健脾止嗽颗粒质量标准研究

杨水清，洪志勇，张丽芬，曾 斌，刘志承

(广东省深圳市中医院，广东 深圳 518000)

健脾止嗽颗粒由陈皮、桔梗、苍术、白术、木香、神曲、槟榔、茯苓等药物组方，具有益气健脾、化痰止嗽等功效，主要用于治疗脾虚咳嗽、痰多白稀、咳声低微、汗多食少、肢软神疲、大便软溏等症。为保证制剂质量，笔者用薄层色谱法和高效液相色谱法研究其质量标准，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国)，Agilent Elipse XDBC18柱，VWD检测器，四元梯度泵;CAMAG ATS 4型薄层自动点样仪(瑞士);硅胶G薄层板(浙江省路桥四甲生化塑料厂)。健脾止嗽颗粒(自制中试产品，批号分别为100801，100802，100803);健脾止嗽颗粒阴性对照制剂(自制);苍术(茅苍术)对照药材、木香对照药材、橙皮苷对照品(批号分别为120932-200405，120921-200506，110721-200512，中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 苍术

取本品5包，研匀，称取10 g，加乙醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液置水浴蒸干，残渣用乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液;另取苍术对照药材0.5 g，加乙醇15 mL，同法制成对照药材溶液;再取缺苍术的其他各味药，按制备工艺制成苍术阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成苍术阴性对照品溶液。照2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL，对照药材溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃下加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰[1](图1 A)。

2.1.2 木香

取本品5包，研匀，称取10 g，加甲醇40 mL，超声处理5 min，滤过，滤液置70℃水浴蒸干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液;取木香对照药材1 g，加甲醇10 mL，同法制成对照药材溶液;再取缺木香的其他各味药，按制备工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成木香阴性对照溶液。照2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各 10 μL，对照药材溶液6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲醇(27∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃下加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰[2-3](图 1 B)。

图1 薄层色谱图

2.2 橙皮苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Elipse XDB-C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(60∶40);检测波长:283 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:5 μL。

2.2.2 溶液制备

精密称取橙皮苷对照品适量，用甲醇溶解，制成每1 mL含橙皮苷0.388 mg的对照品贮备液。精密吸取此液10 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，得每1 mL含橙皮苷38.8 μg的对照品溶液。取本品约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，加热回流提取2 h，放冷，转移至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验:按制剂工艺制备不含陈皮的阴性对照样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。按含量测定项下方法进样测定。结果在对照品溶液保留时间处没有色谱峰出现，表明阴性对照样品无干扰。对照品溶液供试品溶液和阴性对照品溶液的色谱见图2。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密吸取对照品贮备溶液0.2，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，分别精密吸取5 μL注入液相色谱分析仪，测定峰面积。以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线方程 Y=21.534 X+741.48(r=0.999 6)。结果表明，橙皮苷质量浓度在31.04～155.20 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液(38.8 μg/mL)5 μL，重复进样5次。结果峰面积积分值的 RSD为1.12%(n=5)。

稳定性试验:取同一供试品溶液5 μL，按含量测定项下方法，分别于0，2，4，8，12 h时各测定1次。结果峰面积积分值的 RSD为1.08%(n=5)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重现性试验:取同一样品，分别制备供试品溶液，测定其峰面积并计算橙皮苷含量。结果的 RSD为1.93%(n=5)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品，按低、中、高3个质量浓度分别精密加入一定量的橙皮苷对照品，依法制成供试品溶液并测定其含量，计算回收率。结果见表1。

表1 橙皮苷加样回收试验结果(n=9)

2.2.4 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，依法进样测定含量。结果批号为100801，100802，100803的3批样品中，橙皮苷平均含量分别为9.35，9.41，9.39 mg/g，RSD分别为0.89%，0.80% ，1.20%(n=3)。

3 讨论

按药典方法[4]鉴别处方中的苍术时，苍术阴性对照品溶液在相应位置上有干扰，而以乙醇为提取溶剂、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50∶1)为展开剂时，不但色谱斑点清晰，且阴性对照无干扰;用药典方法[4]鉴别处方中的木香时，木香阴性对照品溶液在相应位置上也有干扰，而以环己烷-甲醇(27∶1)为展开剂时，色谱斑点清晰，且阴性对照无干扰。采用高效液相色谱法测定含量的过程中，比较了甲醇、乙醇、无水乙醇、水饱和正丁醇等溶剂，结果甲醇的提取较完全，可以满足含量测定要求;还比较了加热回流、超声处理、索氏提取等提取方法，甲醇直接加热回流和超声处理法得到的供试品溶液的液相色谱中杂质峰较多，而索氏提取法大大减少了杂质峰;索氏提取时间优选试验结果显示，提取2 h后橙皮苷含量不再增加。色谱系统适用性试验结果显示，所用方法简便、快速、准确、重复性好，可用于控制健脾止嗽颗粒的质量。

[1]王晓琼，李家琳.木香顺气丸鉴别与含量测定[J].医药导报，2010，29(2):243-244.

[2]颜 红，严建业，任荣军，等.胃痛康胶囊质量标准研究[J].湖南中医药大学学报，2008，28(6):53-55.

[3]余晓琴，李 鸥，董 林.加味烂积丸质量标准研究[J].时珍国医国药，2009，20(7):1 773-1 775.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:41，111.