高效液相色谱法测定保济胶囊中连翘苷含量
2011-07-28屈金凤
屈金凤
(中国人民解放军第三军医大学大坪医院药剂科，重庆 400042)
保济胶囊是由连翘、山楂、六神曲、半夏、麦芽等提取制成的中药制剂，具有消食积、和脾胃功效，临床用于治疗宿食不消、胸膈痞满、噫气吞酸、不思饮食等症，疗效较好。为有效控制产品质量，笔者采用高效液相色谱法测定本制剂中连翘苷的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
Waters 2695/2996型高效液相色谱仪。连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110821－200609);水为纯化水;乙腈为色谱纯;其余试剂均为分析纯;保济胶囊(市售品，批号分别为100501，100502，100601，100602，100603)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Waters Symmetry C18柱(200 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－水(24∶76);流速:1.0 mL/min;检测波长为 277 nm;柱温:30℃。理论板数以连翘苷计算不低于3000。
2.2 溶液制备
取本品装量差异项下的内容物，研细，取约 0.5 g，精密称定，加甲醇40 mL，超声提取30 min，滤过，残渣用甲醇洗涤2次，每次5 mL，合并滤液，回收甲醇至干，残渣加30 mL水使溶解;以水饱和的正丁醇萃取5次，每次30 mL;合并水饱和的正丁醇提取液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移至5mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用 0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取连翘苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含0.074 mg的溶液，作为对照品溶液。按保济胶囊制备工艺，制备缺连翘的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
图1 高效液相色谱图
2.3 方法学考察
专属性考察:照拟订的色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪。供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液色谱图相应位置上有一相同色谱峰，阴性对照品溶液在此保留时间无吸收峰，表明阴性对照对测定无干扰，选择性较好。色谱图见图1。
线性关系考察:精密吸取对照品溶液 2，10，15，20，25，30 μL，注入液相色谱仪，以连翘苷进样量(μg)为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，得回归方程 Y=245103 X－10241，r=0.9999(n=6)。结果表明，连翘苷进样量在 0.148 ～ 2.220μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。
精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次。结果连翘苷峰面积的 RSD为0.57%(n=5)。
稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，1，3，6，12 h时进样。结果连翘苷峰面积值的 RSD为1.06%(n=5)，表明供试品溶液稳定性良好。
重现性试验:取同一批样品6份，依法测定，以外标法计算连翘苷的含量。结果样品中连翘苷平均含量为0.28 mg/粒，RSD为1.10%(n=6)。
加样回收试验:取已知含量的样品6份，分别加入连翘苷对照品，按拟定的供试品溶液制备方法和测定条件，测定连翘苷含量，计算回收率。结果见表1。
表1 连翘苷加样回收试验结果(n=6)
2.4 样品含量测定
按2.2项下制备方法制备供试品溶液，并按2.1项下测定方法测定样品中连翘苷含量。结果批号为100501，100502，100601，100602，100603 的 5 批样品中，连翘苷含量分别为 0.27，0.25，0.28，0.28，0.26 mg/粒。
3 讨论
2005年版《中国药典(一部)》中，部分连翘制剂中连翘苷含量测定采用三氯甲烷进行萃取，文献报道[1－2]关于连翘苷的提取采用水饱和正丁醇萃取，2010年版《中国药典(一部)》连翘药材中供试品溶液方法采用中性氧化铝纯化制备。为考察不同溶剂提取方法的纯化效果，笔者考察了水饱和正丁醇萃取、中性氧化铝纯化提取和三氯甲烷萃取对含量测定结果的影响，结合本制剂实际情况，结果表明正丁醇萃取效果优于其他两种提取方法。还对供试品制备方法中提取溶剂的次数、用量进行考察，多次试验表明，文中方法重现性好，结果准确可靠。
[3]选用乙腈－水作为流动相。以乙腈－水(24∶76)为流动相时，样品中连翘苷峰与相邻色谱峰可达到基线分离，峰形对称，阴性对照无干扰。因此，所建立的含量测定方法可用于保济胶囊的质量控制。
参考文献:
[1]谭喜莹，赵陆华，王淑云.HPLC法测定急咳停颗粒中连翘苷的含量[J].中国药师，2009，12(11):1569.
[2]李芳美，林朝展，甄松峰.RP－HPLC法测定抗病毒口服液中芒果苷和连翘苷的含量[J].中药新药与临床药理，2009，20(1):47.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:159.
