顶空气相色谱法测定吡哌酸中残留溶剂

杨 杰，孙 渤，王唯红

(1.山东大学药学院，山东 济南 250100;2.山东新华制药股份有限公司，山东 淄博 255005)

吡哌酸(PPA)对革兰阴性杆菌，如大肠杆菌、绿脓杆菌、克雷白杆菌等有较好的抗菌作用。与各种抗生素无交叉耐药性。临床主要用于敏感菌所致急性或慢性肾盂肾炎、尿路感染、膀胱炎、菌痢、中耳炎等。由于现行生产工艺中使用了甲醇、异丙醇、环己烷、DMF，按照《中国药典》2010年版“附录Ⅷ P残留溶剂测定法”和 EP“5.4.RESIDUAL SOLVENTS”的要求，需要对以上溶剂残留量进行测定。

1 仪器与测试条件

1.1 仪器 Agilent 6890N气相色谱仪，配置FID检测器;Agilent G1888顶空进样器。

1.2 色谱条件 色谱柱:DB －624(0.53mm ×30 m，3μm);柱温:初始温度50℃，保温6min;以20℃·min－1升至220℃，保温7.5min;进样口温度:200℃;检测器温度:240℃;载气:N2;流速:5mL·min－1;分流比:1∶1。

1.3 顶空进样器条件 平衡温度:130℃;平衡时间:30min。

1.4 供试溶液 精称样品约0.1 g于20mL顶空瓶中，加入1.0mL DMSO，密封，使溶解，混合均匀。每批样品制备2份。

1.5 标准溶液 配置无水甲醇0.3mg·mL－1、异丙醇0.5mg·mL－1，环己烷 0.39mg·mL－1，DMF 0.088mg·mL－1的DMSO溶液并取1.0mL于20mL顶空瓶中，密封，同法配制6份。

2 方法验证与结果

2.1 专属性 样品和溶剂空白(DMSO)对待测溶剂的测定无明显干扰;标准溶液中出峰顺序依次为甲醇、异丙醇、环己烷和DMF;甲醇、异丙醇、环己烷和DMF的保留时间依次为1.9min，2.9min，5.8min 和 10.0min(见图 1 ～3)。

2.2 系统适用性试验 配置无水甲醇0.3mg·mL－1、异丙醇 0.5mg·mL－1，环己烷 0.39mg·mL－1，DMF 0.088mg·mL－1的DMSO溶液并取1.0mL于20mL顶空瓶中，密封，混合均匀，同法配制6份。按照方法测试，结果见表1。

标准溶液中甲醇、异丙醇、环己烷和DMF相互之间的分离度依次为 6.4、13.8 和 22.9，均大于 3.0;它们的理论塔板数依次为3393，5467，7302 和190557。

2.3 精密度

2.3.1 重复性 标准溶液重复进样6次，甲醇，异丙醇，环己烷和DMF峰面积的RSD依次为0.48%，0.24%，0.09%和0.56%，均小于10.0%。

表1 系统适用性试验数据

图1 标准色谱图

图2 稀释色谱图

图3 样品色谱图

2.3.2 中间精密度 由另一位化验员，同法配制标准溶液进样，甲醇、异丙醇、环己烷和DMF峰面积的RSD依次为0.73%，0.22%，0.25%和 1.3%，均小于 10.0%;且中间精密度项和重复性之间数据无显著性差异。

2.4 线性及范围 甲醇含量在29.4～3523.2 ppm的范围时，它的线性方程为Y=11.7X+19.1，相关系数为0.9999;异丙醇含量在48.7～5844.6 ppm的范围时，它的线性方程为Y=19.1X+29.7，相关系数为0.9999;环己烷含量在36.7～4404.6 ppm的范围时，它的线性方程为Y=146.9X－209.1，相关系数为0.9998;DMF 含量在 8.9 ～1069.2 ppm的范围时，它的线性方程为Y=3.1X+1.9，相关系数为0.9992。每个溶剂的相关系数均大于0.999。

2.5 准确度 甲醇、异丙醇、环己烷和DMF的加样回收率依次为 102.1%，101.1%，99.6% 和 103.8%;每个溶剂的回收率均介于90.0% ～110.0%之间。

2.6 检测限及定量限 甲醇、异丙醇、环己烷和DMF的检测限依次为 0.5 ppm，0.3 ppm，0.1 ppm 和 3 ppm，定量限依次为2 ppm，1 ppm，0.4 ppm 和8 ppm。

2.7 样品检测 随机抽取3批样品按照规定条件检测，结果见表2。

表2 3批样品残留溶剂测定结果

2.8 总结 PPA不易溶于水，所以选择DMSO(二甲基亚砜)作为溶剂，使PPA能够溶于所选择的溶剂中，能够准确测定PPA原料中的溶剂残留量。使用本方法条件测试甲醇、异丙醇、环己烷和DMF均能够完全分离。本方法使用气相色谱法，顶空进样方式，测定结果均符合《中国药典》2010年版残留溶剂测定时相对标准偏差不得大于10%的要求。

通过以上验证，线性范围、灵敏度、精密度等均满足要求，可用于吡哌酸残留溶剂的测定。

［1］盛龙生，何丽一，徐连连，等.药物分析［M］.北京:化学工业出版社，2003.

［2］陈尊庆.气相色谱法与气液平衡研究［M］.天津:天津大学出版社，1991.

［3］王国平.气相色谱基础［M］.北京:科学出版社，1986.