强直性脊柱炎患者血清Dkk-1的检测及其临床意义

隋 立 张 凯 王 毅

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是以中轴关节慢性炎症为主的全身性自身免疫性疾病。随着病情的发展，软骨组织逐渐被骨组织替代，导致关节强直和功能丧失，是AS的重要发病机制[1-2]。Wnt通路在正常的骨平衡中十分重要，在整个成骨细胞分化过程中扮演着重要的角色。β-连环蛋白是Wnt通路的正向调节因素，它的激活可导致骨密度增加[3]。Dkk-1是Wnt通路的抑制因子，是β-连环蛋白信号传导拮抗剂，可阻断β-连环蛋白的稳定表达，抑制骨形成[4]。本研究拟通过检测AS患者血清Dkk-1水平，探讨其在AS发病机制中的作用，以及抗肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α类制剂对AS患者血清Dkk-1水平的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院风湿科2010年1月—2010年9月确诊的AS患者29例，其中未使用任何抗TNF-α类制剂治疗者14例，男7例，女7例，平均年龄（37.2±11.9）岁，为AS未用药组；使用该剂治疗3个月以上者15例，男8例，女7例，平均年龄（41.1±13.7）岁，为AS用药组；类风湿性关节炎（rheuma⁃toid arthritis，RA）患者8例，均未使用任何生物制剂治疗，男3例，女5例，平均年龄（43.6±14.2）岁，为RA组。20例健康体检者，男10例，女10例，平均年龄（35.1±10.9）岁，为健康对照组。AS患者均符合1984年修订的纽约标准[5]，RA患者均符合美国风湿病学会1987年修订的标准[6]。AS患者的病情活跃程度采用AS疾病活动指数（Bath AS Disease Activity Index,BASDAI）进行评估[7]，RA患者的病情活跃程度采用疾病活动评分（Disease Activity Score in 28 joints，DAS28）进行评估[8]。AS及RA患者均处于疾病活跃期，AS患者BASDAI≥4，RA患者DAS28≥3.2。4组间年龄（F=1.220）、性别（χ2=0.549）差异均无统计学意义（均P>0.05）。

1.2 实验室指标的测定

1.2.1 血沉（ESR）和C反应蛋白（CRP）的测定 ESR测定采用魏氏法；CRP水平的测定采用免疫比浊法（贝克曼库尔特Immage特种蛋白分析仪，美国）。

1.2.2 Dkk-1的测定 血清Dkk-1水平采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定，试剂购自美国R&D公司。严格按照试剂盒提供的操作方法和步骤完成。

1.3 统计学处理 采用SPSS 11.5统计学软件，计数资料的比较采用χ2检验，计量资料以均数±标准差±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD法，相关性分析采用Pearson相关。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AS未用药组、RA组及健康对照组的实验室指标结果比较 AS未用药组Dkk-1水平低于RA组及健康对照组（均P<0.01）。AS未用药组和RA组的ESR和CRP均高于健康对照组（均P<0.01），但AS未用药组与RA患者之间差异无统计学意义（均P>0.05），见表1。

表1 AS未用药组、RA组及正常对照组的ESR、CRP、Dkk-1结果比较 ±s）

表1 AS未用药组、RA组及正常对照组的ESR、CRP、Dkk-1结果比较 ±s）

**P<0.01

组别AS未用药组（1）RA组（2）健康对照组（3）F P（1）∶（2）（1）∶（3）（2）∶（3）n 14 8 20 ESR（mm/1 h）36.79±28.18 44.88±20.69 6.70±3.20 16.971**0.333<0.001<0.001 CRP（mg/L）28.60±26.67 30.66±19.76 3.34±1.99 11.497**0.792<0.001 0.001 Dkk-1（μg/L）3.56±0.83 6.45±0.86 6.27±1.65 21.093**<0.001<0.001 0.740

2.2 AS未用药组与用药组各临床及实验室指标的比较结果 AS用药组血清Dkk-1水平高于AS未用药组（P<0.01）。2组BASDAI、ESR及CRP的比较差异均无统计学意义，见表2。

表2 AS未用药组与AS用药组的临床资料及Dkk-1水平的比较 ±s）

表2 AS未用药组与AS用药组的临床资料及Dkk-1水平的比较 ±s）

**P<0.01

组别AS未用药组AS用药组t n 14 15 BASDAI 5.43±0.70 5.08±0.81 1.211 ESR（mm/1 h）36.79±28.18 36.07±18.62 0.082 CRP（mg/L）28.60±26.67 17.91±15.87 1.322 Dkk-1（μg/L）3.56±0.83 9.27±5.60 3.771**

2.3 AS未用药组与用药组Dkk-1水平与其他临床资料的相关性分析 AS未用药组及用药组血清Dkk-1水平与BASDAI、ESR及CRP均未见相关性，见表3。

表3 AS患者血清Dkk-1水平与其他临床资料的相关性分析

3 讨论

多项研究表明Dkk-1对成骨细胞活性具有重要的抑制作用。Diarra等[9]的研究发现Dkk-1可在关节炎和关节损坏的动物模型中发挥作用。Uder⁃hardt等[10]近期发现在关节炎的动物模型中阻断Dkk-1可导致破骨细胞数量减少，骨吸收下降，骶髂关节出现融合。考虑到Dkk-1在动物模型中抑制成骨基因的作用，探讨其在典型的骨形成疾病AS中的作用十分重要，但目前国内外相关研究不多。本研究结果显示，在相同的疾病状态下，未使用任何抗TNF-α类制剂治疗AS患者血清Dkk-1水平显著低于RA患者和正常对照组，表明AS患者体内骨形成抑制分子水平降低，这可能是导致AS患者骨形成活跃的机制之一。AS患者与RA患者ESR、CRP结果比较差异无统计学意义，血清Dkk-1的检测可为AS与RA的鉴别诊断提供依据。同时AS患者不论是否接受抗TNF-α类制剂治疗，其血清Dkk-1水平与BASDAI、炎症指标（ESR、CRP）均无显著相关性，表明血清Dkk-1的水平与患者炎症活跃程度无关。

在评估抗TNF-α类制剂对AS患者Dkk-1水平的影响的对比分析中，本研究显示AS用药组血清Dkk-1水平高于AS未用药组，2组间BASDAI、ESR和CRP的比较差异均无统计学意义，表明应用抗TNF-α类制剂可诱导AS患者Dkk-1的表达。目前，抗TNF-α类制剂在AS病理过程中的作用还不十分清楚。有国外学者提出“分子闸假说”，即TNF-α是新骨形成的分子闸[11-12]。应用TNF-α的药理作用抑制炎症时，Wnt信号途径及其他生长因子，如骨形态发生蛋白（BMP）-2，会出现短暂的活跃。用药后血清Dkk-1水平的增加被认为是为了削弱Wnt信号途径的一种潜在的平衡机制，这可能是抗TNF-α类制剂治疗AS的机制之一。

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