错配修复基因hMLH1在胃癌的表达及与胃癌临床进展的关系＊

宁志丰，刘复兴，武 倩

(1.咸宁学院基础医学院人体解剖学教研室，湖北 咸宁 437100;2.咸宁学院基础医学院病理学教研室;3.咸宁学院护理学院)

胃癌是一种在全球发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤，对于其发病机制仍然不清楚。本研究运用免疫组化的方法试图阐明主要的错配修复基因hMLH1在胃癌的表达、与胃癌临床病理参数及与患者临床进展间的关系。

1 材料与方法

1.1 标本

收集咸宁市中心医院普外科于2000年1月至2005年12月的胃癌石蜡标本66例。其中男性39例，女性27例;年龄32～77岁，平均61.6±12.3岁;高中分化癌39例，低分化癌27例;无淋巴结转移者35例，有淋巴结转移者31例。

1.2 胃癌组织中hMLH1蛋白的表达

将石蜡组织块切成4μm厚切片。采用免疫组化SP法进行染色，具体方法按说明书(兔抗人单克隆抗体购自Santa Cruz公司，1∶100稀释;SP试剂盒购自武汉博士德生物工程公司)进行。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，选取已知阳性的切片作为阳性对照。

1.3 结果判定

胃黏膜细胞核或胞浆内出现黄色颗粒者视为阳性细胞，计数5个高倍视野或500个细胞。按胞核或胞浆内染色强度打分:0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。再按阳性细胞所占的百分比打分:0分:阴性，1分:0%＜阳性细胞≤10%，2分:10%＜阳性细胞≤50%，3分:50%＜阳性细胞≤75%，4分:75%＜阳性细胞≤100%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积＞3分者为强阳性。

1.4 随访

采用电话随访、登门拜访或写信的形式进行术后无瘤生存期、5年生存率的调查。

1.5 统计学方法

将所得结果及临床资料建立数据库，采用SPSS 13.0软件进行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 hMLH1蛋白表达情况及与临床病理特征间的关系

66例中阳性表达的有31例，占46.9%;39例高中分化癌中阳性表达的有24例，占36.9%;27例低分化癌中阳性表达的有7例，占10.0%;差异有统计学意义，P＜0.05。无淋巴结转移的35例中阳性表达的有22例，占33.3%;有淋巴结转移的31例中阳性表达的有9例，占13.6%;差异有统计学意义，P＜0.05。

2.2 hMLH1蛋白表达情况与胃癌病人预后的关系

31例阳性表达的病人术后5年内无瘤生存期平均为27.2个月，5年生存率为58.6%，35例阴性表达的病人术后5年内无瘤生存期平均为10.6个月，5年生存率为29.7%，组间比较差异有显著性，P＜0.05，见表 1。

表1 hMLH1蛋白表达情况与胃癌病人预后的关系

3 讨论

DNA错配修复系统的主要功能是修复细胞DNA复制过程中出现的碱基错配，从而抑制癌基因、抑癌基因、凋亡基因等基因的突变，维持基因组的稳定性［1］;而肿瘤的形成与组织细胞不断累积基因变异，与原癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡基因的异常活化有关，因此，错配修复系统的异常与肿瘤的形成关系密切。癌干细胞被认为是肿瘤产生、复发、转移的根源，Liang Y 等［2］提出基因组的不稳定可以诱导癌干细胞样细胞的产生。而错配修复系统的缺陷可以诱导基因组的不稳定，这似乎提示错配修复系统的缺陷参与癌干细胞的形成，是肿瘤发生的早期事件。

目前在DNA错配修复系统已发现9个基因，其中 hMSH2、hMSH6、hMSH5、hMSH4、hMSH3 为细菌 MutS 同源物;hMLH1、hPMS1、hPMS2、hMLH3为细菌MutL同源物。hMLH1是这一系统中的重要成员之一，位于染色体3p21.3-23，基因组全长约58Kb，含 19 个外显子［3］。温爽等［4］研究表明hMLH1蛋白在细胞核中出现高表达可能是胃黏膜上皮细胞癌变的组织学预警标志。李冬霞等［5］指出hMLH1蛋白表达缺失与胃癌的发生有关，可能是胃癌发生的早期事件。邹叶青等［6］发现hMLH1基因甲基化和MSI(微卫星不稳定)密切相关，它是导致胃癌组织出现MSI的重要因素，MSI在胃癌发生、发展过程中发挥一定作用。郭旭等［7］指出hMLH表达水平与结直肠癌的发生、组织分化、淋巴转移及临床分期有关，与胃癌的发生和淋巴结转移有关。我们的研究亦表明胃癌组织中hMLH1的表达状况与其分化状态和淋巴结有无转移有关，hMLH1表达越高，胃癌分化水平越高，淋巴结转移的越少。目前还缺乏hMLH1在胃癌的表达与患者生存状况的资料。我们的初步研究结果表明hMLH1表达越高，无瘤生存期越长，5年生存率越高，这似乎表明hMLH1扮演着抑癌基因的角色。

综上所述，hMLH1在胃癌的表达与其分化水平、淋巴结转移状况有关，hMLH1的表达缺失是预后不良的标志。

［1］Hsieh P.Molecular mechanisms of DNA mismatch repair［J］.Mutat Res，2001，486(2):71

［2］Liang Y，Zhong Z，Huang Y，et al.Stem-like cancer cells are inducible by increasing genomic instability in cancer cells［J］.J Biol Chem，2010，285(7):4931

［3］Peltomaki P.DNA mismatch repair and cancer［J］.Mutat Res，2001，488(1):77

［4］温爽，刘天卿，李 梅，等.胃黏膜上皮错配修复基因hMLH1表达在胃癌诊断中的临床意义［J］.大连医科大学学报，2007，29(6):539

［5］李冬霞，魏林郁.胃癌组织中hMLH1基因的表达及意义［J］.现代医药卫生，2008，24(l7):2567

［6］邹叶青，张善忠，刘 川，等.胃癌及癌前病变组织中hMLH1基因启动子甲基化与MSI的关系［J］.江西医学院学报，2008，48(3):16

［7］郭旭，于登峰，王艺.胃癌、结直肠癌组织中hMLH的表达及其临床意义［J］.结直肠肛门外科，2007，13(3):143