苍术中β－桉叶油醇和茅术醇的分离制备研究

2011-07-25甄毕贤

亚太传统医药 2011年12期

甄毕贤，才谦

（辽宁中医药大学，辽宁大连 116600）

中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北苍术Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根茎。始载于《神农本草经》，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目的功效，用于湿阻中焦、脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气痿躄、风湿痹痛、风寒感冒、夜盲、眼目昏涩等症［1］。目前临床上多采用苍术的麸炒品进行应用，但苍术炮制机理并不十分明确。本课题为研究苍术麸炒后挥发性成分的变化，而对挥发油中含量很高且活性较好［2－4］的两个成分茅术醇和β－桉叶油醇进行分离，为炮制机理研究提供对照品。β－桉叶油醇和茅术醇两种成分是一对异构体，二者双键的位置不同，采用普通的硅胶无法将二者分开，本课题采用硅胶－硝酸银硅胶－凝胶相结合的方法，分离得到纯度符合要求的对照品，且方法较简单。

1 仪器、试剂与材料

Bruker－600型核磁共振仪（瑞士Bruker公司）；Sephadex LH－20（瑞士pharmacia公司）；柱色谱硅胶（100～200目，青岛海洋化工厂）；薄层色谱硅胶（HF254，青岛海洋化工厂）。石油醚（60℃～90℃）、环己烷、乙酸乙酯、甲醇、氯仿等溶剂均为天津科密欧化学试剂公司分析纯产品。Ag－NO3（AR，沈阳市试剂二厂）；实验用药材采自湖北英山，经辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.的干燥根茎。25%硝酸银硅胶的制备方法：称取600g柱层析用硅胶（100～200目），将150g AgNO3溶于水中，加入硅胶搅拌均匀，减压回收溶剂，即得。

2 实验与结果

2.1 提取和分离

取苍术干燥根茎5kg，粉碎成粗粉，浸泡后置渗漉桶中，，加80%乙醇进行渗漉，合并渗漉液，减压回收乙醇，浓缩得浓缩液。将浓缩液加二倍量的水稀释，按药液与石油醚（60℃～90℃）的体积比1：1用石油醚（60℃～90℃）进行萃取，萃取3次，合并石油醚萃取液。回收石油醚，并浓缩干燥，制成浸膏，称重225g。

取石油醚层干膏225g进行硅胶柱色谱分离，以不同比例的石油醚－乙酸乙酯梯度洗脱，体积比（100：1－1：1），每500mL为一流份，薄层检查合并相同组分，将含有茅术醇，β－桉叶油醇的流份（石油醚－乙酸乙酯＝70：1）合为Fr.A，用25%AgNO3硅胶柱，以环己烷－乙酸乙酯系统梯度洗脱（体积比100：1－50：1）每400mL为一流份，薄层检查合并相同组分，将含有茅术醇的流份（环己烷－乙酸乙酯＝75：1）合为Fr.a，含有β－桉叶油醇的流份（环己烷－乙酸乙酯＝75：1）合为Fr.b，Fr.a和b分别用Sephadex LH－20凝胶柱纯化，氯仿重结晶，得到化合物Ⅰ、Ⅱ。图1为化合物Ⅰ、Ⅱ的提取、分离、纯化工艺流程图。

图1 化合物Ⅰ、Ⅱ的提取、分离、纯化工艺流程

2.2 结构鉴定

化合物 Ⅰ：白色针晶，易溶于石油醚、氯仿、甲醇等。1HNMR（600MHz，CDCl3）δppm：5.32（1H，m，C（7）－H），1.68（3H，d，C（6）－CH3），1.20（6H，s，C（11）－（CH3）2），0.92（3H，d，C（10）－CH3）。13C－NMR（600MHz，CDCl3）δppm：140.02（C－6），121.65（C－7），71.95（C－11），51.38，48.71，36.69，35.67，33.23，28.38，27.97，27.91，27.65，24.16，19.86，16.15。其1H－NMR，13C－NMR数据与文献［5］报道的茅术醇数据一致，所以鉴定为茅术醇。其结构如图2。

图2 茅术醇

化合物 Ⅱ：白色针晶，易溶于石油醚、氯仿、甲醇等。1H－NMR（600MHz，CDCl3）δppm：0.70（3H，s，C（14）－CH3），1.20（6H，s，C（9）－（CH3）2），4.45（1H，d，C－15），4.71（1H，m，C－15）。13C－NMR（600MHz，CDCl）δppm：151.133（C－15），105.31（C－4），72.87（C－11），49.79（C－5），49.44（C－7），41.84（C－9），41.12（C－1），36.89（C－3），35.88（C－10），27.17（C－12），27.12（C－13），25.02（C－6），22.37（C－8），16.29（C－14）。其1H－NMR，13C－NMR数据与文献［5］报道的β－桉叶油醇数据一致，所以鉴定为β－桉叶油醇。其结构如图3。