昆布多糖对家兔血小板聚集和释放的影响＊

曾惠芬，徐 露

(1.南方医科大学附属小榄医院，广东 中山 528415;2.重庆医科大学药学院·重庆市生化与分子药理重点实验室，重庆 400016)

昆布为海带科植物海带或翅藻科植物昆布的干燥叶状体，含藻胶酸、氨基酸、多糖、甘露醇、多种维生素和丰富的碘。昆布多糖(thallus laminariae polysaccharides，TLP)是昆布的主要活性成分之一，现代药理学研究发现，其具有调脂、改善血液流变学异常等作用，能抑制花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶和氯化钙诱导的血小板聚集[1]。笔者观察了昆布多糖对血小板活化因子(PAF)诱导的血小板聚集和释放作用的影响，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

TYXN－96型多功能智能血液凝聚仪(上海通用技术研究所);ELX－800型酶标仪(美国宝特公司)。日本大耳白兔，体重(2.0±0.2)kg，雌雄各半，由重庆医科大学实验动物中心提供。昆布多糖(上海百沃科技有限公司);血小板活化因子(Cayman公司，溶解在pH=7.6的含0.25%小牛血清蛋白的Tris－NaCl溶液中，浓度为3.6 nmol/L);枸橼酸钠(北京中杉金桥生物技术公司，用蒸馏水配制成3.8%的溶液。双抗夹心放射免疫测定试剂盒(天津四方放射医学研究所)。

1.2 试验方法

分组及给药方法:取日本大耳白兔40只，随机均分为生理盐水(对照)组、昆布多糖高剂量组、昆布多糖中剂量组和昆布多糖低剂量组，每组10只。各组每天灌胃给药1次，高、中、低剂量组昆布多糖灌胃剂量分别为400，200，100 mg/kg，生理盐水组给予等容积生理盐水。

血小板聚集率测定:各组动物给药3 d后，心脏取血6 mL，用3.8%枸橼酸钠1∶9抗凝，800 r/min离心10 min，取上清液得富血小板血浆(PRP)，剩余部分以3000 r/min离心15 min，得贫血小板血浆(PPP)。用贫血小板血浆调节富血小板血浆，使富血小板血浆血小板数目为360×109/L。测定并记录在1 μL血小板活化因子诱导剂下1 min和5 min血小板聚集率及最大血小板聚集率。血小板聚集抑制率(%)=(对照组血小板最大聚集率－给药组血小板最大聚集率)/对照组血小板最大聚集率×100%。

血浆GMP－140含量测定:取100 μL富血小板血浆，加入1 μL的血小板活化因子，诱导血小板颗粒膜蛋白(GMP－140)的释放。另取10只健康家兔富血小板血浆100 μL，不加入血小板活化因子，作为阳性对照。用双抗夹心放射免疫法测定各组血浆GMP－140含量，酶标仪读取数据。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，所有数据均以表示，组间比较采用 t检验。

2 结果

2.1 家兔血小板聚集率检测结果

和生理盐水组相比，高、中、低3种剂量的昆布多糖均能抑制血小板活化因子诱导的家兔血小板聚集(P＜0.05或 P＜0.01)，随着剂量的增加，血小板聚集抑制率增高。见表1。

表1 家兔血小板聚集率检测结果(，n=8)

表1 家兔血小板聚集率检测结果(，n=8)

注:与生理盐水组相比，▲P ＜0.01，△P ＜0.05。

组别 剂量(mg/kg)生理盐水组昆布多糖高剂量组昆布多糖中剂量组昆布多糖低剂量组等容积4002001001 min 33.36 ± 5.8121.22 ± 4.23▲24.36 ± 4.42▲26.43 ± 4.72△给药后聚集率(%) 聚集抑制率(%)5 min 64.27 ± 7.4833.16 ± 6.35▲39.02 ± 6.26▲41.21 ± 6.48▲最大聚集率68.58 ± 10.1741.47 ± 5.83▲44.45 ± 6.10▲54.66 ± 8.24△39.5335.1920.30

2.2 血浆GMP－140含量检测结果

和生理盐水组相比，高、中、低3种剂量的昆布多糖均能显著降低血浆 GMP－140含量(P ＜0.01或 P ＜0.05)，见表 2。

3 讨论

血小板聚集有多种诱导机制，花生四烯酸、二磷酸腺苷、凝血酶、氯化钙和血小板活化因子可通过5种不同的机制来诱导血小板聚集，而血小板活化因子是目前发现的最强的血小板聚集剂[2]。已有研究证明，昆布多糖能够抑制花生四烯酸、二磷酸腺苷、凝血酶和氯化钙4种诱导剂诱导的血小板聚集[3]。GMP－140是一种膜糖蛋白，存在于静息血小板a颗粒膜上。它是血小板活化后的释放产物，是反映血小板活化和释放的特异性标志，可以直接反映血小板的激活程度[4]。当加入诱导剂血小板活化因子后，随着血小板的活化，有部分GMP－140蛋白颗粒释放到血液中，血浆中GMP－140的含量会大幅升高[5]。本研究发现，昆布多糖能显著抑制诱导的血小板聚作用和GMP－140的释放，说明昆布多糖具有抑制血小板聚集和活化作用。

表2 昆布多糖对家兔血浆GMP－140含量的影响

[1]Chang－Mok.Effect of sea tangle(Laminaria japonica)extract and fucoidan componments on lipid metabolism of mouse[J].Journal of the Korean Fisheries Society，2000，32(2):124.

[2]Guo NJ，Chang YL，Xiao DJ，et al.Activation of Platelet－neutrophil mediated by platelet－activating factor[J].J Exp Hematol，2005，13:447－451.

[3]孙立靖，王 彦，台 杰，等.昆布药理作用研究概述[J].中国药业，2009，18(2):59 －60.

[4]彭 波，项 辉，赵金华，等.褐藻多糖硫酸酯影响血小板聚集及血栓形成[J].中山大学学报，2002，22(1):331－333.

[5]邵 磊，辛现良，耿美玉，等.昆布多糖药理作用的研究进展[J].中国海洋药物，2005，24(2):112 －114.