离子色谱法测定牛黄上清丸中二氧化硫残留量＊

乔蓉霞，杨瑞瑞，刘海静，袁向辉

(1.陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061;2.陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

牛黄上清丸是传统中成药，具有清热泻火、散风止痛的功效，主要用于热毒内盛、风火上攻所致头痛眩晕、目赤耳鸣、咽喉肿痛、口舌生疮、牙龈肿痛、大便燥结等证，由人工牛黄、薄荷、菊花、荆芥穗、白芷、黄连、黄芩、黄柏、川芎、栀子、大黄、连翘、赤芍、当归、地黄、桔梗、甘草、石膏、冰片加工而成[1]。2010年版《中国药典(一部)》附录以蒸馏法作为二氧化硫残留量的测定方法。笔者建立了测定牛黄上清丸中二氧化硫残留量的离子色谱法，现报道如下。

1 仪器与试药

Dionex ICS-1100型离子色谱仪;电导检测器;万能粉碎机;水蒸气蒸馏装置;超纯水系统(TTL-10B)。氢氧化钾、亚硫酸钠、乙二胺四乙酸、硫代硫酸钠、碘、淀粉均为分析纯;实验用水均为电阻率为18.2 MΩ·cm的去离子水;硫酸盐标准溶液购自国家标准物质中心(编号为 0942，标示值为 1 000 μg/mL)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:AS-11-HC阴离子分析柱(250 mm×4 mm)，保护柱为AG-11-HC(50 mm×4 mm);淋洗液:20 mmol/L氢氧化钾溶液，等度淋洗;流速:1.0 mL/min;进样量:25 μL 。

2.2 溶液制备

取硫酸盐标准溶液，用去离子水逐级稀释成质量浓度分别为500，300，200，150，100，50，30，20，10，5，3，2，1，0.5，0.3，0.2，0.1 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。取牛黄上清丸(大蜜丸，约6 g)1粒，剪碎，精密称定，置水蒸气蒸馏装置的样品瓶中，加水20 mL润湿，使其分散，在100 mL量瓶中加入3%的双氧水20 mL作为接收液，吸取盐酸5 mL快速加入样品瓶，立即密封，进行水蒸气蒸馏;至接收瓶中液体接近100 mL时，停止蒸馏，取下接收瓶;用去离子水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:用牛黄上清丸组方中含有的菊花(未熏硫)作阴性对照，按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照品溶液，依法测定。由图1可见，没有经过硫磺薰制的菊花中未检出二氧化硫。

图1 离子色谱图

线性关系考察:将2.2项下不同质量浓度的对照品溶液分别进样25 μL，以峰面积和进样量绘制标准曲线。结果表明，硫酸根进样量在0.1～500 μg范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 9。

精密度试验:取已制备好的同一对照品溶液，平行进样6次。结果峰面积分别为 453.7，473.2，456.9，479.6，451.1，456.8，RSD 为2.58%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取已制备好的同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h 时进样。结果峰面积分别为 438.3，449.0，435.7，449.2，457.6，450.2，RSD为1.83%(n=6)，表明供试品溶液24 h内稳定性良好。

重复性试验:取同一批牛黄上清丸，依法平行制备6份供试品溶液并测定。结果样品中二氧化硫平均含量为24.18 μg/g，RSD为4.51%(n=6)，表明方法重复性较好。

加样回收试验:精密称定无水亚硫酸钠，以0.05%乙二胺四乙酸溶解，临用前用碘量法标定[2]，以二氧化硫计质量浓度为0.474 0 g/L。取牛黄上清丸1粒(约6 g)，精密称定，用滴定管分别精密加入亚硫酸钠对照品溶液0.4，1.2，6.0 mL，按供试品溶液的制备与测定方法每个质量浓度平行操作3份，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取6批样品，依法检测其中二氧化硫残留量。结果批号为1002114，90603，90603，15057，15060，7015101 的 6 批样品中，二氧化硫残留量分别为 32，37，11，24，14，8 mg/kg，RSD 分别为 1.3%，0.9% ，1.3%，1.2% ，0.7%，1.0% 。

3 讨论

牛黄上清丸的生产工艺是将方中饮片粉末研细、过筛、混匀后加炼蜜制成，其中甘草、当归、菊花、白芷、桔梗等中药饮片在传统加工过程中常采用硫磺熏蒸以达到洁白、防虫、防霉的效果，导致这些饮片中残留有二氧化硫。而牛黄上清丸是以饮片粉末直接投料制成的，硫磺熏蒸过的饮片会将残留的二氧化硫带入到制剂中。二氧化硫多以结合态的亚硫酸盐存在，亚硫酸盐具有一定的毒性，可与蛋白质的巯基发生可逆反应，刺激消化道黏膜，服用后会出现恶心、呕吐、腹泻等症状，进而导致免疫力下降;过量摄入亚硫酸盐，会影响人体对钙的吸收，并破坏B族维生素;长期摄入则会对肝脏造成损害[3]。目前，亚硫酸盐的安全性问题已引起广泛关注，因此各国纷纷限定食品和药品中二氧化硫和亚硫酸盐的残留量。目前我国食品卫生标准对食品中亚硫酸盐的允许量(GB 2706-1996)和检测方法(GB/T 5009.34-1996)均作出了规定[4]。

加样回收试验时，将硫酸根与亚硫酸根的量均折算成二氧化硫后计算;试验用水必须为电导率大于18 MΩ的超纯水，样品瓶及容量瓶都必须用超纯水荡洗;水蒸气蒸馏法对样品进行提取时，应注意密封。所建立的方法操作简便快速、干扰少、易于掌握，测定的精密度较好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:554.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:894.

[3]陈飞东，戴志远.食品中亚硫酸盐测定方法的研究进展[J].食品研究与开发，2006，27(8):139-142.

[4]钟志雄，梁春穗，杜达安，等.离子色谱法测定食品中亚硫酸盐的应用研究[J].中国卫生检验杂志，2003，13(1):29-32.