大剂量氯沙坦钾对急进性肾炎大鼠肾小管间质纤维化的抑制机制研究

何平红 查 艳 程世平 左 丽

1.贵州省人民医院肾脏内科，2.贵阳医学院免疫干细胞研究室，贵州 贵阳 550002

近年循证医学证实转化生长因子-β1（TGF-β 1），结缔组织生长因子（CTGF）,和热休克蛋白47（HSP47）为肾脏进入纤维化的前驱因子。若能抑制这几种因子的表达，则可以延缓肾脏进入纤维化进程，甚至逆转其纤维化程度。我们通过建立急进性肾炎大鼠模型，观察大剂量氯沙坦钾治疗前后转化生长因子-β1（TGF-β1），结缔组织生长因子（CTGF）,和热休克蛋白47（HSP47）的表达，为血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂在临床上急进性肾小球肾炎的治疗提供实验依据。

1 材料与方法

取20只200g左右雄性成年大鼠，分为急进性肾炎组(N=和15)和正常对照组(N=5)。急进性肾炎组采用切除右侧肾脏，并在第1周、2周静注抗Thy1.1抗体（1.2mg/kg）造模，在第4周建立急进性肾炎模型后分为：阳性对照组（N=5），无药物干预组；低剂量组(N=5）予氯沙坦钾（20mg/L）；高剂量组，予氯沙坦钾（80mg/ L）。分别在第4周、8周检测各组大鼠的24小时尿蛋白、鼠尾血压和血肌酐；4周末予急进性肾炎大鼠行肾活检，8周末将其杀死,取出左肾，留取4周末及8周末部分肾组织做PAS, Masson等组织学标本。部分肾组织于液态下凝固保存-80℃，行免疫组化、Rt-PCR、in situ bybridization等检测TGF-β1、CTGF、HSP47等的分子病理学表达,观察高剂量氯沙坦;低剂量氯沙坦及阳性对照组组织学上肾小球，小管间质纤维化的减少有无统计学的意义。

2 结 果

2.1 收缩期血压、24小时尿蛋白、血肌酐的比较 8周末高剂量组血压明显低于4周末血压,[血压分别为(101±5)mmHg、（135±6）mmHg](P<0.05)。8周末低剂量组尿蛋白较无药物组有显著统计学差异[尿蛋白分别为(108±20.5)mg/24h、(297±96.3)mg/ 24h](P<0.01)。8周末高剂量组尿蛋白较4周末显著减少[尿蛋白分别为(29±6)mg/24h、(156±48.7)mg/ 24h],具有显著统计学差异(P<0.01).8周末高剂量组及低剂量组血肌酐较无药物组明显下降[血肌酐分别为(0.57±0.02) mg/dl、(0.64±0.03)mg/dl、(1.35± 0.21)mg/dl](P<0.05)。

2.2 肾脏病理形态学的比较 4周末肾小球内部分硬化及肾小管间质部分间质纤维化, 8周末无药物组成球性硬化,肾间质小管纤维化明显增多.8周末低剂量组肾小球硬化程度较4周末有所减轻,肾小管间质纤维化程度有所逆转.8周末高剂量组肾小球硬化程度明显减轻，肾小管间质纤维化明显减少,基本恢复正常.

2.3 肾小管间质损伤评分比较 (没有损伤为0分;<25%小管间质损伤为1分;25-50%小管间质损伤为2分;50-75%为3分;75-100%为4分)

表1 各组大鼠各项指标比较

8周末高剂量组损伤评分明显低于4周末及8周末低剂量组,具有统计学差异(P<0.05).而与无药物组相比则具有显著统计学差异(P<0.01).8周末低剂量组损伤评分低于无药物组,具有统计学差异(P<0.05).

2.4 肾脏TGF-β1,CTGF,HSP47的表达的比较

8周末高剂量组及低剂量组TGF-β1表达明显低于4周末及无药物组,具有显著统计学差异(P<0.01).8周末高剂量组CTGF表达明显低于4周末及8周末低剂量组,具有统计学差异(P<0.05).8周末高剂量组及低剂量组CTGF表达明显低于无药物组,具有显著统计学差异(P <0.01).8周末高剂量组HSP47表达低于低剂量组,具有统计学差异(P<0.05).8周末高剂量组HSP47表达明显低于4周末及无药物组,具有显著统计学差异(P<0. 001).8周末低剂量组HSP47明显低于无药物组(P<0. 01).8周末高剂量组及低剂量组CTGF及HSP47较4周末及无药物组明显减少(P<0.01).8周末高剂量组及低剂量组TGF-β1较4周末及无药物组明显减少,具有统计学差异(P<0.05).而8周末低剂氯沙坦钾组CTGF和HSP47的表达仅明显低于无药物组，与第4周组比较无明显的统计学意义。

3 讨 论

肾素-血管紧张素II-醛固酮系统对肾小官间质的纤维化进展有促进作用.转化生长因子-β1(TGF-β 1),连接组织生长因子(CTGF),热休克蛋白47(HSP47)是肾间质小管纤维化的前驱因子.其在损伤的肾间质小管中都有高表达,可促进细胞外基质的增生,导致纤维化的进展.近年来许多研究报道:血管紧张素-II(AT-II)可促进肾小管TGF-β1, CTGF,HSP47的表达.本研究通过大剂量血管紧张素-II 1型受体拮抗剂-氯沙坦钾的投与发现在急进性肾小球肾炎动物模型中,低剂量及高剂量血管紧张素II受体拮抗剂可以明显减少其24小时尿蛋白,可以使血肌酐水平明显降低.可以使损伤肾组织中小管间质纤维化明显减轻.特别是高剂量血管紧张素II 1型受体拮抗剂能使肾小管间质纤维化明显逆转. 血管紧张素II受体拮抗剂可通过降低肾组织TGF-β1,CTGF,HSP47的表达从而减少细胞外基质的生成,减慢纤维化进程.且对肾小管间质纤维化有明显的逆转作用.尤其是大剂量血管紧张素II受体拮抗剂逆转纤维化作用更显著.

1.王海燕,主编.肾脏病学.第三版[M].北京:人民卫生出版社, 2008，801-804.

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