瘀肿消温度敏感型原位凝胶的基质配比优选

欧阳荣 廖建萍 徐晓霞

（1 湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2 湖南中医药大学，湖南 长沙 410007）

瘀肿消温度敏感型原位凝胶由生栀仁、大黄、金银花、当归等11味中药组成，具有活血止痛、清热消肿、散瘀通络的作用，临床上用于治疗急性软组织损伤，具有消肿止痛快、疗程短、疗效好的优点。原位凝胶（in situ gel）系指一类能以溶液状态给药后，立即在用药部位发生相转变，由液态转化形成非化学交联半固体凝胶的一类制剂[1]，独特的溶液-凝胶转变性质使其兼有制备简单、使用方便、滞留时间长等优点[2]。本试验在瘀肿消温度敏感型原位凝胶优化的提取工艺和预试验的基础上，进行基质配比的优选，为其进一步研究提供依据。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；分析天平DT-100（北京光学仪器厂）；不锈钢电热恒温水浴锅（北京市医疗设备厂）；NDJ-1旋转式黏度计（上海精密科学仪器有限公司）。

Poloxamer407（Pluronic F127，BASF，德国），Poloxamer188（Pluronic F68，BASF，德国），卡波姆934（BF Goodrich）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 试验设计

根据预试验的结果，选取Poloxamer188、Poloxamer407及卡波姆934的用量为考察因素，每个因素选取3个水平，以胶凝温度为评价指标，采用L9（34）正交表进行试验，因素水平见表1。根据正交试验结果选取合格胶凝温度试验号，再依次进行胶凝强度和生物黏附力的测定。

2.2 供试品溶液制备

称取规定量的卡波姆，加入适量的水，边加边搅拌，放置过夜使其充分溶胀；再分别称取规定量的Poloxamer407、Poloxamer188，分别加入适量的水并进行搅拌；将Poloxamer407溶液和Poloxamer188溶液先后加入到溶胀后的卡波姆中，边加边搅拌，将混合溶液置于4～10℃冰箱中10～12h，使其充分水化[3]，除去气泡，再加入适量水使成100mL，即得原位凝胶溶液。按药膏∶基质（包括原位凝胶溶液和氮酮）以1∶9混合搅拌均匀即得供试品溶液。

2.3 胶凝温度测定

取供试品溶液20mL置于30mL的烧杯中，烧杯置于以1℃/min速度升温的水浴锅中加热，使用旋转黏度计来测定不同温度下原位凝胶的黏度，黏度变化产生突跃时的温度就是我们所需要测定的凝胶温度[1]，反复测定3次，取其平均值。结果见表2。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交试验结果表

过低的胶凝温度（低于25℃）给温敏型凝胶的制备、存储和使用都带来问题和困难，过高的胶凝温度（高于30℃） 给温敏型凝胶的相变带来困难。故最佳胶凝温度范围为25～30℃。

表2说明2、3、4、5、7号试验的基质配比，胶凝温度在合格范围内。

2.4 胶凝强度的测定

按以上L9（34）正交试验表中2、3、4、5、7号试验 基质配比制备供试品，供试品依次编号为1、2、3、4、5。分别取以上供试品50g，置100mL具刻度的圆筒内，再放入36.5℃恒温水浴槽中使供试品胶凝。实验装置参照文献资料[4]，如图1所示，圆筒C的内直径为2.2 cm，圆盘B中6个小圆的直径均为5.0mm，砝码固定质量为180g，以圆盘B受压下降5cm所需的时间（s）表示凝胶强度的大小。依次测定各供试品的胶凝强度，每份供试品重复测定3次，取平均值。结果见表3。

表3 胶凝强度与生物黏附力结果

2.5 生物黏附力的测定

按以上L9（34）正交试验表中2、3、4、5、7号试验 基质配比制备供试品，供试品依次编号为1、2、3、4、5。实验装置参照文献资料[4]，如图2所示。取家兔新鲜表皮两段，分别将它们紧固于玻璃安瓿两端E位置（黏膜面向外），将玻璃安瓿在37℃下保持10min后，取供试品0.15g涂在两段新鲜表皮上再保持10min，然后立即将一个安瓿固定连接在平衡架上，另一个固定在可调支架上，调节支架F的高度，使左右保持平衡。在B处放入已称重的烧杯并匀速缓慢往烧杯内滴加自来水，直至使通过凝胶黏附的两段组织恰好分开，称量烧杯及水的总质量，每份供试品重复测定3次，取其平均值。生物黏附力以单位面积的剥离力（dyne/cm2）表示，公式采用Mikos[5]报道的生物黏附力计算公式f=0.98m/πr2。其中m为水及烧杯的总质量，r为玻璃管的半径。依次测定各供试品的生物黏附力，每份供试品重复测定3 次，取平均值。结果见表3。

编号为1的试验下降5cm所需的时间最短，胶凝强度最小，生物黏附力最小；编号为5的试验下降5cm所需的时间最长，胶凝强度最大，生物黏附力最大。在胶凝温度都合格的情况下，胶凝强度越大，生物黏附力越大胶凝效果越好，故最佳基质配比为Poloxamer407、Poloxamer188、卡波姆分别为22%、3%、0.7%。

3 讨 论

3.1 卡波姆934为白色疏松粉末，具有较强的吸湿性，投入水中溶胀时若操作不当，易成团或不完全润湿，影响成品的均匀性和细腻性。将适量水缓慢加入到卡波姆中，边加边搅拌，至分散均匀，静置过夜，可使卡波姆完全溶胀。

3.2 在配置原位凝胶基质时会产生很多小气泡，将配置好的凝胶溶液置于4～10℃冰箱中约10～l2h，使其充分水化[3]，气泡即可除去。

3.3 实验结果表明，所制瘀肿消温度敏感型原位凝胶在冷藏条件下性状、含量等均未发生明显变化，表明优选出的工艺比较稳定。为进一步检验原位凝胶的稳定性，笔者还将对其进行加速试验和长期试验的考察。

[1]杜广增,赵浩如.Poloxamer 407温敏性即型凝胶的制备和应用进展[J].药学进展,2008,32(4):163-167.

[2]魏培,邓树海,李凌冰,等.原位凝胶缓释给药系统的研究进展[J].中国医药工业杂志,2007,38(12):890-894.

[3]Dumortier G,Grossiord JL,Agnely F,et a1.A review of poloxamer 407 pharmaceutical and pharmacological characteristics[J].Pharm Res,2006,23(12):2709-2728.

[4]徐玉红,李东,王蔓琳,等.聚糖对温敏性原位凝胶基质体外流变学特性的影响[J].药物研究,2007,16(13):55.

[5]Mikos AG,Peppas NA.Bioadhesive analysis of controlled releasesystem.Ⅳ.An experimental method for testing the adhesion of microparticles with mucosa[J].J Controlled Release,1990,12(1):31-37.