高效液相色谱法测定丹墨胶囊中丹酚酸B含量＊

林生文 ，李瑞明 ，陈 孝 ，隆 颖 ，曹 媛 ，吴敏江 ，任 斌

(1.广东省药品检验所，广东 广州 510180; 2.中山大学附属第一医院，广东 广州 510080)

丹墨胶囊是由墨旱莲、女贞子和丹参等组方，具有滋阴补肾、活血祛瘀功效，主要用于治疗以肾虚为主的慢性肾炎、隐匿性肾炎和肾病综合征，可大幅度减少激素用量和副作用，提高疗效，推迟复发时间，减少复发次数，治疗效果显著[1]。丹酚酸B为方中主药丹参的主要有效成分，2010年版《中国药典(一部)》[2]中其含量也是丹参药材的质量控制指标之一。因此，笔者选择丹酚酸B作为含量测定指标，参照文献[3－6]对丹墨胶囊进行含量测定，报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津SIL－HTC高效液相色谱仪;SPD－20A型紫外检测器，Agilent 1100型高效液相色谱仪;普析通用TU－1901型紫外－可见分光光度计;Sartorius CP225D型电子天平。丹酚酸B对照品(含量 97.2%，中国药品生物制品检定所，批号为 110562－200807);甲醇(色谱纯)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯;丹墨胶囊(批号为101001，101002，101003，中山大学附属第一医院提供)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Ecosil C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－甲醇－甲酸－水(10∶30∶1∶59);流速:1.0 mL/min;紫外检测波长:286 nm。

2.2 溶液制备

精密称取丹酚酸B对照品0.01235 g，置20 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1 mL含丹酚酸B 0.060021 mg)。取样品 0.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，称定质量，超声处理30 min(300 W，40 kHz)，放冷，称重，用70%甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按处方中药味比例，根据丹墨胶囊制备方法制成缺丹参的阴性对照样品，依供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图1，可见本方法具有较高的专属性，在此条件下所测得的结果能代表对照品溶液和供试品溶液的含量。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取丹酚酸B对照品0.01235 g(含量为97.2%)，精密称定，置200 mL容量瓶中，加70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液，分别吸取 2，6，10，20，30，40 μL，注入液相色谱仪，依法测定，以对照品的进样量为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=1154094X－4714.17，r=0.99999(n=6)。结果表明，丹酚酸 B 进样量在 0.120042 ～2.40084μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，记录峰面积。结果的 RSD为0.5%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一份供试品溶液，分别于制备后0，2，4，6，12，24 h进样测定。结果含量的 RSD为1.3%(n=6)，表明供试品溶液自制备后24 h内测定基本稳定。

加样回收试验:精密称取丹酚酸B对照品适量，加入70%甲醇配成质量浓度为214.83 g/L的溶液，作为标准加样贮备液。精密称取同一批已知含量(含量3.1959 mg/g)的供试品6份，每份取样为0.3 g，分别加入上述标准加样贮备液4，5，6 mL，每个平行2份，按供试品溶液制备方法制成加样回收样品溶液，取10 μL进样，计算加样回收率。结果见表1，表明该方法回收率良好。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别取3批样品，依法制备供试品溶液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，依法测定。结果批号为101001，101002，101003的样品中丹酚酸 B 平均含量分别为 3.20，3.17，3.11 mg/g，含量均符合规定。

3 讨论

取丹酚酸B对照品适量，加水制成每1 mL含60μg的溶液，用紫外－可见分光光度计于190～400 nm波长间扫描。结果在(286±2)nm波长处有最大吸收，与2010年版《中国药典(一部)》丹参项下测定波长286 nm一致，故选用286 nm为检测波长。

分别以水、50%甲醇、70%甲醇为提取溶剂处理样品，结果各溶剂的提取效果无显著差异，但70%甲醇提取的杂质较少，故选择70%甲醇进行超声提取，并补足减失的质量以满足精确性要求;同时对70%甲醇的不同提取时间进行了比较，结果不同提取时间的提取效果相差不大，考虑到不同超声仪器的差异，为了保证样品提取完全，故选用超声提取30 min。

经方法学考察，所建立的含量测定方法适用于产品中丹酚酸B的含量测定，方法操作简便，结果准确、可靠，精密度好，可用于该产品的质量控制。

[1]阳 晓，叶任高，刘冠贤，等，38年中西医结合治疗肾脏病的临床和实验研究[J].中山医科大学学报(Acad J SUMS)，2000，21(6):401－408.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅥB.

[3]游勇基，陈铭辉.高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B等3种有效成分[J].中国药学杂志，2003，38(12):950－952.

[4]杨广德，贺浪冲，李永茂.丹参有效部位指纹图谱定性和有效成分定量分析方法研究[J].药物分析杂志，2003，23(6):409－413.

[5]吕 东，刘亚蓉.复方丹参胶囊质量控制标准研究[J].西北药学杂志，2000，15(6):254－255.

[6]段晓颖.HPLC测定乳疾宁胶囊中丹酚酸B的含量[J].中国现代应用药学杂志，2009，26(4):310－312.