VEGF-A和VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及意义

崔玉梅 宋飞翔 张雅洁

（1 北京市第六医院急诊，北京100700；2 北京军区总医院肿瘤诊疗中心，北京100700；3 广州医学院肿瘤研究中心，广东 广州 510180）

肿瘤已成为威胁人类健康的主要疾病之一。近30年来，肿瘤研究领域取得了重大进展，Folkman[1]于1971年提出肿瘤血管新生（Angiogenesis）的概念，以新生血管为肿瘤治疗的“靶点”已成为研究的热点。目前已知有数十种促血管生成及抑制血管生成的因子，其中VEGF-A被认为可能是最强的促血管生成因子[2]，其在肿瘤发生发展中的作用主要表现为促进血管新生。VEGF-C是VEGF家族中最强的促淋巴管生成因子。本研究旨在探讨VEGF-A和VEGF-C在人类乳腺癌组织中的表达及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集广州医学院第一附属医院1999年1月至2001年1月经手术切除，病理诊断为乳腺癌者98例，其中包括42例转移淋巴结石蜡切片（患者术前均未接受化疗和放疗）。患者年龄27～81岁，平均55.8岁。病史3个月～10年。根据1989年我国乳腺癌诊断标准[3]进行分类，98例乳腺癌中，原位癌4例，浸润性导管癌94例，其中伴淋巴结转移者42例，无转移者56例。

1.2 方法

主要实验仪器：正位相差照相显微镜（Leica公司），光学显微镜（日本Olympus公司），微波炉（日本National公司），电子天平（SARTOIUSAG公司），微量移液器（德国BRAND公司），pH计（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。主要试剂：磷酸盐缓冲液（PBS）、柠檬酸盐缓冲液（抗原修复液）、0.1%胰酶消化液。采用SP（链霉菌抗生物素-过氧化物酶）法，按试剂盒说明书进行。对照设置：用PBS代替一抗作为阴性对照，选VEGF-A、C高表达乳腺癌为阳性对照。

1.3 免疫组织化学结果判断

①VEGF-A、VEGF-C染色乳腺癌细胞、间质脉管内皮细胞胞浆呈现棕褐色为阳性。PCNA以癌细胞及内皮细胞核呈现棕褐色为阳性。②低倍镜下分别选取VEGF-A（+）癌细胞、VEGF-C（+）或PCNA（+）癌细胞最密集区。③乳腺癌细胞VEGF-A、VEGF-C表达强度，按癌细胞免疫组织化学染色着色深浅打分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。按阳性细胞数所占百分比打分：0分为阴性，1分为阳性细胞百分比＜10%，2分阳性细胞百分比11%～50%，3分阳性细胞百分比＞51%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积：≥3分为（+），即0～2分为（-），3～4分为（+），5～7分为（++），8～9分为（+++）。乳腺癌细胞PCNA表达分级按文献报道方法进行分级。

1.4 统计学方法

采用SPSS11.0统计分析软件进行统计分析。两个独立样本均数比较采用t检验；两个变量相关性分析采用双变量相关分析；多个样本之间的两两比较采用单因素方差分析。

2 结 果

2.1 VEGF-A、VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及其分布特点

VEGF-A阳性细胞为弥漫性细胞浆着色。98例乳腺癌组织中，VEGF-A染色阳性84例，阳性率为85.7%。VEGF-C阳性细胞为弥漫性细胞浆着色。VEGF-C染色阳性率为90.8%（89/98例）。

2.2 VEGF-A、VEGF-C蛋白表达与肿瘤细胞增殖和淋巴结转移的关系

VEGF-A蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移的关系：VEGF-A阳性率在淋巴结转移组（100%）明显高于未转移组（75%），二者之间存在统计学差异（P＜0.05）。由表1可见，随着VEGF-A表达的增强，PCNA的高表达增多。采用RXC的等级相关α2检验，差异有统计学意义（P＜0.05，见表1）。VEGF-C阳性率在淋巴结转移组（98%）明显高于无淋巴结转移组（86%）（P＜0.05），见表1。

2.3 VEGF-C表达与PCNA表达的关系

随着VEGF-C表达的增强，PCNA表达也增强。采用RXC的等级相关α2检验，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨 论

本研究发现，VEGF-A、VEGF-C在乳腺癌组织中呈现高表达，阳性率分别为85.7%（84/98）和90.8%（89/98），阳性细胞主要是肿瘤细胞和新生血管内皮细胞，说明VEGF-A、VEGF-C蛋白主要由肿瘤细胞通过旁分泌作用于既存血管诱导血管新生而发挥作用，新生血管可以通过自分泌作用进一步增强血管新生的能力。本研究中可见癌旁组织乳腺部分导管上皮细胞也呈VEGF-A、VEGF-C阳性表达，提示VEGF-A和VEGF-C在乳腺导管上皮细胞增殖过程中可能起一定作用，二者表达增强可能是乳腺癌发生的早期事件。

表1 VEGF-A、VEGF-C与淋巴结转移的关系

98例乳腺癌中，14例VEGF-A阴性，9例VEGF-C阴性，它们的微血管数量与阳性例标本相比明显减少，无1例发生转移。推测VEGF-A、VEGF-C在肿瘤血管生成和肿瘤转移中有重要作用，同时也提示肿瘤血管形成还受其他生长因子的调控。肿瘤细胞增殖活性检测表明，随着乳腺癌细胞VEGF-A及VEGF-C表达强度增强，肿瘤细胞的增殖活性逐渐增强，与Kushilinskii等[4]报道相同，他们对乳腺癌标本免疫组织化学检测中，发现VEGF-A表达水平与肿瘤细胞增殖密切相关。刘芳等[5]研究表明VEGF-C可通过与受体结合促进乳腺癌细胞增殖。

本研究结果发现，98例乳腺癌组织中淋巴结转移组VEGF-C的表达明显高于未转移组，VEGF-C与淋巴结转移密切相关。在对多种肿瘤组织的研究中发现，VEGF-C表达与淋巴结转移呈正相关[6]。VEGF-C促进肿瘤细胞的增殖也有利于肿瘤细胞的转移。Makoto等[7]研究表明VEGF-C在淋巴结转移中起一定作用，但不是必需的。

综上所述，VEGF-A、VEGF-C可促进MCF-7细胞的增殖，阻断二者的表达，在一定程度上可抑制MCF-7细胞的增殖。VEGF-A在乳腺癌血管生成中起重要促进作用。VEGF-C与乳腺癌淋巴结转移密切相关。

[1] Folkman J.Tumor angiogenesis:therapeutic implications[J].N Engl J Med,1971,285(21):1182-1186.

[2] Aprelikova O,Pajusola K,Partanen J,et al.FLT-4,a novel class receptor tyrosine kinase in chromosome 5q33-qter[J].Cancer Reserch,1992,52(3):746-748.

[3] 许中良.乳腺病理学[M].上海:上海医科大学出版社,1999:359.

[4] Kushlinskii NE,Orinovskii MB,Gurevich LE,et al.Expression of biomolecular markers (Ki-67,PCNA,Bcl-2,BAX,BclX,VEGF) in breast tumors[J].Bull Exp Biol Med,2004,137(2):182-185.

[5] 刘芳,张雅洁.VEGF-C及其受体Flt-4在乳腺癌细胞增殖及转移中的作用[J].癌症,2003,22(10):1053-1056.

[6] Kitadai Y,Amioka T,Haruma K,et al.Clinicopathological significance of vascular endothelial growth factor(VEGF-C) in human esophageal squamous cell carcinomas[J].Int J Cancer,2001,93(5):662-666.

[7] Makoto I,Joji K,Kazama S,et al.Exprission of vascular endothelial growth factor-C in preoperative biopsy speciments and metastatic foci of regional nodes in submucosal gastric carcinoma[J].World J Surg Oncol,2005,3(1):2.