LC-MS/MS法同时检查乌蛇白芷胶囊中非法添加的醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬

2011-07-25李中娥赵培敬

中成药 2011年10期

李中娥，赵培敬

(南阳市食品药品检验所，河南南阳473061)

风湿痹症是临床医学一大顽症，其病程长，难于根治，给患者带来终身痛苦。民间出现一些中药制剂，随意夸大疗效，宣称可以治愈风湿，无不良反应，实际上却加入化学药物提高其疗效［1-12］，且添加化学药的手段也从大量添加单一成分到少量、多成分同时添加［11］，一些患者大量服用，结果造成身体上的严重损害。市售乌蛇白芷胶囊，产品说明书中称全部采用中药材加工而成，适用于关节炎、风湿性类风湿性关节炎、肩周炎、颈椎病、骨质增生等症，服用量较小，疑其加入了止痛类化学成分。结合工作经验，拟筛选醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬3种成分，经过试验，结果3种成分均检出。本实验所建立的LC-MS/MS法可快速、准确地对该制剂中是否掺有醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬3种成分作出判断。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200-6310液质联用仪，紫外检测器，BP-211D电子天平。

1.2 试药 3种对照品均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为:醋酸泼尼松(100012-200105)、双氯芬酸钠(100334-200302)、布洛芬 (100179-200303)，样品乌蛇白芷胶囊由河南某药业公司生产。乙腈(色谱纯，天津市登科化学试剂有限公司)，冰醋酸(分析纯，开封市化学试剂二厂)，乙酸铵(分析纯，上海试剂四厂)，水为纯化水。

2 实验方法

2.1 色谱条件色谱柱:SHIMADZU shim-pack VP-ODS(250 mm ×4.6 mm);以0.02 mol/L 乙酸铵(含0.1%乙酸水溶液)--乙腈(53 ∶47)为流动相;体积流量:1.0 mL/min，检测波长分段设置:0～7.7 min 为240 nm;7.7～10.0 min为280 nm;10.0 ～15.0 min 为263 nm［1］。柱温:30 ℃，进样量:10 μL 。

2.2 质谱条件电喷雾离子源(ESI)，雾化气压力40 psi，干燥气温度:350℃，体积流量:9 mL/min，扫描范围:150～500 m/z，毛细管电压:3500 V。检测方式分段设置:6.5～8.5 min目标离子400 m/z正模式一级、二级同时扫描;8.5～12.5 min目标离子296 m/z负模式一级、二级同时扫描;12.5～15.0 min目标离子206 m/z负模式一级、二级同时扫描［8，11］。

2.3 对照品溶液的制备精密称取醋酸泼尼松、双氯芬酸钠、布洛芬对照品各5 mg，分别置50 mL量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取上述3种溶液各5 mL，置同一50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4供试品溶液的制备取本品10粒的内容物，精密称定，混合均匀后称取约相当于1粒的质量，置50 mL量瓶中，加流动相适量，超声使溶解，放至室温，加流动相至刻度，摇匀，滤过;精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3 实验结果

3.1 检出限取对照品溶液，稀释成不同浓度的溶液后测定，结果醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬的HPLC最低检出限分别为 2 μg、1.8 μg 及 7 μg;MS 最低检出限均为 25 ng(S/N=3)，可满足试验要求。

3.2 对照品及样品的色谱和质谱行为按2.1项及2.2项下条件进样，对照品液相色谱图中分别在保留时间 7.08 min、8.37 min 和13.42 min 处出现色谱峰，见图1，3 个峰的塔板数及分离度均符合中国药典要求;醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬的一级、二级质谱分别见图3、图4及图5。样品的液相色谱图见图2，其峰1、峰2及峰3的质谱图见图6、图7及图8。

图1 对照品HPLC图谱

图2 供试品HPLC图谱

图3 醋酸泼尼松一级(A)、二级质谱

图4 双氯芬酸一级(A)、二级(B)质谱

图5 布洛芬一级(A)、二级(B)质谱

图6 供试品峰1一级(1)、二级(B)质谱

图7 供试品峰2一级(A)、二级(B)质谱

图8 供试品峰3一级(A)、二级(B)质谱

3.3 实验结果分析由以上图谱可以看出，样品液相色谱图中在与醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬对照品保留时间相应处均出现色谱峰，再与对照品的质谱图比较，样品中峰1、峰2及峰3的一级、二级质谱分别与醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬对照品质谱图相吻合，故此可以证实样品中含有醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬这3种成分。