HBsAg及AFP在肝细胞癌组织中的表达及其相关性

苏士珂，潘 雷，孟凡迎，代学强，周 旭*

(1山东大学附属省立医院，济南250021;2齐河县人民医院)

肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，且其发病率在许多国家呈上升趋势。病因学研究显示，约53%的HCC与HBV感染有关，HBV感染是原发性HCC的重要诱因，但具体致癌机制仍不清楚［1］。甲胎蛋白(AFP)是HCC的重要标志物，在其早期诊断及术后复发诊断方面起重要作用。但血清HBsAg和AFP水平难以准确反映HCC组织状态，易受多种因素的影响。2006年6月～2009年6月，我们测定了40例HCC患者癌组织中HBsAg及AFP的表达情况，并对两者相关性进行了分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 同期外科手术切除的HCC癌组织标本40份(均附癌旁肝组织)，患者中男28例，女12例;年龄17～69岁，平均41.5岁。根据Edmonton［2］分级标准Ⅰ级3例，Ⅱ级13例，Ⅲ级19例，Ⅳ级5例;癌旁肝组织均有肝硬化或不同程度纤维化。设正常肝组织6份为对照。

1.2 癌组织中HBsAg及AFP表达检测 标本均经10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片(厚4 μm)，分别行HE和免疫组织化学染色(SP法)，染色前采用高压法进行抗原修复。结果判定标准:HBsAg及AFP免疫组化染色以细胞质或细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性，其中阳性细胞数＜5%为阴性、6%～25%为+、26%～75%为++、＞76%为+++［3］。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计学处理。计数资料比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 HBsAg及AFP表达 正常肝组织中HBsAg及AFP表达均为阴性。HCC和癌旁肝组织中HBsAg及AFP表达阳性细胞形态有全浆型、大包涵体型、小包涵体型、碎点状及膜型，其中癌旁肝组织阳性细胞形态以大包涵体和全浆型多见，表达强;HCC细胞内以小包涵体型、碎点状及膜型为主，且表达弱［4］。HCC和癌旁肝组织HBsAg表达阳性率分别为70%(28/40)、90%(36/40)，两者比较P＜0.05;其中表达阴性者分别为12、4例，表达为+者分别为7、9例，表达为++者分别为11、15例，表达为+++者分别为10、12例。HCC和癌旁肝组织AFP表达阳性率分别为87.5%(28/40)、82.5%(29/40)，两者比较P＞0.05;其中表达阴性者分别为12、11例，表达为+者分别为8、6例，表达为++者分别为12、13例，表达为+++者分别为8、10例。

2.2 HBsAg、AFP表达的关系 HCC中HBsAg阳性者和阴性者AFP表达阳性率分别为85.73%(24/28)、66.7%(8/12)，两者比较P＜0.05;癌旁肝组织中HBsAg阳性和阴性者AFP表达阳性率分别为68.9%(20/29)、54.5%(6/11)，两者比较P＜0.05。

3 讨论

流行病学资料显示，中国HBV慢性感染男性人群中，至少40%死于HCC，HBV感染与HCC的发生密切相关。廖嫦英、黄水仙等报道原发性肝癌患者HBsAg阳性率为90.2%，比江苏启东县调查结果(94%)略低，比上海调查结果(88.9%)稍高，但三者基本接近，进一步支持HBV与HCC之间存在密切关系。据报道HCC发病率以沿海地区及东南一带较高，可能与上述地区高HBV感染率有关。据统计，全球约半数以上HCC患者发病与HBV感染有关，而国内报道肝癌周围肝组织HBsAg阳性率总体水平为80.2%［5］，提示 HBV感染可能参与了HCC的发生、发展。

本研究显示，正常肝组织中HBsAg及AFP表达均为阴性;HCC和癌旁肝组织HBsAg表达阳性率均较高，其中后者显著高于前者。可能机制:HBV可将其自身DNA整合至宿主肝细胞基因组中，从而在肝细胞癌变中起关键作用［6］;HBV感染者肝细胞中HBV-DNA可产生HBsAg，其中部分HBV-DNA被整合至宿主肝细胞基因组中，致使肝癌组织中亦能检出HBsAg，但整合的后复制效率可能受抑，致使其检出率降低。近年来研究表明，血清HBeAb阳性并非意味组织学转向良好，部分患者体内HBV仍在复制，而且HBeAb阳性者HBV整合机会较HBeAb阴性者大;HBcAb阳性提示HBV复制活跃，使HBVDNA整合到宿主肝细胞基因中的机率升高，因此HCC形成的可能性增加。

AFP是目前公认的诊断HCC的重要指标之一，原发性肝癌患者血清AFP水平与HBV感染有密切关系。此与HBV可通过与肝癌细胞整合，而使肝癌细胞合成AFP的能力增强有关。本研究显示，HCC及癌旁肝组织AFP表达阳性率亦较高(且大部分AFP阳性细胞呈弥漫性分布)，其中前者显著高于后者。提示AFP在HCC及癌旁肝组织中的表达敏感度高，其合成、加工和分泌的主要部位在胞质;HCC细胞及癌旁肝细胞合成AFP后释放入血［7］，血清AFP水平可间接反映HCC细胞合成和加工AFP的能力。此外，本研究显示，HCC及癌旁肝组织HBsAg阳性细胞内肝癌标志物 AFP均显著高于HBsAg阴性细胞。提示HBV可能通过免疫反应引起肝组织损伤［8］，致使肝细胞非典型增生、HCC发生，并最终激发AFP基因重新开放，合成和分泌AFP。

综上所述，HBV感染可能通过诱发肝细胞产生AFP参与HCC发病，具体机制有待进一步研究。

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