HPLC测定长喙乌头中草乌甲素的含量*

2011-07-26龚云麒

云南中医学院学报 2011年6期

龚云麒，张伟，朱泽

(昆明制药集团股份有限公司，云南昆明 650021)

长喙乌头为毛茛科植物长喙乌头Aconitum georgei Comber.的干燥块根，长喙乌头产自云南西北部 (中甸、丽江)，因根部芽嘴似禽类喙且较长而以“长喙乌头”为药材正名［1－2］。研究表明，长喙乌头中含有草乌甲素，而药理研究显示草乌甲素具有显著的镇痛作用和抗炎作用，不良反应低，临床上主要用于治疗风湿性关节炎 (OA)、类风湿性关节炎 (RA)、肩周炎、腰肌劳损、四肢扭伤、挫伤等症［3－5］。由于疗效确切，草乌甲素原料及其制剂被2005版、2010版《中国药典》二部收载［6－7］。随着草乌甲素制剂在临床上的广泛应用，作为草乌甲素提取用原料药材需求也不断增长，因此寻找新的植物资源，以满足草乌甲素提取已成为必须。而毛茛科是含有毒植物种类最多的科之一，并且长喙乌头作为草乌甲素的原料药材没有规范的质量控制方法，因此我们建立了长喙乌头中草乌甲素含量测定方法，该方法简便、快速，为该药用植物资源的开发利用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 药材

长喙乌头药材分别采集于丽江永胜、华坪、玉龙、宁蒗等地区和市售样品 (批号 20070928、20080114)，共10个批次，经昆明植物研究所李锡文教授鉴定为毛茛科植物长喙乌头Aconitum georgei Comber。

1.2 仪器及试剂

安捷伦1100液相色谱仪，SK06G型超声波清洗器 (上海科导超声仪器有限公司)，BP221S型分析天平 (北京赛多利斯仪器公司)。

乙腈、磷酸为色谱纯 (美国Fisher公司);其余均为分析纯，水为注射用水，草乌甲素对照品购于中国药品生物制品检定所，编号100530－200501。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Phenomenex C18(4.6×250mm);0.2%三乙胺水溶液 (用磷酸调节pH值至3.1±0.1)－乙腈 (65∶35)为流动相;流速1.0mL/min;检测波长260nm;柱温25℃;进样量:10μl，理论塔板数按草乌甲素峰计算应不低于3000。色谱图见图1、图2。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取草乌甲素对照品适量，加少量0.1mol/L盐酸溶解后，加水稀释制成每1mL含40μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理 (功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密称取草乌甲素对照品20.8mg，加0.1mol/L盐酸溶解后，加水稀释定容至100mL容量瓶中，制成储备液 (0.208mg/mL)，分别精密量取储备液 2.5，3.5，4.0，5.0，5.5，6.5，7.5mL 分别置25mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配制成20.8， 29.12， 33.28， 41.6， 45.76， 54.08，62.4μg/mL的溶液，注入高效液相色谱仪测定峰面积，以草乌甲素的浓度 (μg/mL)为横坐标，以峰面积的平均值为纵坐标，进行线性回归计算，得到线性方程:Y=17.244X－8.820，r=0.9998(n=7)。结果表明在20.8μg/mL～62.4μg/mL范围内进样测定，峰面积和浓度呈良好线性。结果见表1。