高效液相色谱法测定盐酸萘替芬搽剂中盐酸萘替芬的含量

王 璐

盐酸萘替芬搽剂主要成分为盐酸萘替芬（10 mg/ml）、甘油、95%的乙醇等。盐酸萘替芬为苯甲胺衍生物，其作用机制为选择性地抑制真菌角鲨烯环氧化酶，干扰真菌细胞壁的麦角固醇的生物合成，影响真菌的脂质代谢，使真菌细胞损伤或死亡而起到杀菌和抑菌作用。

盐酸萘替芬搽剂经过临床使用观察，杀菌效果好，不良反应小，使用方便，疗效显著。本文介绍笔者采用高效液相色谱法测定盐酸萘替芬搽剂中的盐酸萘替芬含量的方法。

1 仪器与试药

Agilent1260系列高效液相色谱仪（G1314F VWD、G1316A TCC、G1329B ALS 、G1311C Quat Pump VL）；Agilent色谱工作站；盐酸萘替芬对照品（中国药品生物制品检验所，批号：100823-200501），甲醇为色谱纯。其他试剂为分析纯。盐酸萘替芬搽剂由河南科技大学第一附属医院制剂室提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：醋酸铵溶液（取醋酸铵1.154 g，加水300 ml溶解，加冰醋酸0.2 ml，摇匀）-甲醇（20∶80），流速：1.0 ml/min，检测波长：254 nm 柱温：35 ℃，进样量 10 μl。

2.2 线性关系

2.2.1 对照品储备液的制备 精密称取盐酸萘替芬对照品102.82 mg，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 标准曲线的绘制 标准曲线的绘制：精密吸取对照品储备液 1、2、3、4、5 ml，分别置 50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。在2.1色谱条件下测定，以峰面积A与浓度C绘制标准曲线，得回归方程：A=19.05 8C+3.465 7，r=0.999 9，本品浓度在20.6～102.8 μg/ml的范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 取2.2.1项下对照品储备液取2 ml置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 精密量取本品2 ml（约相当于盐酸萘替芬20 mg），置50 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得供试品溶液。

2.3.3 阴性对照溶液的制备 取不含盐酸萘替芬的样品溶液照2.3.2供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.4 精密度试验 取2.3.2项下对照品溶液10 μl注入液相色谱仪，重复进样5次，以峰面积考察，结果平均峰面积 1.570×103，RSD=0.47%（n=5）。

2.5 稳定性试验 取2.3.2项下供试品溶液置棕色容量瓶中，在自然光下，分别于 0、2、6、10、12、24 h测定，记录主峰面积，考察溶液的稳定性，平均峰面积1.534×103RSD=0.62%。结果表明24 h内溶液稳定性良好。

2.6 重复性试验 取同一批样品5份，按照2.3.2及2.9项下样品测定方法操作，分别测定，结果盐酸萘替芬含量为 9.97 mg/ml，RSD=0.59%（n=5）。

2.7 加样回收率试验 采用加样回收法，加样回收率：精密量取已知含量的样品1 ml（约相当于盐酸萘替芬10 mg），共6份，分别置50 ml量瓶中，分别加入对照品储备液8、10、12 ml，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取2 ml，置10 ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按2.9项下样品测定方法测定，结果见表1。

表1 回收率测定结果（n=3）

2.8 空白干扰试验 分别取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液，在2.1色谱条件下进行测试，在样品谱图中，与对照品谱图相应的波长（286 nm）有吸收峰，而阴性对照溶液在此波长无吸收干扰。见图1。

2.9 样品测定 按2.3.1制备对照品溶液，按2.3.2制备供试品溶液，在2.1色谱条件下测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其含量。结果见表2。

图1 HPLC盐酸萘替芬含量测定色谱图

表2 盐酸萘替芬搽剂中的盐酸萘替芬含量测定结果（n=3）

3 讨 论

盐酸萘替芬对照品在200～400 nm波长内扫描，结果在224、254 nm波长处有两个强吸收峰。在282、292 nm波长处有两个弱吸收峰。因224 nm处盐酸萘替芬的吸收系数太大，故选择254 nm作为测定波长。对盐酸萘替芬主成分峰的纯度分析，结果表明254 nm为盐酸萘替芬的单一峰。

曾经以醋酸铵溶液 （取醋酸铵1.154 g，加水300 ml溶解，加冰醋酸 0.2 ml，摇匀）-甲醇（30∶70）为流动相，实验中发现盐酸萘替芬的保留时间在25 min且峰形较宽，所以改变了流动相的比例，将醋酸铵溶液-甲醇 （30∶70）改为醋酸铵溶液-甲醇（20∶80）盐酸萘替芬在 13.8 min出峰，峰形对称。

盐酸萘替芬含量测定有非水滴定法[1]，紫外分光光度法[2]，高效液相色谱法[3-6]，高效液相色谱法是现代分离测定的重要手段，鉴于其简便、快速、灵敏、准确，在医药卫生、食品、环保等各个领域得到广泛的应用。笔者采用高效液相色谱法测定盐酸萘替芬搽剂中盐酸萘替芬的含量，测定准确，重现性好。适合于医院制剂室控制药品质量。

[1]于华生，李炳秀，沈 莉.非水滴定法测定盐酸萘替芬含量[J].解放军药学学报，1999，15(4)：55-56.

[2]黄春明，张 纯，李淑琴，等.双波长分光光度法测定复方萘替芬霜的含量[J].中国现代应用药学杂志，1999，16(2)：48-50.

[3]中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.775.

[4]孙惠芬，马瑞蓉，于魁一.盐酸萘替芬溶液剂的含量测定[J].中国医院药学杂志，2000，20(12)：734-736.

[5]肖大伟，林爱友，赵立新，等.血浆中萘替芬的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，1997，28(10)：458-459.

[6]马瑞蓉，孙惠芬，于魁一.盐酸萘替芬的含量测定[J].药物分析杂志，2001，21（2）：136-137.