高效液相色谱法测定银冬颗粒中绿原酸含量＊

2011-05-31李金玲徐晓玉

中国药业 2011年16期

徐玲，王琴，李金玲，徐晓玉

(西南大学药学院·西南大学中药研究所，重庆 400715)

银冬颗粒系西南大学中医药学院博士生导师徐晓玉教授在中医药理论指导下精心研制的中药复方保健产品。银冬颗粒主要由山银花、天冬等组成，具有清热泻火、养阴生津的功效。为了控制银冬颗粒的质量，保证其疗效，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中的绿原酸进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(Agilent Technologies 1200 series);KQ5200E型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);JA2003N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110753－200413);银冬颗粒(西南大学中药研究所研制，2 g/袋，批号分别为 09112601，09112603，09112704);乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:shimpack vp－ODS 柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.2% 磷酸(10 ∶90);流速:1.0 mL/min;检测波长:326 nm;柱温:30℃;进样量:20 μL。在上述色谱条件下进样，色谱图见图1。可见，绿原酸峰形良好，与其他组分能较好分离;阴性对照品溶液色谱中，在绿原酸相应的保留时间附近无干扰峰。

2.2 溶液制备

精密称取绿原酸对照品10.8 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为108 μg/mL的对照品溶液。称取银冬颗粒约2 g，研细，取约0.3 g，精密称定，置25 mL量瓶中，用50%甲醇20 mL超声溶解30 min，放冷，加50%甲醇稀释至刻度，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22 μm)过滤，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

标准曲线制备:分别精密吸取对照品溶液(108 μg/mL)0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，加 50% 甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22 μm)过滤后，按2.1项下色谱条件进样20 μL，记录峰面积。以绿原酸质量浓度为横坐标、峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A=10.899 5 C－10.613，r=0.999 3(n=5)。结果表明，绿原酸检测质量浓度在 5.4 ～108 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:取对照品溶液，重复进样6次，分别测定绿原酸的峰面积。结果的 RSD为0.314%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，12，24 h时进样，测定绿原酸的峰面积。结果的 RSD为0.382%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验:精密称取同一批样品(09112601)6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果绿原酸平均含量为10.94 mg/g，RSD为2.2%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:称取9份已知含量(10.94 mg/g)的样品批号为09112601约0.15 g，分别加入3个梯度浓度的对照品共6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，进样测定峰面积，按外标法计算含量。结果批号为09112601，09112603，09112704的3批样品中绿原酸含量分别为 10.94，11.62，11.65 mg/g。

3 讨论

取少量绿原酸对照品，在200～400 nm波长范围进行扫描，结果其最大吸收值在326 nm，因此选用326 nm作为检测波长。在波长为 326 nm、进样量 20 μL、流速 1.0 mL/min的条件下，分别以乙腈－ 0.4%磷酸溶液(13 ∶87)[1]、乙腈－ 0.1% 磷酸溶液(17 ∶83)、甲醇－水－冰醋酸(7∶92 ∶1)、乙腈－0.2%磷酸溶液(10∶90)为流动相测定，结果流动相为乙腈－0.2%磷酸溶液(10∶90)时绿原酸的保留时间为26.8 min，且峰形良好，与其他组分能较好分离。本试验所建立的方法高效、快速、稳定、灵敏，可作为银冬颗粒质量控制的有效方法。