浆膜腔积液脱落细胞检查的质量控制

曲灿华,马 雷,李 莹

(佳木斯大学附属第一医院检验科,黑龙江 佳木斯 154003)

浆膜腔积液脱落细胞检查在恶性肿瘤浆膜转移诊断中应用广泛,积液中大多数恶性肿瘤细胞是转移的,而浆膜原发的恶性间皮瘤极少见。该诊断方法简便、快速、准确而被患者接受。诊断过程包括标本的采集送检、制片、染色、镜检、诊断等环节。细胞学诊断首先是鉴别积液的良恶性质,其次识别病变组织类型,同时探讨肿瘤的原发部位[1]。为提高阳性检出率,对各个环节实施质量控制,从以下几个方面进行叙述。

1 标本采集、送检

浆膜腔积液由临床医师采集。采集到的标本应及时送检,最多不能超过 1h,否则其中的各种细胞因自溶而破坏,严重影响诊断,实验室接到标本后应立即离心处理。

2 制片

标本采取自然沉淀和离心沉淀相结合的方法。将标本容器上部液体弃去,取底部标本,分别注入两只试管,每管约10mL,2000r/min,离心 5min为宜。离心速度过高或时间过长,使细胞异常堆集,互相重叠;过低则使细胞不易集中。若血液成分多 ,离心后标本,用吸管将上清液体吸出弃去,取白细胞层涂片(同血涂片)3张,若沉淀物量少,快速将试管底向上弃去上清液,管底沉淀物用脱脂干棉签沾取,在玻片上轻轻印片 2～ 3张,自然干燥后染色。涂片不易过厚或过薄,太厚细胞重叠,太薄细胞稀少,均不适合观片。

3 染色

将自然干燥的标本片,瑞氏—姬姆萨染色,根据涂片厚薄及环境温度,适量加缓冲液及控制染色时间,我们经多年体会,如为血涂片 ,涂片外观呈紫红色 ,镜下细胞核、浆及染色质结构较清晰,适合鉴别肿瘤细胞。

4 镜检

每一标本片,低倍镜下按“弓”字形行走 ,观察全片 ,特别是边缘和尾部,寻找有诊断意义的细胞成分。见异常细胞,转向油镜辩认。

5 诊断

由于浆膜腔积液是自然培养基,细胞在其内可繁殖、生长,也可退化、变性,发生肿胀性退变和固缩性退变。脱落的间皮细胞因时间久而退化呈空泡变性或有些细胞死亡而大量聚集,因此良性细胞形态变化范围较大,较其它涂片内的良性细胞更难与恶性细胞区别。恶性肿瘤细胞呈恶性增殖,失去或改变其基本特征,有时也不易与良性细胞区别,因此,当发现异常细胞时,应从以下几方面进行鉴别:

5.1 恶性肿瘤细胞核增大,直径大于 20 μm、核畸形、核仁增大等特点,n/N大于 0.3(n为核仁最长直径,N为核最长直径)。

5.2 与小淋巴细胞作比较,若异常细胞核大于小淋巴细胞核的 3倍以上 ,提示恶性细胞的可能性大 ,而且具有核染色质浓集成块、核仁增大等特点。小细胞未分化癌以小簇状细胞团分布 ,呈镶嵌状结构,核形不规则,似裸核、核染色质粗、核仁、核膜不明显等特征。

5.3 对于核较大或明显退变,染色质结构不清,呈溶解状态的异常细胞,应与典型的间皮细胞比较 ,若差异明显 ,多提示恶性。若二者有明显的过渡形态,则考虑是异形间皮细胞。在观察时应注意核膜是否清楚、细胞外缘是否明显、染色质结构是否清楚、核仁是否随着核同步增大、胞浆颜色是否偏碱,对其恶性细胞诊断意义最大[2]。

5.4 细胞排列对诊断有一定帮助,细胞排列紊乱、重叠明显、细胞团之间核大小相差 2倍以上,核仁大而清晰,可确定恶性。典型的腺腔样、桑椹样、花边样细胞、印戒样细胞出现时,多提示腺癌;若细胞分散、畸形怪状,如蝌蚪形、蛇形、纤维形、巨大不规则圆形、典型角化细胞出现,并且核增大,核仁特点明显多提示鳞癌;若见裸核、核畸形,如三角形、瓜籽仁状核,成堆成簇聚集在一起,核明显增大,有镶嵌状结构,多提示未分化癌;若大量散在弥散分布巨大间皮细胞,核增大,一般为间皮细胞核 2倍以上,异常核分裂、巨大核仁、核染色质疏松粗颗粒状、核仁位于细胞中央,多提示恶性间皮瘤[2]。

6 诊断的质量保证

①制定相应严格的操作规程,在标本的采集送检、制片、染色、镜检各个环节上严格遵守操作规程。②提高诊断人员的业务素质和责任心,细胞学诊断技术人员应经过 3～5年高水平及标准化培训[3]。③积极与临床医生沟通,掌握患者临床资料,为诊断提供依据。④对细胞学诊断可疑阳性病例,应进一步做相关检查,并尽可能地与病理组织学诊断相对照。⑤建立审核制度,每一例诊断报告应有两位诊断医师签字,避免主观意见。⑥建立会诊制度 ,对疑难标本采取会诊制度。⑦建立标本复查制度,对可疑标本进行复检,及时发现纠正可能出现的误诊。⑧建立随访制度,观察病人的病情变化,以确定诊断的准确性[3]。

总之,浆膜腔积液脱落细胞检查的质量控制惯穿于标本的取材、送检、制片、染色、镜检、诊断等过程,它是没有建立在牢固的、定量的、有统计学数据的基础上[4],更多的取决于人的主观经验,因此,首先应加强业务学习,经常与临床医师沟通,及时反馈患者信息,拓宽知识面,以及与病理组织学相对照,不断提高诊断人员的业务水平;严格操作规程;建立相关制度;尽量避免可能造成诊断误差的各种因素,以提高阳性检出率。

[1]马正中,阚秀,刘淑范.诊断细胞病理学 [M].郑州:河南科学技术出版社,2000,250

[2]王永才.穿刺脱落细胞诊断学 [M].北京:科学技术文献出版社,1993,439

[3]柏长铭.针吸细胞学检查的质量控制 [J].江西医学检验 2004,22(3):248

[4]柏长铭.针吸细胞学检查的质量控制 [J].江西医学检验,2004,22(3):247