水飞蓟果实中的黄酮类化合物

张 丹，张朝凤，张 勉

中国药科大学 现代中药教育部重点实验室，生药学研究室，南京 211198

水飞蓟是菊科植物水飞蓟 (Silybum marianum L.Gaertn)的干燥成熟果实，原产于南欧、北非[1]。水飞蓟作为欧洲民间用药，用于治疗肝胆疾病已有悠久的历史。我国于1972年从西德引种水飞蓟，现已在陕西、黑龙江、辽宁、新疆、山西等地成功推广种植。现代药理学研究表明，水飞蓟在清除自由基、抗脂质过氧化、保护肝细胞膜、促进肝细胞的修复再生、抗肝纤维化、抗肿瘤、降血脂等方面具有良好的疗效[2]。水飞蓟果实中含有多种化学成分，主要有黄酮木质素、黄酮、生物碱、甾醇、脂肪酸、蛋白质等类型的化合物[2]，其保肝活性的主要成分为黄酮木质素类即水飞蓟素类化合物。本课题对水飞蓟的化学成分进行了较为系统的研究，目前从乙酸乙酯部位分离鉴定了9个化合物，分别为：水飞蓟宾（1），2,3-脱氢水飞蓟宾（2），水飞蓟亭（3），2,3-脱氢水飞蓟亭（4），4'-甲氧基紫杉叶素（5），紫杉叶素（6），二氢山奈酚（7），槲皮素（8）和 3,4-二羟基苯甲酸（9），其中化合物5，7，9为首次从该属植物中分得。

1 材 料

X-4型显微熔点测定仪（温度未校正）；Brucker ACF-300，500 型核磁共振仪；Agilent 1100 LC-MS型质谱仪。薄层色谱和柱色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；所用试剂均为分析纯。

水飞蓟药材购买于河北省安国市药材市场，经本课题组张勉鉴定为水飞蓟 （Silybum marianum L.Gaertn）的干燥成熟果实。凭证标本 （SMZ-ZD-200908）存放于中国药科大学生药学研究室。

2 提取与分离

水飞蓟果实12 kg，以85%的乙醇加热回流提取3次，每次2 h，减压回收溶剂得总浸膏1200 g。以水混悬，分别依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压回收得到乙酸乙酯部位浸膏255 g。取乙酸乙酯部位（250 g），经硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯（30︰1～1︰2）、乙酸乙酯-甲醇（100︰0～1︰1）梯度洗脱，根据TLC结果合并相同流分，再经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱分离，从石油醚-乙酸乙酯（2︰1）洗脱部分得到化合物7（20mg），从石油醚-乙酸乙酯（1︰1）洗脱部分得到化合物5（15 mg）和9（30 mg），从石油醚-乙酸乙酯（1︰2）洗脱部分得到化合物 1（10 g），2（500 mg），3（4 g），4（20 mg），6（20 mg）和 8（80 mg）。

3 结构鉴定

化合物1～4,6,8与文献对照基本一致，分别鉴定为水飞蓟宾(1)[3]，2,3-脱氢水飞蓟宾(2)[4]，水飞蓟亭(3)[3]，2,3-脱氢水飞蓟亭(4)[5]，紫杉叶素(6)[7]和槲皮素(8)[7]。

化合物5 淡黄色粉末（氯仿-甲醇），mp175～177℃。365 nm紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，FeCl3反应呈阳性。ESI-MS:m/z 319[M+H]+。1H-NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:11.91(1H,s,5-OH)，10.80(1H,s,7-OH)，9.09(1H,s,3'-OH)，7.10(1H,d,J=1.65 Hz,H-2')，6.90(1H,dd,J=1.83 Hz,H-6')，6.78(1H,d,J=8.04 Hz,H-5')，5.91(1H,d,J=2.22 Hz,H-8)，5.86(1H,d,J=2.91 Hz,H-6)，5.73(1H,s,3-OH)，5.03(1H,d,J=11.34 Hz,H-2)，4.64(1H,dd,J=6.20 Hz,H-3)，3.78(3H,s,H-OCH3)。 以上数据与文献[6]报道相一致，鉴定化合物 5 为 3，3'， 5，7-四羟基-4'-甲氧基二氢黄酮,即4'-甲氧基紫杉叶素。

化合物7白色粉末 （氯仿-甲醇），mp 212～213℃。365nm紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，FeCl3反应呈阳性。 ESI-MS：m/z287[M-H]-。1HNMR(300 MHz,DMSO-d6) δ：11.85(1H,s,5-OH),10.76(1H,s,7-OH)，9.49(1H,s,4'-OH)，7.26(2H,d,J=8.4 Hz,H-2',6＇)，6.73(2H,d,J=8.22Hz,H-3',5')，5.84(2H,dd,J=8.612.01 Hz,H-8,6)，5.69(1H,s,3-OH)，5.00(1H,d,J=11.52 Hz,H-2)，4.53(1H,dd,J=3.24 Hz,H-3)；13C-NMR(75 MHz,DMSO-d6) δ：197.9(C=O)，166.74(C-7)，163.26(C-5)，162.54(C-9)，157.70(C-4')，129.42(C-1')，127.52(C-2',6')，114.86(C-3',5')，100.44(C-10)，95.97(C-6)，94.95(C-8)，82.84(C-2)，71.41(C-3)。以上数据与文献[8]报道相一致，鉴定化合物7为3,4',5,7-四羟基二氢黄酮，即二氢山奈酚。

化合物9 无色针状结晶 （氯仿-丙酮），mp 195～196℃。 ESI-MS：m/z153[M-H]-。1H-NMR(300 MHz，Acetone-d6) δ：7.53(1H,d,J=1.95 Hz,H-2),7.47 (1H,dd,J=1.92,2.25 Hz,H-6)，6.89(1H,d,J=8.25 Hz,H-5)。以上数据与文献[9]报道相一致，鉴定化合物9为3,4-二羟基苯甲酸，即原儿茶酸。

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