肛愈宁软膏对大鼠脓肿创面愈合的促进作用

罗京艺，尚 毅，王 敏，朱东华

创面愈合是组织修复中的一个重要问题。随着对肛肠疾病治疗手段的不断完善，肛周脓肿大多能一期治愈，因此肛瘘的发病率大大降低。由于肛周脓肿术后创面处于开放状态，且经常受粪便的污染，导致术后创面愈合缓慢。我们应用肛愈宁软膏对肛周脓肿术后创面进行换药，可明显缩短创面的愈合时间。本研究旨在通过观察大鼠脓肿模型创面的组织学变化，探讨该中药制剂促进创面愈合的机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 清洁级Wistar大鼠80只，雌雄各半，体质量（220±20）g。随机分为肛愈宁组、马应龙痔疮膏组。每组40只。

1.2 主要仪器 MPIAS-500彩色病理图文分析系统；自动石蜡包埋机（德国Leitz公司）；石蜡切片机（德国Leitz公司）；光学显微镜及照相系统（日本Olympus公司）。

1.3 药物 肛愈宁软膏（聊城市第二人民医院制剂室提供）配制:将白矾15 g，冰片15 g，麝香1 g，没药30g，乳香30g，朴硝60g，在-40℃状态下粉碎成300目极细粉。将黄连45 g，白芨20g，白芷30g，置50g麻油中浸泡4 h，直火加热，炸至外表枯黄，滤去药渣。将凡士林40g在温控80～100℃完全熔化，控温120℃左右灭菌1 h，放冷至70～80℃，加入药油中溶融，再加入粉碎的药粉，不断搅拌成软膏状。马应龙麝香痔疮膏由武汉马应龙药业集团股份有限公司提供（10g/支；产品批号:100471；药准字:Z42021920）。

1.4 动物造模 参照有关文献[1]的方法加以改进，制造大鼠脓肿的动物创面模型。创面造模:用1%盐酸氯胺酮（3mL/kg）腹腔注射麻醉。局部备皮，常规消毒，于大鼠背部取直径为2cm的圆形切口1个，剪开皮肤全层、皮下浅筋膜直至肌层，止血后在创面上加粪液1mL（正常人新鲜粪便10g，加生理盐水5mL，混匀，离心，取上清液，现配现用），以油纱、敷料、胶带固定，48 h后去除覆盖物，见伤口有脓性分泌物、有粪臭味者为造模成功。以后每次换药前0.5 h均在创面上滴加粪液1mL。

1.5 用药方法 肛愈宁组:造模后第1 d清晨起换药，1次/d。先后用生理盐水棉球、碘伏棉球擦拭创面，外敷肛愈宁软膏纱条，再盖以医用敷料。马应龙痔疮膏组:换药方法同上，创面外敷马应龙麝香痔疮膏纱条。两组分别持续换药18次，1次/d。

1.6 观察指标 在造模后第3、7、10、14、18 d，分5批（每批每组8只大鼠）处死大鼠,在创缘切取0.5cm×0.5cm肉芽组织，置卡诺液中固定45min，石蜡包埋、切片，行常规HE染色，采用光镜及MPIAS-500彩色病理图文分析系统进行观察。观察指标:⑴创面闭合指数。计算公式:创面闭合指数=（1-治疗后创面面积/原始创面面积）×100%。⑵每个标本观察3个视野，计数毛细血管数，并求其均值（新生毛细血管数/每个视野）。⑶每个标本观察5个视野，计数肉芽组织中成纤维细胞数，并求其均值（成纤维细胞数/每个视野）。⑷观察肉芽组织中的炎性细胞数。（炎细胞浸润程度半定量标准根据有关文献[2]的方法略作调整:++:多量炎细胞浸润；+:少量炎细胞浸润；±偶见炎细胞浸润。）

1.7 统计学方法 采用SPSS 14.0统计软件包对相关数据进行分析，计量资料用均数±标准差（）表示，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 创面愈合时间 肛愈宁组大鼠创面闭合指数高于马应龙痔疮膏组，18 d时肛愈宁组大鼠创面已全部愈合。见表1。

2.2 创面肉芽组织中毛细血管数 肛愈宁组肉芽组织中毛细血管在创面愈合早期（造模后3～7 d）较马应龙痔疮膏组多（P＜0.05），10 d后两组差别无统计学意义。见表2。

2.3 创面肉芽组织中成纤维细胞数 肛愈宁组肉芽组织中成纤维细胞在创面愈合早期（造模后3～7 d）较马应龙痔疮膏组多（P＜0.05），10 d时马应龙痔疮膏组创面中成纤维细胞较肛愈宁组多，14d时两组差别无统计学意义。见表3。

2.4 肉芽组织中炎性细胞数 在造模后第3d，肛愈宁组（肛组）创面的炎性细胞数与马应龙痔疮膏组比较，无统计学意义。7 d以后，肛愈宁组炎性细胞，较马应龙痔疮膏组（马组）少，见表4。

表1 两组大鼠创面闭合指数比较（,%）

表1 两组大鼠创面闭合指数比较（,%）

注:与马应龙痔疮膏组比较，*P＜0.05；△P＜0.01

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表2 两组大鼠创面肉芽组织中毛细血管数比较（）

表2 两组大鼠创面肉芽组织中毛细血管数比较（）

注:与马应龙痔疮膏组比较，*P＜0.05；△P＜0.01

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表3 两组创面肉芽组织中成纤维细胞数比较（）

表3 两组创面肉芽组织中成纤维细胞数比较（）

注:与马应龙痔疮膏组比较，*P＜0.05；△P＜0.01

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表4 两组大鼠创面肉芽组织中炎性细胞浸润比较

2.5 病理组织学观察 造模后第3d时肛愈宁组创面肉芽组织生长良好，渗出坏死层较薄，肉芽层明显；此时马应龙痔疮膏组创面肉芽组织生长缓慢，渗出坏死层较厚，肉芽层不明显。造模后第7 d时肛愈宁组创面边缘有成熟的鳞状上皮组织长入，基底细胞增生活跃，并见核分裂像；此时马应龙痔疮膏组边缘上皮组织的基底细胞增生，但无成熟的鳞状上皮形成（见图1～图4）。

图1 3d肛愈宁组HE（×100）

图2 3d马应龙痔疮膏组HE（×100）

图3 7d肛愈宁组HE（×400）

3 讨论

肉芽组织由大量的毛细血管、微小血管及丰富的成纤维细胞组成，成纤维细胞是创伤修复最主要的细胞[3]。在细胞增殖和修复期，最关键的步骤之一是肉芽组织的形成。创伤形成后，成纤维细胞发生增殖、迁移，并合成、分泌胶原和胞外基质（蛋白质）成分，参与肉芽组织形成、创口收缩及组织重建的过程，其数量变化会对创伤愈合产生巨大影响[4]。

肛愈宁软膏的组方是通过检索古代文献结合临床实践而得，由白矾、冰片、麝香、没药、乳香、朴硝、黄连、白芨和白芷组成，以麻油、凡士林为基质，具有活血行气、散瘀止痛、敛疮生肌的功效，在临床促进难愈性创面愈合治疗上取得了一定的疗效。

本研究对两组不同时限创面组织进行了显微镜下观察，于造模后第3d见肉芽组织由创面底部及边缘部向创面长入，毛细血管多与创面呈垂直生长，血管内皮细胞肥大，血管扩张、淤血，纤维母细胞数量日渐增多。第7～10 d，肉芽组织形成更成熟，纤维母细胞产生胶原纤维活跃，疤痕底开始形成，创面逐渐变浅，创面边缘的基底细胞增生，向创面中心部移动，逐渐发展为复层鳞状上皮，逐渐覆盖于肉芽组织表面。在愈合过程中，肛愈宁组在第7 d时毛细血管数、成纤维细胞数达到峰值，马应龙痔疮膏组在第10 d时新生毛细血管数、成纤维细胞数达到峰值，两峰之比，差异性显著（P＜0.05）。本研究结果提示:肛愈宁软膏在创面愈合早期（3～7 d）能显著增加创面肉芽组织成纤维细胞和毛细血管的数量，从而促进创面愈合。

粪污染所致的肠道杆菌感染是肛门部切口延迟愈合的主要因素之一。在造模后第3d，肛愈宁组创面的炎性细胞数与马应龙痔疮膏组比较，无统计学意义。而在7 d以后肛愈宁组创面炎性细胞少于马应龙痔疮膏组，提示肛愈宁软膏抑制了粪液污染创面所致的炎症反应。我们据此认为:抑制创面细菌生长、减轻创面炎症反应，也可能是肛愈宁软膏促进肛周脓肿术后创面愈合的作用机理之一。

[1]郑雪平,许慧琴,丁义江,等.复方珠黄霜对兔背部人粪污染创面愈合的实验研究[J].中国中西医结合外科杂志，2002,8(5):361.

[2]周宗科,裴福兴,程惊秋,等.不同方法处理对同种异体皮质骨板移植组织相容性的影响[J].华西医学，2005,20(1):30.

[3]付辉,王新建,卢焕福,等.蜂蜡膏促进糖尿病新西兰兔创面愈合的实验研究[J].大连医科大学学报,2007,29(4):340.

[4]秦全红.成纤维细胞在皮肤创伤愈合中的作用及其调控[J].国外医学·创伤与外科基本问题分册,2000,12(1):33.