HPLC法测定伸筋片中士的宁与马钱子碱的含量

2011-05-01于建方刘瑞清

药学研究 2011年7期

于建方，刘瑞清

(威海人生药业集团股份有限公司，山东威海 264205)

原标准采用薄层扫描法，测定士的宁的含量。本文参照《中国药典》2010年版(一部)伸筋丹胶囊含量的测定方法［1］，用HPLC法测定伸筋片中士的宁的含量并增加了制剂中马钱子碱的含量测定，对线性关系、精密度、稳定性、重现性及加样回收率等实验进行了研究，分别测定了3批样品，证明该方法准确、简便，重现性好。

1 仪器与试药

日本岛津SPD—10Avp型高效液相色谱仪;马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，编号为110706－200505);士的宁对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，编号为110705－200306);三氯甲烷、甲醇等为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Kromasil C18(4.6mm ×250mm，5μm)，流动相为乙腈－0.01 mol·L－1庚烷磺酸钠与0.02 mol·L－1磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值2.8)(21∶79)，检测波长为260 nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备取马钱子碱对照品约10mg、士的宁对照品约12mg，精密称定，置50mL量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含马钱子碱 20 μg、士的宁 24 μg)。

2.3 供试品溶液的制备取本品(除去糖衣)约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液6mL，混匀，使湿润，放置30min，精密加三氯甲烷50mL，密塞，称定重量，置水浴(水温61～62℃)中回流提取2 h，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 线性关系的考察精密称取马钱子碱对照品 14.00mg、士的宁对照品 16.00mg，置50mL量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。以马钱子碱对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=633125X+10562，R2=0.9946;以士的宁对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程 Y=1E+06X+6594.7，R2=0.9977，见表 1、表 2。

表1 马钱子碱峰面积积分值

表2 士的宁峰面积积分值

结果表明马钱子碱进样量在0.056～0.280 μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系;士的宁进样量在0.064～0.320 μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 仪器精密度实验精密吸取2.2项下对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，共进样6次，测定马钱子碱和士的宁峰面积积分值，结果马钱子碱峰面积RSD为0.58%，士的定峰面积RSD为0.38%，表明仪器精密度良好。

2.6 样品稳定性实验取批号为090102的样品，按2.3所述方法和条件制备供试品溶液，取供试品溶液，每隔60min进样一次，共进样6次，测定马钱子碱和士的宁峰面积积分值，RSD分别为0.65%、0.12%。表明样品在5 h内具有良好的稳定性。

2.7 重现性考察取本品(批号为090102)，除去糖衣，取约2.5 g，精密称定，共取6份，按2.3所述方法和条件提取测定，结果见表3、表4。

表3 马钱子碱重现性实验结果

表4 士的宁重现性实验结果

结果表明此方法的重现性良好。

2.8 加样回收率实验取本品(批号090102，含马钱子碱0.27mg/片，士的宁 0.39mg/片)除去糖衣，取约 1.5 g，精密称定，共取6份，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入一定量的马钱子碱对照品和士的宁对照品，加氢氧化钠试液6mL，混匀，依2.3项所述方法和条件提取，测定，计算.结果见表5、表6。