高效液相色谱法测定舒冠胶囊中淫羊藿苷含量

2011-07-28万维香

中国药业 2011年21期

万维香

(江苏省泰州市第一人民医院，江苏泰州 225300)

舒冠胶囊由制何首乌、川芎、黄精(制)、红花、淫羊藿、五灵脂(醋制)、丹参7味药材的提取物加适宜的辅料制成，制何首乌为方中主药，含有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等蒽醌类脂溶性成分和2，3，5，4'－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷等二苯乙烯类水溶性等成分[1]。由于大黄素、大黄素甲醚等在水提醇沉工艺中转移率较低，而2，3，5，4'－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷遇光极不稳定，此两类成分不宜作为含量控制指标。因此笔者参考文献[2]，选择淫羊藿的主要成分淫羊藿苷作为指标成分，采用准确、灵敏的高效液相色谱法进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Model 510型液相色谱仪(美国Waters);TG332A型电子天平(湘西仪器仪表厂)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0737－200111，供含量测定用);舒冠胶囊(自制，批号分别为041206，041207，041208);所用甲醇为色谱纯，其余试药与溶剂均为分析纯;水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Shimpack－ODS柱(150 mm×4.5 mm，5 μm);检测波长:270 nm;流动相:甲醇－0.05%磷酸溶液(55∶45);流速:1 mL/min。在此色谱条件下，色谱图见图1，淫羊藿苷峰理论板数为2518，拖尾因子 T=1.106，分离度R=1.94，符合规定。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取本品内容物约0.2 g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入流动相50 mL，称定质量，加热使溶解，放冷，再称定质量，用流动相补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按照处方组成，取除淫羊藿以外的其余辅料，按制备工艺要求制成不含淫羊藿舒冠胶囊，按供试品溶液制备项下方法制备成阴性对照品溶液。取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含25μg的对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:照拟订的色谱条件，精密吸取阴性对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。从图1可知，阴性对照品溶液在淫羊藿苷峰位置无吸收峰，说明阴性对照品溶液不干扰主药的含量测定。

线性关系考察:取淫羊藿苷对照品，加流动相制成47.6μg/mL的溶液，作为贮备液。分别精密吸取贮备液，加流动相制成质量浓度为 4.76，9.52，19.04，28.56，38.08，47.6μg/mL 的溶液，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标(Y)、淫羊藿苷进样量为横坐标(X)进行回归处理，得线性回归方程 Y=2000000X+60496，r=0.9999。结果表明，淫羊藿苷进样量在 0.0952 ～ 0.952μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:取对照品溶液，精密吸取20 μL，重复进样6次。结果的 RSD=0.97%(n=6)，表明方法精密度良好。

重现性试验:取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定淫羊藿苷含量，结果的 RSD=2.0%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，于室温条件下放置8 h，每隔2 h进样1次，测定峰面积。结果的 RSD=1.7%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品(含量2.8 mg/粒)6份，每份约0.1 g，置具塞三角烧瓶中，分别精密加入淫羊藿苷对照品10 mL(55μg/mL，流动相溶解)，再精密加入流动相 40 mL，称定质量，加热使溶解，放冷，再称定质量，用流动相补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，依法测定，结果见表1。

2.4 样品含量测定

分别精密量取10批样品适量，按溶液制备方法制备对照品溶液和供试品溶液，精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，依法测定。结果见表2。

表1 加样回收试验结果(n=6)

表2 样品含量测定结果(mg/粒，n=10)

2000年版《中国药典(一部)》[3]规定淫羊藿药材含淫羊藿苷(C33H40O15)不少于0.5%，本品每粒含淫羊藿药材0.6 g，理论上本品每粒含淫羊藿苷应不低于3 mg。实测本品10批样品，淫羊藿苷含量为2.0～3.6 mg/粒;稳定性试验中，含量基本稳定。考虑到生产上的波动性，故暂订本品淫羊藿苷含量不低于1.8 mg/粒[4－5]。