

5 高凤兰，刘春灵，李维山.沉默Bmi-1基因表达对胃癌细胞BGC823衰老和转移的作用〔J〕.世界华人消化杂志，2010;18(4):335-9.

6 肖 军，邓长生，汤小燕，等.RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胃癌AGS细胞株的作用〔J〕.武汉大学学报(医学版)，2009;30(6):732-6.

7 Park IK，Morrison SJ，Clarke MF.Bmi1，stem cells，and senescence regulation〔J〕.J Clin Invest，2004;113(1):175-9.

8 Glinsky GV，Berezovska O，Glinskii AB.Microarray analysis identifies a death from cancer signature predicting therapy failure in patients with multiple types of cancer〔J〕.J Clin Invest，2005;115(6):1503-21.