迷迭香酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机理探讨

高丽萍，张文斌，景玉宏，郑荣梁

（1.兰州大学 基础医学院，甘肃 兰州 730000；2.上海交通大学 药学院，上海 200240；3.兰州大学 生命科学学院，甘肃 兰州 730000）

迷迭香酸是有一定生理活性的酚酸类化合物，为丹参素与咖啡酸的缩合物。迷迭香酸是许多唇形科植物如迷迭香、罗勒、柠檬香蜂草和留兰香的主要成分。其分子结构中有四个酚羟基，具有多种生物活性，包括抗氧化［1］，抗过敏［2］、抗炎和抗病毒作用［3］，对肝损伤和肺损伤也具有保护作用［4，5］。我们研究发现迷迭香酸可以抑制H2O2诱导的星形胶质细胞的凋亡［6］，Iuvone等［7］研究表明迷迭香酸可以保护PC12细胞免受β－淀粉样蛋白诱导的神经毒性作用，这些研究表明迷迭香酸对神经系统有一定保护作用。因此，我们利用线栓法制作了脑缺血／再灌注动物模型，研究迷迭香酸对大鼠脑缺血／再灌注损伤的保护作用及其机理。

1 材料与方法

1.1 试验药物与试剂

迷迭香酸购自Sigma公司。2，3，5－三苯基氯化四氮唑（TTC）为中国医药上海化学试剂公司产品。SOD、GSH－Px和MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。

1.2 动物

雄性Wistar大鼠，体重200～280g，由兰州大学医学实验动物中心提供。

1.3 仪器

病理图象分析系统（四川大学产品），UV29100紫外可见分光光度仪（北京第二光学仪器厂产品）。

1.4 方法

1.4.1 分组及给药

大鼠35只随机分为5组，腹腔注射给药3天后用线栓法造模［8］，缺血4h后再灌注2h，然后观察各项指标。

1.4.2 行为学评分［9］

评分标准：①提鼠尾，左前肢内收，左肩内旋者1～4分。②将大鼠置光滑平面，推右肩向左侧移动，阻力降低者1～3分。③左前肢肌张力降低1～3分。共10分。分数越高，动物的行为障碍越显著。

1.4.3 脑梗塞体积的测定

大鼠股动脉取血然后迅速断头处死，连续冠状切片，迅速放入2%TTC溶液（37℃）中染色30min，缺血区呈苍白色，正常区为玫瑰色，采用病理图象分析系统计算脑梗塞体积所占百分比。

1.4.4 MDA含量测定

大鼠股动脉取血制备血清，测定血清MDA含量。

1.4.5 SOD和 GSH－Px的活力测定

采用SOD和GSH－Px试剂盒测定血清SOD和GSHPx的活力。

1.4.6 统计学处理

2 结果

2.1 迷迭香酸对大鼠行为学的影响

除假手术组未出现神经缺损的症状外，其余各组出现不同程度的神经缺损的症状。表现为左前肢内收；躯体向病灶对侧倾斜，向左侧推阻力下降；部分大鼠活动时有向瘫痪侧打转现象。与假手术组比较，模型组出现严重的神经缺损症状。与模型组比较，迷迭香酸10、50mg／kg及葛根素50mg／kg均能显著改善大鼠神经缺损的症状（P＜0.01）。在剂量相同时，迷迭香酸的作用与葛根素相当（P＞0.05）。结果见表1。

表1 迷迭香酸对脑缺血再灌注大鼠行为学和脑梗塞体积的影响（n＝7，）

表1 迷迭香酸对脑缺血再灌注大鼠行为学和脑梗塞体积的影响（n＝7，）

注：与模型组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别 剂量（mg／kg） 行为学评分 脑梗塞体积（%）假手术对照组 —— 0＊＊ 0＊＊模型组 —— 7.14±0.83 22.92±1.92葛根素 50 5.5±0.5＊＊ 17.77±3.90＊迷迭香酸 10 4.86±0.64＊＊ 18.78±2.43＊＊迷迭香酸 50 4.57±0.73＊＊ 17.74±3.50＊＊

2.2 迷迭香酸对大鼠脑梗塞体积的影响

与假手术组比较，模型组出现严重的脑梗塞，脑梗塞体积为（22.92±1.92）%。与模型组比较，迷迭香酸10和50mg／kg对脑梗塞体积均有显著的降低作用，分别使梗塞体积降低到（18.78±2.43）%和（17.77±3.90）%。在剂量相同时，迷迭香酸的作用与葛根素相当（P＞0.05）。结果见表1。

2.3 迷迭香酸对大鼠血清MDA含量的影响

模型组与假手术组比较，血清MDA含量显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，葛根素50mg／kg使 MDA含量降低39.69%，迷迭香酸10和50mg／kg分别使MDA含量减低42.05%和45.52%（P＜0.01）。结果见表2。

表2 迷迭香酸对脑缺血再灌注大鼠血清MDA含量、SOD和GSH－Px活力的影响（n＝7，）

表2 迷迭香酸对脑缺血再灌注大鼠血清MDA含量、SOD和GSH－Px活力的影响（n＝7，）

注：与模型组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别 剂量（mg／kg）MDA（nmol／mL）SOD（NU／mL）GSH－Px（活力单位）假手术对照组—— 6.24±1.24＊＊ 157.03±8.26＊393.86±12.87＊＊模型组 —— 14.41±2.77141.02±14.34358.79±17.95葛根素 508.69±1.59＊＊ 164.04±5.76＊＊385.37±9.56＊＊迷迭香酸 108.35±2.18＊＊ 157.97±5.98＊ 372.93±4.71迷迭香酸 507.85±1.56＊＊ 161.47±4.21＊＊381.70±12.53＊

2.4 迷迭香酸对大鼠血清SOD和GSH－Px活力的影响

模型组与假手术组比较，血清SOD活性显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，葛根素50mg／kg使血清SOD活性增加1.16倍，迷迭香酸10和50mg／kg分别使血清SOD活性增加1.12和1.15倍（P＜0.01）。结果见表2。

模型组与假手术组比较，血清GSH－Px活性显著降低（P＜0.01），与模型组比较，葛根素50mg／kg使血清 GSHPx活性增加1.07倍，迷迭香酸50mg／kg使血清GSH－Px活性增加1.06倍（P＜0.01）。结果见表2。

3 讨论

大脑中动脉（MCA）是人群脑缺血的多发部位，MCA闭塞模型被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型，而插线法这种模型无须开颅，MCA闭塞效果较理想，是目前能进行再灌流损伤研究的理想动物模型。本实验采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，观察迷迭香酸对大鼠脑缺血的影响。结果显示迷迭香酸可减少大脑中动脉阻断所致的脑梗塞体积，改善脑缺血大鼠的行为障碍。研究结果表明迷迭香酸对脑缺血性损伤具有明显的保护作用。

涉及再灌注损伤机制的因素有许多，其中氧自由基的生成在其中起重要作用。一般认为，脑缺血时自由基的损害以脑缺血后再灌注为甚，可能是不完全性脑缺血残留的滴状供血，提供微量氧气，使脂质过氧化得以维持进行，加重损害。脂质过氧化的终产物（MDA）有很强的毒性和反应性，它们可使脂质过氧化在细胞膜系统蔓延导致细胞功能的破坏，所以测量脂质过氧化的终产物被认为是氧自由基损伤的重要指标。在正常状态下，机体ROS的产生和清除间存在着动态的平衡，产生的自由基可被SOD、GSH－Px和过氧化氢酶等清除，测定抗氧化酶类的活性可以间接反应体内清除自由基的能力变化。脑缺血再灌注时，ROS的生成过多，超过了抗氧化酶对它的清除，就会导致氧化应激和细胞损伤。脑缺血大鼠再灌注后，MDA含量明显升高，SOD和GSH－Px显著降低，表明脑缺血再灌注期脂质过氧化增加，机体抗氧化能力降低。迷迭香酸能显著降低MDA含量，提高SOD和GSH－Px的活性，表明迷迭香酸对脑损伤的保护作用与其抗氧化作用有关。

［1］ZHENG W，WANG SY.Antioxidant activity and phenolic compounds in selected herbs［J］.J.Agric.Food Chem，2001，49：5165－5170.

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