高效液相色谱法同时测定多维生素糖浆中5种维生素和山梨酸含量

杨龙华，薛 琦

(山东省青岛市药品检验所，山东 青岛 266071)

多维生素糖浆(乐唯多，Alvityl Syrup)是含有维生素A棕榈酸酯(VitA)、盐酸硫胺(VitB1)、核黄素-5'-磷酸钠、右泛醇、盐酸吡多辛(VitB6)、氰钴胺(VitB12)、抗坏血酸(VitC)、胆骨化醇(VitD3)、d1-α-生育酚醋酸酯(VitE)、生物素(VitH)、烟酰胺(VitPP)的复方制剂，以山梨酸作为防腐剂，临床主要用于防治儿童维生素缺乏症。多维生素糖浆中维生素成分较多、含量较低且干扰杂质多，难以同时测定各组分含量。已有文献报道了糖浆剂中3种B族维生素和山梨酸同时测定的方法[1]。由于乐唯多糖浆中维生素的种类和成分较多，分析方法繁杂，故在上述文献的基础上进行深入试验，期望能够同时测定乐唯多糖浆中更多的成分。将多维生素糖浆直接用纯水稀释后以高效液相色谱-紫外分光光度(HPLC-UV)法同时测定其中 VitC，VitPP，VitB1，VitB6，核黄素 -5'- 磷酸钠和防腐剂山梨酸的含量。该方法快速、简便、灵敏、准确，可有效控制多维生素糖浆的质量;在工业化生产和进口药品检验中，可有效节约成本，提高药品检验工作的效率。现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-2010C型高效液相色谱-紫外仪，Class VP色谱工作站。抗坏血酸(VitC，批号为0604-05)，烟酰胺(VitPP，批号为0604-04)，盐酸硫胺(VitB1，批号为 0607-26)，核黄素 -5'-磷酸钠(批号为 R0603-26)，盐酸吡多辛(VitB6，批号为 0607-20)，山梨酸(批号为0607-22)，以上对照品均由韩国永进药品有限公司提供;多维生素糖浆(批号分别为06004，06005，06006，韩国永进药品有限公司);甲醇为色谱纯，水为超纯水，己烷磺酸钠、三乙胺、醋酸均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Allthna C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:A为0.01 mol/L己烷磺酸钠溶液(1 000 mL溶液加入三乙胺0.25 mL和醋酸9.5 mL)，B为甲醇，按表1进行梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:35 ℃;进样量:20 μL。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.2 溶液制备

精密称取 VitC对照品 102.23 mg(99.6%)、VitPP对照品51.67 mg(99.6%)、VitB1对照品 20.80 mg(95.6%)、核黄素 -5'-磷酸钠对照品19.09 mg(100%)、VitB6对照品14.21 mg(99.2%)和山梨酸对照品58.35 mg(99.7%)，分别置10 mL量瓶中，均加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得到VitC(10.182 1 g/L)、VitPP(5.146 3 g/L)、VitB1(1.988 5 g/L)、核 黄 素 -5'-磷 酸 钠 (1.909 0 g/L)、VitB6(1.409 6g/L)和山梨酸(5.8175g/L)各对照品储备溶液。分别量取各对照品储备液适量，加水制成每1 mL中约含VitC 1 mg、VitPP 0.5 mg、VitB10.1 mg、核黄素 -5'- 磷酸钠 0.1 mg、VitB60.03 mg和山梨酸0.15 mg的混合对照品溶液。精密量取多维生素糖浆样品(批号为06006)10mL，置50mL量瓶中，用水洗出移液管内的附着液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按多维生素糖浆处方比例制备不含VitC，VitPP，VitB1，核黄素-5'-磷酸钠，VitB6和山梨酸的样品，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，用水洗出移液管内的附着液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:将混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液按上述色谱条件分析，记录色谱图(见图1)。结果6种组分与相邻色谱峰分离度均大于1.5，理论板数均大于2 000，处方中无杂质干扰6种组分的测定。

线性关系考察:分别量取2.2项下对照品储备液各适量，分别置同一10 mL量瓶中，加水制成质量浓度约为VitC 0.15，0.3，1，1.5，2.0 g/L、VitPP 0.1，0.25，0.5，0.8，1.0 g/L、VitB1和核黄素 -5'-磷酸钠 0.02，0.05，0.1，0.2，0.4 g/L，VitB60.007，0.015，0.03，0.06，0.1 g/L 及山梨酸 0.03，0.07，0.15，0.3，0.6 g/L 的5份混合标准曲线溶液，精密量取各溶液10 μL，按上述色谱条件分析，记录色谱图，以峰面积 A对各溶液质量浓度 C(g/L)进行线性回归，结果见表2。

表2 线性关系考察结果

精密度试验:取同一混合对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次进行测定。结果VitC，VitPP，VitB1、核黄素-5'-磷酸钠、VitB6、山梨酸色谱峰面积的 RSD分别为0.32%，0.10%，0.08%，0.18%，0.06%，0.11%(n=6)，表明方法精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0，2，4，8，12，24，36，48 h 时测定峰面积。结果 VitC，VitPP，VitB1、核黄素-5'-磷酸钠、VitB6、山梨酸峰面积的 RSD分别为 0.5%，0.3%，0.2%，0.5%，0.2%，0.1%(n=8)，表明供试品溶液在48 h内稳定。

加样回收试验:采用加样回收法。精密称取各对照品适量，VitC 333.92 mg，VitPP 166.73 mg，VitB170.86 mg，核黄素 -5'- 磷酸钠67.59 mg，VitB617.02 mg和山梨酸99.85 mg，置同一50 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取该混合溶液1.5，3.0，6.0 mL各3份，分别置9个50 mL量瓶中，再向各量瓶中精密加入已知含量的多维生素糖浆样品10 mL(批号为06004)，用水洗出移液管内的附着液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。依法进行测定并计算平均回收率。结果 VitC，VitPP，VitB1、核黄素-5'-磷酸钠、Vit B6、山梨酸的平均回收率分别为99.9%，98.4%，99.4%，100.9%，100.4%，100.3%，RSD分别为 0.5%，0.6%，0.4%，0.9%，1.0%，0.8%(n=9)，表明方法回收率符合测定要求，方法可行。

2.4 样品含量测定

取多维生素糖浆(乐唯多)3批，依法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图;将供试品溶液的峰面积代入标准曲线方程计算各成分浓度及含量。根据该品种质量标准规定，VitC，VitPP，VitB1、核黄素 -5'-磷酸钠、VitB6的含量均应为标示量的90.0%～150.0%，山梨酸的含量应不超过标示量的100.0%。3批样品测定结果见表3。

表3 样品含量测定结果(标示量的%)

3 讨论

VitC和VitPP均为水溶性维生素，极性较大，在C18柱上保留较弱。在文献[1]的基础上，通过增大流动相中离子对试剂己烷磺酸钠溶液的浓度、改变流动相的梯度以及提高柱温，使各相邻色谱峰达到良好分离。综合考虑各组分色谱峰保留时间和分离度，发现采用文中的色谱系统，各成分色谱峰保留时间适宜、分离度高、峰形良好、重现性好。将样品以纯水稀释后，采用HPLC-UV法进行分析，操作简单，可使这5种维生素和防腐剂同时得到准确测定。因此，本方法专属性强、操作简便，结果准确、可靠，可作为多维生素糖浆(乐唯多)的质量控制项目之一。

[1]杨龙华，薛 琦，卢京光.HPLC法同时测定糖浆剂中三种B族维生素及山梨酸的含量[J].齐鲁药事，2010，29(6):343-345.